做實(shí)驗(yàn)前要預(yù)習(xí)，實(shí)驗(yàn)后認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，真實(shí)準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果（必須的）

。堅(jiān)持無(wú)菌操作；嚴(yán)禁將實(shí)驗(yàn)物品帶出；進(jìn)實(shí)驗(yàn)室穿白大衣（必須的）

。示教的實(shí)驗(yàn)材料等不要亂動(dòng)，看完后放回原處，在什么地方看的就要放回什么地方。實(shí)驗(yàn)完畢，打掃衛(wèi)生整理好實(shí)驗(yàn)材料，將應(yīng)回收物品放入回收器內(nèi)，關(guān)好水電，然后離開(kāi)（必須的）。微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告于明天中午前收齊按學(xué)號(hào)順序交于A2-624外面的書(shū)架子上，下次實(shí)驗(yàn)課前領(lǐng)回發(fā)放。油鏡的使用：光線(xiàn)要強(qiáng)，應(yīng)將光圈開(kāi)足；用畢要用二甲苯（擦鏡油）清洗物鏡。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)須知邱懷娜A2-6181實(shí)驗(yàn)一微生物的生物性狀/遺傳變異一、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)1、細(xì)菌的基本形態(tài)——球菌、桿菌、弧菌的形態(tài)觀(guān)察 示教2、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)——芽胞、莢膜、鞭毛 示教3、細(xì)菌染色檢查法——革蘭氏染色 1份/組二、化膿性細(xì)菌1、金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌在血平板上的菌落形態(tài)、溶血環(huán)、色素示教2、甲、乙、丙鏈球菌示教3、肺鏈在血平板上的菌落形態(tài)、溶血環(huán) 示教

2一：細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色主要內(nèi)容:細(xì)菌的基本形態(tài)：球菌、桿菌、弧菌（示教）細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)：芽胞、莢膜、鞭毛（示教）細(xì)菌染色檢查法：革蘭氏染色法1片/組3球菌：葡萄球菌螺形菌弧菌：霍亂弧菌螺菌1、細(xì)菌的基本形態(tài)桿菌：大腸桿菌42、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)芽胞——增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)不良環(huán)境的抗性莢膜——抗吞噬、抗損傷、抗干燥鞭毛——運(yùn)動(dòng)器官，單生、雙生、叢生、周生。菌毛——在電鏡下才可以見(jiàn)到。5細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)形態(tài)芽胞莢膜鞭毛肺炎雙球菌的莢膜傷寒桿菌的鞭毛枯草芽孢桿菌的芽胞64.革蘭氏染色的原理G+菌胞壁結(jié)構(gòu)致密。肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易透入。同時(shí)乙醇使細(xì)胞壁脫水形成一道屏障，阻止結(jié)晶紫—碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出。G-菌較為疏松，肽聚糖層很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，致使細(xì)胞壁通透性變大，使結(jié)晶紫--碘復(fù)合物被乙醇溶解析出而脫色。G+菌等電點(diǎn)（PH2~3）比G-菌（PH4~5）低。在相同PH下，G+所帶的負(fù)電荷比G-多。故與帶正電的結(jié)晶紫染料結(jié)合較多，不易脫色.核糖核酸鎂鹽的含量有關(guān):G+多于G-上述兩者中以1更重要，如G+菌胞壁有破損，其染色性由G+G-7涂片干燥固定涂片制備：

涂片------干燥------固定嚴(yán)格無(wú)菌操作涂片薄而均勻

固定時(shí)注意勿將標(biāo)本烤枯固定目的：殺菌，粘附，通透性切忌緊靠火焰,以防菌體變形

8革蘭氏染色法步驟（GramStain）涂片固定A:初染（結(jié)晶紫）１min甩去水珠，吸水紙吸干B:媒染（碘液）１min甩去水珠，吸水紙吸干C:脫色（乙醇）30sec甩去水珠，吸水紙吸干D:復(fù)染（復(fù)紅）１min甩去水珠，吸水紙吸干鏡檢水洗水洗水洗水洗91-2滴結(jié)晶紫初染１min

1-2滴碘液媒染1min2-3滴乙醇脫色30sec1-2滴復(fù)紅復(fù)染1min涂片固定革蘭氏染色法步驟（GramStain）吸水紙印干，鏡檢H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗H2O輕輕沖洗10影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素：菌齡,

G+G-如果細(xì)菌細(xì)胞壁破損

G+G-脫色過(guò)長(zhǎng)G+G-，脫色過(guò)短G-G+結(jié)果:陽(yáng)性菌——藍(lán)紫色

陰性菌——紅色11革蘭氏染色的意義：鑒別細(xì)菌指導(dǎo)用藥了解細(xì)菌的致病性，大多

G+,外毒素，G-內(nèi)毒素12二、化膿性細(xì)菌131.葡萄球菌根據(jù)色素，生化反應(yīng)等不同類(lèi)型，分為三種：主要性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黃色白色白色或檸檬色血漿凝固酶＋－－α溶血素＋－－SPA＋－－甘露醇發(fā)酵＋－－致病性強(qiáng)弱無(wú)14血平板色素檸檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黃色葡萄球菌15溶血現(xiàn)象檸檬色葡萄球菌白色葡萄球菌金黃色葡萄球菌162.鏈球菌屬(streptococcus)鏈球菌分類(lèi)：根據(jù)溶血現(xiàn)象分類(lèi)：甲型溶血性鏈球菌(α-hemolyticstreptococcus)----產(chǎn)生甲型溶血（α溶血），草綠色溶血環(huán)，條件致病菌乙型溶血性鏈球菌(β-hemolyticstreptococcus)----產(chǎn)生乙型溶血（β溶血），透明無(wú)色溶血環(huán)，致病菌丙型溶血性鏈球菌(γ-streptococcus)----無(wú)溶血環(huán)，一般不致病17鏈球菌血平板菌落形態(tài)甲乙丙18Hemolysis

alphabetagamma鏈球菌血平板菌落形態(tài)193.肺炎鏈球菌生物學(xué)性狀形態(tài)與染色G+球菌，菌體矛頭狀，成對(duì)排列，無(wú)鞭毛，芽孢，有莢膜培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高(血平板)菌落：α-溶血，光滑（有毒株），后期呈臍狀（穩(wěn)定期產(chǎn)生自溶酶）抵抗力：對(duì)消毒劑敏感，抗干燥（莢膜）20肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別膽汁溶菌試驗(yàn)原理：肺炎鏈球菌的自溶酶可被膽汁或膽鹽激活，使菌溶解。甲型溶血性鏈球菌不被溶解菊糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：肺炎球菌能發(fā)酵菊糖產(chǎn)酸，而甲型溶血性鏈球菌不能21膽汁溶菌試驗(yàn)菊糖發(fā)酵試驗(yàn)22肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別鑒別項(xiàng)目肺炎球菌甲型溶血性鏈球菌菌落形態(tài)扁平或呈臍狀隆起莢膜有無(wú)膽汁溶菌試驗(yàn)被溶解不被溶解菊糖發(fā)酵試驗(yàn)分解菊糖產(chǎn)酸不分解小白鼠接種死亡存活23實(shí)驗(yàn)一微生物的生物性狀/遺傳變異一、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)1、細(xì)菌的基本形態(tài)——球菌、桿菌、弧菌的形態(tài)觀(guān)察 示教2、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)——芽胞、莢膜、鞭毛 示教3、細(xì)菌染色檢查法——革蘭氏染色 1份/組二、化膿性細(xì)菌1、金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌在血平板上的菌落形態(tài)、溶血環(huán)、色素示教2、甲、乙、丙鏈球菌示教3、肺鏈在血平板上的菌落形態(tài)、溶血環(huán) 示教

24預(yù)習(xí)：實(shí)驗(yàn)二一、細(xì)菌的接種 1、平板劃線(xiàn)分離 1個(gè)/人2、斜面接種