PAGEPAGE10綜述-樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展鄒征云 劉寶瑞南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬南京市鼓樓醫(yī)院腫瘤科,江蘇南京210008[摘要]樹突狀細(xì)胞瘤苗可誘導(dǎo)荷瘤動物的保護(hù)性抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)，這一發(fā)現(xiàn)使腫瘤治療領(lǐng)域倍受鼓舞。本文綜述腫瘤免疫治療中樹突狀細(xì)胞瘤苗的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用進(jìn)展。[關(guān)鍵詞]樹突狀細(xì)胞/免疫學(xué);癌癥疫苗;綜述文獻(xiàn)[中圖分類號]R730.51AdvancesinthePreparationandtheClinicApplicationofDendriticCell-BasedTumorVaccinesZouZheng-yun,LiuBao-rui.DepartmentofOncology,NanjingTowerHospital,FacultyofMedicine,NanjingUniversity,Nanjing210008,China.Abstract:Dendriticcell-basedtumorvaccinescaninducetumorprotectitiveantitumorimmunity,andtheseinspireus.Thispaperreviewsadvancesinthepreparationandtheclinicapplicationofdendriticcell-basedtumorvaccinesfortumorimmunotherapy.KeyWords:dendriticcells/immunology;cancervaccines;reviewliterature樹突狀細(xì)胞（dendriticcell）簡稱DC，是體內(nèi)最有效的專職抗原遞呈細(xì)胞（APC），通過MHCⅠ、Ⅱ類途徑將外源性抗原呈遞給CD3+CD4+及CD3+CD8+TCTL，識別和殺傷腫瘤細(xì)胞；通過IFN-γ等細(xì)胞因子的分泌而抑制腫瘤血管生成；同時(shí)激發(fā)免疫記憶保護(hù)，在宿主再次受到腫瘤細(xì)胞攻擊時(shí)發(fā)揮保護(hù)作用。有關(guān)DC的研究國內(nèi)已有多篇文獻(xiàn)綜述發(fā)表，但集中闡述DC制備過程優(yōu)化及臨床應(yīng)用進(jìn)展的文獻(xiàn)卻較缺乏。本文將近年來有關(guān)樹突狀細(xì)胞瘤苗制備中的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用最新進(jìn)展作一綜述。DCDC南京大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文體內(nèi)大多數(shù)DC來源于骨髓，由骨髓進(jìn)入外周血，再分布到腦以外的全身各個(gè)臟器；數(shù)量極少，僅占外周血單個(gè)核細(xì)胞的11可以從外周血或淋巴組織（巴結(jié)、淋巴液、脾臟）中直接分離獲得；亦可從骨髓、臍血或外周血中CD+前體細(xì)胞、PBMC34中CD+或CD-前體細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得。其中，CD+前體細(xì)胞培養(yǎng)過程中需加入GM-CSF及TNF-14 14 34α；CD+前體細(xì)胞培養(yǎng)過程中需加入GM-CSF及IL-4；CD-前體細(xì)胞培養(yǎng)過程中必須加入GM-14 14CSF、IL-4及TGF-β。直接分離或從前體細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的DC絕大多數(shù)是不成熟DC（imDC）,其表型為CD-，CD-，CD-，CD-/CD-，CD-，CD-，CD-orlow，MHCⅠ+,MHCⅡ+,CDlow,CD-3 11 14 16 56 19 33 40 80 83,CDlow,CD+;imDC體外激發(fā)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)的能力較弱,但具有極強(qiáng)的抗原內(nèi)吞、加86 45RA工處理能力。當(dāng)imDC在攝取抗原或接受到某些刺激（主要是炎性信號如LPS、IL-1、IL-6、CDL、TNF-α等）或在單核細(xì)胞條件培養(yǎng)基（如AIMV）中培養(yǎng)可分化成熟；成熟DC(mDC),其40MHCⅠ、Ⅱ類分子、輔助刺激分子、粘附分子的表達(dá)均顯著提高，如 B7-1（CD）、B7-280（CD）CD、ICAM（CD）CD、與溶酶體相連的膜糖蛋白（LAMP）86 58 54 40CD+,CD+,CD+是DC成熟的標(biāo)志。DC在成熟的同時(shí)發(fā)生遷移，由外周組織進(jìn)入次級淋巴器1a 11c 83官，在此激發(fā)同種混合T淋巴細(xì)胞反應(yīng)；mDC抗原攝取、加工能力大大降低。DC DC與IL-4/GM-CSF:IL-4/GM-CSF是從小鼠骨髓途徑制備DC所必須的重要的細(xì)胞因rGM-CSF/IL-410μg7DC5.7CD+DC2.7倍；髓系CD+/CD+DC11 11c 11b中CD+/CD+DC的量亦有所增加；產(chǎn)生的DC主要集中在TIL-11c 8α4/GM-CSF聯(lián)合體內(nèi)注射是誘導(dǎo)產(chǎn)生大量功能性DC的有效方法[1]。 DCIL-13:Goxe[2]比較了有血清培養(yǎng)基RPMI1640XVIVOAIMVDCAIMVGM-CSFIL-13AIMVGM-CSFIL-4T細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的DC。原因可能是IL-4可促使Th向0ThThDC的形成有抑制作用。IL-13IL-4DC2 2的IL-4Rα，對T淋巴細(xì)胞無影響。DCCDLCDLDCChen[3]B38C1340 4038C13IdCDLDCDC40達(dá)的CD、CD、CD、MHCⅡ表達(dá)上調(diào)，IL-12的分泌量增加，抗Id抗體應(yīng)答水平提40 80 86[第一作者簡介]鄒征云(1972-),女,江蘇姜堰人,主治醫(yī)生,碩士研究生,主要研究方向是惡性腫瘤的免疫治療。 綜述-樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展 高，抗38C13腫瘤的活性明顯增強(qiáng)；而單獨(dú)采用Id負(fù)載DC卻無此種現(xiàn)象發(fā)生。說明CDL連接自體腫瘤抗原脈沖DC能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)的抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)。40DC與FltL:DCFltL，能夠使DC20[4]。3 3DCHSPgp96:gp96的原形物質(zhì)，當(dāng)它與DCCD91

結(jié)合后可誘導(dǎo)DC的成熟，促使DC分泌IL-1βIL-12-1，并上調(diào)DCMHCMHCCD、CD、CD的表達(dá)，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性80 86 40gp96的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)[5]。DCDCThTIL1TIL的抗瘤效應(yīng)大大增強(qiáng)，依據(jù)如下：負(fù)載腫瘤抗原的DC與TIL共同孵育1)TIL219.4-14.3,2)CD+CD-TCR+（CDCD+）細(xì)胞量明3 56 4 8,3T,4)TILIFN-γTNF-αGM-CSFIL-6mRNA增加[6]。奧地利學(xué)者Friedl等[7][8]研究均發(fā)現(xiàn)采用肝癌全細(xì)胞凍融抗原致敏的DCTILTILTerheyden[9]CDL-40CDDCTILCDIFN-γCD+T154 8 4增殖，特異性抗腫瘤效應(yīng)大大增強(qiáng)。這些研究為DC與TIL的聯(lián)合應(yīng)用走向臨床奠定了理論基礎(chǔ)。DCMartin[10]CIK細(xì)胞培養(yǎng)的過程中加入自體DCCIKIL-12CIKDCCIK殺瘤的增強(qiáng)效應(yīng)可能與DCIL-12及DCDC-CIKphLAK[11]。這些均說明了DCCIKDCDC必須負(fù)載腫瘤抗原才能建立抗腫瘤免疫應(yīng)答，不同性質(zhì)的腫瘤抗原負(fù)載DC所誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)強(qiáng)弱不等，有的甚至無效。所以，尋找合適的腫瘤抗原負(fù)載DC尤為重要。 全細(xì)胞性腫瘤抗原:由于目前大多數(shù)腫瘤細(xì)胞抗原類型尚未明確鑒定，因而給予全細(xì)胞性腫瘤抗原由DC細(xì)胞性腫瘤抗原可采用快凍慢融法、照射法、化學(xué)藥物處理法、加熱法等。Schnurr南京大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文等[12]200Gray43℃2h，瘤抗原負(fù)載DC 抗原基因作為腫瘤抗原:大多數(shù)MHC限制性腫瘤抗原肽的半衰期僅2-10h，若要誘導(dǎo)出高水平持久的抗腫瘤免疫效應(yīng)，則要反復(fù)多次回輸負(fù)載腫瘤抗原多肽的DC。人們將DNARNADC，使DCMHCDC的表面，從而更有效的激活T答反應(yīng)。DF/MUC抗原在人類乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等上皮性腫瘤中過度表達(dá)，將3 1MUCRNADCDCMUC1×106DCMUC+/MC381 1 122.1

移植瘤鼠的尾部皮下注射，每周1次，共2次后，可在小鼠腹股溝淋巴結(jié)中檢測到MUC+DC，荷瘤鼠產(chǎn)生了抗MUC+/MC38癌的免疫應(yīng)答反應(yīng)，使腫瘤消退；此外，從小鼠1 1體內(nèi)分離得到的CTL體外對MUC+/MC38[13]。1Heiser[14]RNADCT過程如下：常規(guī)方法從腎癌患者PBMC中制備imDC，在培養(yǎng)的第8天加入自體細(xì)胞RNA，制成腎癌細(xì)胞RNADC1：1012DC到T淋巴細(xì)胞中，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生了大量多克隆的效應(yīng)T+T845%；將效應(yīng)細(xì)胞以40：1的比例與靶細(xì)胞混合培養(yǎng)，靶細(xì)胞包括原發(fā)灶、淋巴結(jié)及髓中的轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞、正常腎組織細(xì)胞及同種異體腎癌細(xì)胞；結(jié)果所產(chǎn)生的多克隆的效應(yīng)T細(xì)胞對原發(fā)及轉(zhuǎn)移腫瘤、異體腫瘤均有較強(qiáng)的殺傷作用，而對正常的腎組織細(xì)胞卻無殺傷作用。結(jié)果提示：1)腫瘤細(xì)胞的表面抗原在正常組織中不表達(dá)或表達(dá)很低,2)腎癌間有共同抗原,3)臨床若采用此方法是否會誘發(fā)產(chǎn)生自身免疫病仍有待進(jìn)一步研究Boczkowski等[15]研究證實(shí)，從黑色素瘤B16/F10.9細(xì)胞株中分離的mRNA擴(kuò)增后轉(zhuǎn)染DC，鼠體內(nèi)注射亦能誘導(dǎo)出多克隆CTL應(yīng)答，對B16/F10.9具有特異性殺傷作用。具體過程是將B16/F10.9 腫瘤細(xì)胞植入鼠腳掌，當(dāng)原發(fā)腫瘤長至直徑5.5-7.5mm時(shí)切除腫瘤天后采用上述瘤苗，每周1次，共3次；結(jié)果，觀察25-30天，對照組鼠均發(fā)生了腫瘤的肺轉(zhuǎn)移，肺重量增加的4倍，且發(fā)生了其他器官轉(zhuǎn)移；而治療組未發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。Boczkowski等還證實(shí)了術(shù)后腫瘤組織冰凍切片中分離的RNA擴(kuò)增后轉(zhuǎn)染DC仍能在體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)。由于術(shù)后大部分患者缺乏腫瘤細(xì)胞來源，因而從腫瘤組織冰凍切片中分離的RNA不失為腫瘤抗原來源的較好途徑。DC瘤苗的臨床應(yīng)用DC與預(yù)后 綜述-樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展 Inoshima等[16]分析132例非小細(xì)胞肺癌患者切除標(biāo)本時(shí)發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）、微血管密度（WVD）、浸潤的DC這三個(gè)因素均對預(yù)后有獨(dú)立的影響作用；其中，VEGFWVDDCVEGFDCVEGFDC臨床應(yīng)用時(shí)DCDC回輸途徑已報(bào)道的有5惡性胸腹水時(shí)胸腹腔注射。其中淋巴管途徑可使DC直接到達(dá)淋巴細(xì)胞富集的淋巴結(jié)，引起混合性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答；瘤體內(nèi)注射可避免體外抗原的不足，均是較好的思路。大量臨床報(bào)道DC106-108DCDCTDCNorthwestHospital等[17]應(yīng)用前列腺癌膜相關(guān)抗原PSM-P1PSM-P2負(fù)載DC325例患者部分緩解例患者病情無變化例患者疾病進(jìn)展率50%；其中19例激素抵抗性患者中有12例（63%）生存期長達(dá)600天，顯著高于不治者（6）Heiser[18]采用自體前列腺癌特異性抗原DCCTLPSA-mRNA轉(zhuǎn)染DC治療晚期前列腺癌安全、有效；Ⅱ136例PSA3腫瘤細(xì)胞被清除。這兩篇報(bào)道均說明DCDCLau[19]tyrosinase368-376gp100作為抗原肽負(fù)載DC1×107，3×1071×10811-216例CR，2例SD，2無任何毒性反應(yīng)發(fā)生。DCMarten等[20]采用自體腫瘤細(xì)胞凍融抗原脈沖DC制備DC151例PR，7例SD，7PD；3DTH等[21]采用電融合技術(shù)將自身腫瘤細(xì)胞與同種異體DCDC174CR，2PR，1MR，2SD4CR3221南京大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文小，轉(zhuǎn)移灶消失；但對大面積病灶患者效果略差。提示腫瘤細(xì)胞與DC融合制成的雜交瘤苗極具應(yīng)用價(jià)值及治療前景。DC黑色素瘤抗原編碼基因（MAGE）在惡性黑色素瘤及胃腸道腫瘤中選擇性高表達(dá)。常規(guī)方法DCMAGE-3DC126384MAGECTL；7[22]。絕大多數(shù)胃腸道腫瘤及肺癌患者血漿CEACEA亦可Itoh[23]CEA652DC10,2DTH6-9CEA652DCDCCEADC與婦科腫瘤手術(shù)及放療難以控制的晚期宮頸癌患者，化療亦未見明顯療效，一年存活率僅10-15%。Santin[24]HPV-18E7DC121DCBrossart[25]DCHER-2/neuMUC1DC了10例患者誘導(dǎo)出明顯的特異性CTL反應(yīng)，且持時(shí)長6MAGE-1DCCEA、MAGE-3CTL說明在乳腺癌及卵巢癌患者體內(nèi)，用單一抗原致敏的DC體內(nèi)注射后可誘導(dǎo)產(chǎn)生針對多種腫瘤抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)。DCTimmerman[26]采用腫瘤特異性免疫球蛋白DC35:108IdT,2CR244571PR，12；17525患者經(jīng)DC4PR，16SD，6PD。說明DCDCAshley[27]B16B16RNADCB16/F1030天甚至80DC16天。治療象發(fā)生。這一資料說明臨床上DC 綜述-樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展 3結(jié)語DC在誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用,DC瘤苗安全無毒，是近10年來腫瘤免疫治療研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。然而采用何種腫瘤抗原形式、采取何種方式負(fù)載DC以誘導(dǎo)出最佳抗腫瘤免疫應(yīng)答效應(yīng)仍有待進(jìn)一步基礎(chǔ)及臨床研究證實(shí)；DC瘤苗與其他效應(yīng)細(xì)胞如CIK細(xì)胞、TIL細(xì)胞間的相互關(guān)系也是非常值得研究的課題?？傊?，DC瘤苗在抗腫瘤免疫治療中極具研究前景及應(yīng)用價(jià)值。參考文獻(xiàn):BasakSK,HaruiA,StolinaM,etal.Increaseddendriticcellnumberandfunctionfollowingcontinuousinvivoinfusionofgranulocytemacrophage-colony-stimulatingfactorandinterleukin-4[J].Blood,2002,99(8):2869-2879.GoxeB,LatourN,ChokriM,etal.Simplifiedmethodtogeneratelargequantitiesofdendriticcellssuitableforclinicalapplications[J].ImmunolInvest,2000,29(3):319-336.ChenHW,HuangHI,LeeYP,etal.LinkageofCD40Ltoaself-tumorantigenenhancestheantitumorimmuneresponsesofdendriticcell-basedtreatment[J].CancerImmunolImmunother,2002,51(6):341-348.FongL,HouY,RivasA,etal.Alteredpeptideligandvaccinationwithligandexpandeddendriticcellsfortumorimmunotherapy[J].ProcNatlAcadSciUSA,2001,98(15):8809-8814.ZhengH,DaiJ,StoilovaD,etal.Cellsurfacetargetingofheatshockproteingp96inducesdendriticcellmaturationandantitumorimmunity[J].JImmunol,2001,167(12):6731-6735.MuldersP,TsoCL,GitlitzB,etal.Presentationofrenaltumorantigensbyhumandendriticcellsactivatestumor-infiltratinglymphocytesagainstautologoustumor: implications for live kidney cancer vaccines[J].Clin Res,1999,5(2):445-454.FriedlJ,StiftA,PaoliniP,etal.Tumorantigenpulseddendriticenhancethecytolyticactivityoftumorinfiltratinglymphocytesinhumanhepatocellularcancer[J].CancerBiotherRadiopharm,2000,15(5):477-486.南京大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文[J].實(shí)用癌癥雜志,2002,17(4):344-346.TerheydenP,StratenP,BrockerEB,etal.CD40-ligateddendriticeffectivelyexpandmelanoma-specificCD8+CTLsandCD4+IFN-gamma-producingcellsfromtumor-infiltratinglymphocytes[J].JImmunol,2000,164(12):6633-6639.MartenA,ZiskeC,SchottkerB,etal.Interactionsbetweendendriticandcytokine-inducedkillercellsleadtoanactivationofbothpopulations[J].JImmunother,2001,24(6):502-510.TongCR,HongB,QiuJY,etal.Significanceofcytogeneticandfluorescenceinsituhybridizationanalysisinevaluatingantichronicmyeloidleukemiaefficacyofdifferentimmuneeffectorcells[J].CancerGenetCytogenet,2002,134(1):21-24.SchnurrM,ScholzC,RothenfusserS,etal.Apoptoticpancreatictumoraresuperiortocelllysatesinpromotingcross-primingofcytotoxicTcellsandactivateNKandgammadeltaTcells[J].CancerRes,2002,62(8):2347-2352.KoidoS,KashiwabaM,ChenD,etal.InductionofantitumorimmunitybyvaccinationofdendriticcellstransfectedwithMUC1RNA[J].JImmunol,2000,165(10):5713-5719.HeiserA,MauriceMA,YanceyDR,etal.HumandendriticcellstransfectedwithrenaltumorRNAstimulatepolyclonalT-cellresponsesagainstantigensexpressedbyprimaryandmetastatictumors[J].CancerRes,2001,61(8):3388-3393.BoczkowskiD,NairSK,NamJH,etal.InductionoftumorimmunitycytotoxicTlymphocyteresponsesusingdendriticcellstransfectedwithmessengerRNAamplifiedfromtumorcells[J].CancerRes,2000,60(4):1028-1034.InoshimaN,NakanishiY,MinamiT,etal.Theinfluenceofdendriticcellinfiltrationandvascularendothelialgrowthfactorexpressionontheprognosisnon-smallcelllungcancer[J].ClinCancerRes,2002,8(11):3480-3486.TjoaBA,LodgePA,SalgallerML,etal.Dendriticcell-basedimmunotherapyforprostatecancer[J].CACancerJClin,1999,49(2):117-128.HeiserA,ColemanD,DannullJ,etal.Autologousdendriticcellstransfectedwithprostate-specificantigenRNAstimulateCTLresponsesagainstmetastaticprostatetumors[J].JClinInvest,2002,109(3):409-417. 綜述-樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備與臨床應(yīng)用進(jìn)展 LauR,WangF,JefferyG,etal.PhaseItrialofintravenouspeptide-pulseddendritic cells in patients with metastatic Immunother,2001,24(1):66-78.MartenA,FliegerD,RenothS,etal.Therapeuticvaccinationagainstmetastaticrenalcellcarcinomabyautologousdendriticcells:preclinicalandoutcomeofafirstclinicalphaseI/IItrial[J].CancerImmunolImmunother,2002,51(11-12):637-644.KuglerA,StuhlerG,WaldenP,etal.Regressionofhumanmetastaticrenalcellcarcinomaaftervaccinationwithtumorcell-dendriticcellhybrids[J].NatMed,2000,6(3):332-336.SadanagaN,NagashimaH,MashinoK,etal.Dendr