BioLogicDuoFlow中高壓層析系統(tǒng)層析原理與操作為什么做蛋白質(zhì)純化？原理與操作純度均一的蛋白質(zhì)才能滿(mǎn)足物理化學(xué)性質(zhì)研究、生物活性測(cè)定、免疫學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析、藥理毒理實(shí)驗(yàn)的要求，以揭示生命科學(xué)的規(guī)律。研究開(kāi)發(fā)、中試生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物用于診斷和治療。實(shí)驗(yàn)室研究A、天然生物樣品純度均一的蛋白質(zhì)純化B、重組基因工程藥物C、蛋白質(zhì)組研究差異蛋白質(zhì)質(zhì)譜測(cè)序克隆表達(dá)分離純化蛋白質(zhì)是生命科學(xué)研究的基本且必要的技術(shù)手段，也是生物制品藥物生產(chǎn)的最重要的工藝步驟！離心沉淀超濾電泳層析(Chromatography)生物分離純化技術(shù)原理與操作Model491，RotoforNote:蛋白質(zhì)分離純化的重要問(wèn)題是如何在純化過(guò)程中保持溫和的條件，從而保證在此過(guò)程中蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和活性不受影響。最廣泛的蛋白質(zhì)分離純化方法

條件溫和維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與活性什么是生物層析

根據(jù)生物分子物理化學(xué)特性的不同而達(dá)到分離極性：polarity(solubility,volatility)HIC,RP

離子特性：ioniccharacteristics(charge)IEX

大小與形狀：size/mass(diffusion,sedimentation)GF

結(jié)構(gòu)特征與活性位點(diǎn)：shape(ligandbinding,affinity)AC

這些特性的區(qū)別使不同生物分子分子在層析的固定相和流動(dòng)相的分配不同而達(dá)到分離原理與操作層析技術(shù)

IonExchange(IEX)－離子交換電荷–

可用于層析的任何步驟，根據(jù)純度要求，包括粗純捕獲、中間純化和最后的精細(xì)純化SizeExclusion(SEC)－分子篩（或凝膠過(guò)濾）分子大小–

用于中間純化、脫鹽和緩沖液交換、最后精細(xì)純化Affinity(AC)－親和生物相互作用–

用于復(fù)雜樣品的最早捕獲或中間純化HydrophobicInteraction(HIC和RP)－疏水和反相疏水相互作用-用于中間純化，去除脂類(lèi)和脂多糖CeramicHydroxyapatite(CHT)&CeramicFluoroapatite(CFT)－羥基磷灰石獨(dú)特分離機(jī)理，包含離子交換和金屬螯合等,可用于層析的任何步驟，根據(jù)純度要求，包括粗純捕獲、中間純化和最后的精細(xì)純化原理與操作原理與操作層析圖第一峰,外水體積,Vo,不與柱中填料相互作用直接從柱中流出。這是樣品中的未結(jié)合物質(zhì)VoVeVt蛋白質(zhì)含量(A280),由UV檢測(cè)器讀出，y軸基線(xiàn)洗脫峰，有些可以很好的分離，有些分得不是很好，有部分交叉時(shí)間或體積，x軸液相層析系統(tǒng)的工作流程用Pump推動(dòng)溶液…各種Valve系統(tǒng)選取溶液控制流向通過(guò)

Column

時(shí)不同蛋白分子與填料作用強(qiáng)度不同因而遷移速度不同從而分開(kāi)…Column洗脫液包含的蛋白….通過(guò)檢測(cè)器確定位置和濃度FractionCollector收集樣品原理與操作液相層析系統(tǒng)儀器結(jié)構(gòu)Maximizer閥系統(tǒng)QuadTec紫外/可見(jiàn)檢測(cè)器Maximizer混合器SV5-4閥AVR9-8閥pH檢測(cè)器DuoFlowBasicDuoFlowQuadTecMaximizerPathfinder

DuoFlow中高壓層析系統(tǒng)工作流程DuoFLow生物相容性100%bio-compatible所有接觸溶液的系統(tǒng)以新型塑料peek為主溶液系統(tǒng)不接觸任何金屬件，避免蛋白變性和吸附化學(xué)穩(wěn)定性化學(xué)穩(wěn)定性基本特征DuoFLowF10梯度泵：20.0ml/minat3500psi(233bar,23MPa)

高壓中流速的泵頭可滿(mǎn)足HPLC高壓液相分析和小規(guī)模制備的要求F40梯度泵：80ml/minat1000psi(66bar,6.6MPa)

中壓高流速的泵頭可滿(mǎn)足大規(guī)模制備，包括中試和生產(chǎn)的要求DuoFLow特色:可更換的雙泵頭只要旋下泵頭前的4根螺絲，將另一泵頭安上即可實(shí)現(xiàn)高壓中流速和中壓高流速的切換DuoFlow可將高壓中流速和中壓高流速兩種儀器的性能通過(guò)獨(dú)特的泵頭更換技術(shù)整合在一臺(tái)儀器中。靈活多樣、功能強(qiáng)大的擴(kuò)展配置DuoFLow特色Easytolearn

Software強(qiáng)大的分析、管理和報(bào)告功能，通過(guò)軟件整合和控制所有硬件:Maximizer,QuadTec,2128,BioFrac,pHMonitor,allvalves……DuoFLow特色MaximizerDuoFLow功能組件Peek材質(zhì)，良好化學(xué)穩(wěn)定性密封的甘汞電極防止電極液干涸甘汞不與混沖液中的金屬離子結(jié)合，防止堵塞響應(yīng)時(shí)間提高，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確和精確PH檢測(cè)器DuoFLow功能組件檢測(cè)范圍：pH0－14檢測(cè)靈敏度：0.01UV、電導(dǎo)檢測(cè)器標(biāo)配254/280nm濾光片檢測(cè)DNA、蛋白214nm+鋅燈選件檢測(cè)肽鏈濾光片選件313nm356nm405nm436nm546nm外接其它檢測(cè)器，如折光儀DuoFLow功能組件WavelengthAbsorbingSpecies206nm214nm224nm245nm254nm260nm280nm313nm365nm405nm550nmCarboxylgroups,esterlinks,amideorpeptidebondsPeptidebondsPeptidebondsProteinsinthepresenceofTrionX-100Nucleotides,NucleotideBases,DNA,RNANucleotides,NucleotideBases,DNA,RNAProteinswithAromaticaminoacidsCertainVitamins,AntibioticswithConjugatedringsystemsSomesteroids,NADH,NADPH,flavoproteins,bacteriochlorophyllswithConjugatedringsystemsMyoglobinwithHemegroupCytochromesDuoFLow功能組件QuadTec14種可選收集架，可以放冰浴，保證樣品活性整合在duoflow中，多種程序(窗口和閥限)收集可用在HR,LP,Econo中BioFracFraction組分收集器DuoFLow功能組件

2xAVR7-3閥構(gòu)建逆向?qū)游鱿到y(tǒng)，用于親和層析

僅需切換第二個(gè)AVR7-3閥位置即可DuoFLow閥系統(tǒng)2xAVR9-8實(shí)現(xiàn)8柱切換DuoFLow閥系統(tǒng)DuoFLow閥系統(tǒng)AVR9-8輔助泵實(shí)現(xiàn)自動(dòng)切換上樣DuoFLow閥系統(tǒng)：柱串聯(lián)去除血清中高豐度蛋白：IgG和HSA以用于2D電泳分析DuoFLow閥系統(tǒng)：柱串聯(lián)利用各種閥構(gòu)建級(jí)聯(lián)層析系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)特定目的A:樣品經(jīng)閥1柱1

閥3閥4收集器B:特定組份經(jīng)閥4閥2Loop柱2閥3、4 收集器前一柱子流出的特定組份直接上第二根柱子二次分離DuoFLow閥系統(tǒng)閥系統(tǒng)：2D-LC（LiquidChromatography）樣品：蛇毒1DColumn：UnoQ強(qiáng)陰離子交換柱2DColumn：Hi-PoreRP318C18反相分析柱1D柱第11組分由閥門(mén)導(dǎo)向樣品環(huán)中，繼續(xù)1D色譜分析，完畢后，自動(dòng)進(jìn)行2D反相柱的平衡，然后進(jìn)樣（1D第11組分），進(jìn)行2D反相分析。第一維色譜，UNOQ1離子交換第二維色譜，RPC18反相，第一維11管組分在第二維分成多個(gè)組分第一維第11管組分1mL經(jīng)過(guò)檢測(cè)器后沒(méi)流到收集器中，而是流到第二維色譜的進(jìn)樣環(huán)中，所以以空白表示，沒(méi)標(biāo)以灰色DuoFLow3XAVR7-3實(shí)現(xiàn)三柱級(jí)聯(lián)前一柱子未結(jié)合的蛋白進(jìn)入第二、三根柱子，三根柱子可以獨(dú)立洗脫第一根柱子獨(dú)立上樣、洗脫，組份經(jīng)換向閥進(jìn)入第二根柱子，獨(dú)立洗脫，組份經(jīng)換向閥進(jìn)入多三根柱子，獨(dú)立洗脫收集DuoFLow閥系統(tǒng)BioLogicDuoFlowBasicSystemBioLogicDuoFlowStandardSystemBioLogicDuoFlowQuadTecBasicSystemBioLogicDuoFlowQuadTecStandardSystemBioLogicDuoFlowMaximizer20SystemBioLogicDuoFlowMaximizer80SystemBioLogicDuoFlowPathFinder20SystemBioLogicDuoFlowPathFinder80System

一套組件，根據(jù)需要配置多種平臺(tái)，組件共享，資源共享…DuoFLowDuoFLow軟件系統(tǒng)非常直觀，易學(xué)簡(jiǎn)單明快，4個(gè)步驟進(jìn)入操作：

BrowserSetupProtocolRun

觀察樣品情況,調(diào)節(jié)色普?qǐng)D和峰高度

orGoDoSomethingElse!2次擊鍵進(jìn)入操作:

BrowserRun

觀察樣品情況,調(diào)節(jié)色普?qǐng)D和峰高度

orGoDoSomethingElse!

DuoFLow軟件系統(tǒng)ManualScreenDuoFLow軟件系統(tǒng)Browser

–EnterUserandMethodNameDuoFLow軟件系統(tǒng)Setup–selecthardwareDuoFLow軟件系統(tǒng)Protocol–entermethodDuoFLow軟件系統(tǒng)PostRunOptions-Activity

DuoFLow軟件系統(tǒng)PostRunOptions–PeakTaggingDuoFLow軟件系統(tǒng)PostRunOptions–TRACECOMPARE層析圖比較

單一柱子單一程序走不同樣品單一樣品和單一程序走不同柱子同一樣品和柱子走不同程序DuoFLow軟件系統(tǒng)DuoFLow軟件系統(tǒng)DuoFLow軟件系統(tǒng)液相層析系統(tǒng)應(yīng)用層析是如何物質(zhì)實(shí)現(xiàn)分類(lèi)

根據(jù)分子物理化學(xué)特性的不同而達(dá)到分離極性：polarity(solubility,volatility)HIC,RP

離子特性：ioniccharacteristics(charge)IEX

大小與形狀：size/mass(diffusion,sedimentation)GF

結(jié)構(gòu)特征與活性位點(diǎn)：shape(ligandbinding,affinity)AC

這些特性的區(qū)別使不同分子在層析的固定相和流動(dòng)相的分配不同而達(dá)到分離

層析技術(shù)在大分子分離純化的應(yīng)用抗體制備生產(chǎn)以及免疫學(xué)研究層析技術(shù)酶工業(yè)生產(chǎn)以及酶學(xué)研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能研究其他研究的進(jìn)行組分分離或者樣品制備等其他生物活性分子功能研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究方面一、結(jié)構(gòu)生物學(xué)和蛋白質(zhì)功能研究均需要高純度的蛋白質(zhì)二、層析技術(shù)是蛋白質(zhì)純化最好的手段三、層析技術(shù)能夠滿(mǎn)足樣品的高純度、高活性的要求蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究策略

選擇基因表達(dá)載體構(gòu)建純化目的蛋白

蛋白質(zhì)結(jié)晶組織提取基因工程細(xì)胞表達(dá).多維核磁共振X射線(xiàn)解析結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)收集

利用層析進(jìn)行蛋白質(zhì)純化是蛋白質(zhì)研究的基礎(chǔ)層析技術(shù)在抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞去除親和捕獲精純過(guò)濾除菌層析純化層析技術(shù)是純化捕獲抗體的最佳手段層析技術(shù)在天然產(chǎn)物分離和中醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用中草藥活性組分分離的研究中草藥活性組分藥理研究中草藥活性成分與蛋白質(zhì)相互作用以及治療機(jī)理的研究

分離技術(shù)扮演中藥角色層析技術(shù)在天然產(chǎn)物分離和中醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用中草藥活性成分在生命科學(xué)中的定位

基因組蛋白質(zhì)