農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第1頁(yè)淋洗液色譜柱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理第二節(jié)液相色譜儀農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第2頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章一、GC與HPLC比較農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第3頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章二、流動(dòng)相基礎(chǔ)要求保持色譜柱穩(wěn)定性，因而與固定相不互溶（延長(zhǎng)柱壽命）不發(fā)生不可逆吸附有適當(dāng)pH值化學(xué)惰性—不與樣品及固定相發(fā)生反應(yīng)。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第4頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章UV：在紫外線區(qū)“透明”

示差：折射率與溶劑有較大差異電化學(xué)檢測(cè)器：電惰性。對(duì)樣品有很強(qiáng)溶解力。清洗與更換方便低價(jià)、毒性小、純度高。1、適合用于所選檢測(cè)器農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第5頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章2.流動(dòng)相選擇有適當(dāng)理化性質(zhì)（沸點(diǎn)、粘度等，盡可能小一些）適當(dāng)強(qiáng)度（分配系數(shù)要適當(dāng)，簡(jiǎn)單樣品可大，復(fù)雜樣品要?。┗旌先軇ㄓ械榷群吞荻戎郑O性適當(dāng)（需依據(jù)溶劑性質(zhì)而定）農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第6頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章3、流動(dòng)相物理參數(shù)溶解度參數(shù)（溶劑極性量度）：與樣品分配比相關(guān)，要適中。沸點(diǎn)：要低些，便于回收分離樣品。粘度：柱效與粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP?；旌先軇┢胀芙档驼扯?。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第7頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章4、混合溶劑可靠改變?nèi)軇┙M成來(lái)調(diào)整溶劑強(qiáng)度等，以適合不容樣品。等度淋洗：淋洗過程中溶劑組成不變，強(qiáng)度恒定，k值在10以內(nèi)可得很好分離。梯度淋洗：淋洗過程中溶劑組成隨時(shí)間而變，普通使強(qiáng)度按程序增加，使組分在最適當(dāng)k值處洗出。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第8頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章5、梯度淋洗使用于極性范圍寬混合物分離。優(yōu)點(diǎn)：提供限單位時(shí)間內(nèi)最大分離度。提升出峰對(duì)稱性減小峰寬降低檢測(cè)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第9頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章問題：要用高純?cè)噭ㄙF）?？赡茉诠潭ㄏ嗌袭a(chǎn)生雜質(zhì)富集，需再生處理（尤其是極性柱），可用10～

30倍柱體積溶劑淋洗。5、梯度淋洗農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第10頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章三、液相色譜柱保養(yǎng)柱穩(wěn)定性與固定相類型及使用情況相關(guān)。為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須進(jìn)行仔細(xì)地保養(yǎng)。是否會(huì)因?yàn)橹庑?yīng)，使分析柱柱效顯著下降？農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第11頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章（一）、預(yù)防堵塞1、必須將流動(dòng)相仔細(xì)地蒸餾、過濾。在流動(dòng)相貯槽與柱之間，使用0.5μm孔徑過濾器。水往往是一個(gè)主要污染源。在水溶液流動(dòng)相（如緩沖液）中，細(xì)菌輕易生長(zhǎng)，可能堵塞篩板。預(yù)防細(xì)菌生長(zhǎng)方法是加入抑制劑，如0.01%NaNO3。顯然，抑制劑不能干擾分離和測(cè)定。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第12頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章（一）、預(yù)防堵塞2、在恒定壓力下，發(fā)覺流量降低，柱子可能個(gè)別堵塞。堵塞最輕易發(fā)生在極窄入口接頭處以及入口、出口篩板處。堵塞后需要仔細(xì)拆洗，去除堵塞物，但必須預(yù)防較強(qiáng)機(jī)械震動(dòng)，預(yù)防用熱手接觸柱子，以擾動(dòng)柱內(nèi)固定相層，使柱效發(fā)生改變。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第13頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章5．要預(yù)防反沖（流動(dòng)相逆向流動(dòng)），不然使固定相層位移，柱效下降。6．柱子兩端用金屬螺帽封閉，保留在純凈有機(jī)溶劑中。應(yīng)該將柱子保留在以下pH范圍內(nèi)水溶液流動(dòng)相中：2<pH<8.5。為了長(zhǎng)久保留，最好用純有機(jī)溶劑（如甲醇）清洗柱子。7．一定要預(yù)防柱子干涸，尤其是硬膠柱。（一）、預(yù)防堵塞農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第14頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章二、液相色譜柱保養(yǎng)8．使用衛(wèi)柱(GuardColumn,亦稱預(yù)柱)。連續(xù)注射含有強(qiáng)滯留(不被洗脫)組分樣品，將使柱效下降，保留值改變，選擇性變壞，柱壽命縮短。為了延長(zhǎng)柱壽命，在進(jìn)樣閥和分析柱之間加上衛(wèi)柱。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第15頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章二、液相色譜柱保養(yǎng)衛(wèi)柱較短(5~10cm)，固定相與分析柱類似。其作用是吸著強(qiáng)滯留組分，預(yù)防對(duì)分析柱污染，保持分析柱性能穩(wěn)定。試驗(yàn)表明，只要衛(wèi)柱與高效、小粒度分析柱聯(lián)用，除了使k’為零組分塔板數(shù)大大降低外，對(duì)k’值較大組分，其柱效下降極少。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第16頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章三、檢測(cè)器農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第17頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章三、檢測(cè)器紫外檢測(cè)器UV-DETECTOR農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第18頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章

二極管陣列檢測(cè)器DIODEARRAYDETECTOR農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第19頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章四、液相色譜儀使用1、流動(dòng)相（2）溶劑要與檢測(cè)器匹配。對(duì)于紫外吸收檢測(cè)器，應(yīng)注意選取檢測(cè)器波長(zhǎng)比溶劑紫外截止波長(zhǎng)要長(zhǎng)。所謂溶劑紫外截止波長(zhǎng)指當(dāng)小于截止波長(zhǎng)輻射經(jīng)過溶劑時(shí)，溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明，它嚴(yán)重干擾組分吸收測(cè)量。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第20頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章（3）高純度。不純?nèi)軇?huì)引發(fā)基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽峰”。（5）低粘度。常見有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度過于低溶劑也不宜采取，例戊烷、乙醚等，它們易在色譜柱或檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡，影響分離。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第21頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章必須做!溶劑前處理過濾：0.45um或更小孔徑濾膜

目標(biāo)：除去溶劑中微小顆粒，防止堵塞色譜柱，尤其是使用無(wú)機(jī)鹽配制緩沖液。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第22頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章目標(biāo)：除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生氣泡氣泡對(duì)測(cè)定影響：

1）柱流量不準(zhǔn)；2）檢測(cè)器基線波動(dòng)脫氣注意點(diǎn)：

1）天天脫氣；2）混合溶劑脫氣時(shí)間不能過長(zhǎng)必須做!溶劑前處理農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第23頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章2、高壓輸液泵1.每次使用后要把泵中緩沖液洗潔凈，預(yù)防鹽沉積，泵要浸在無(wú)緩沖液溶液或有機(jī)溶劑中。2.使用HPLC級(jí)流動(dòng)相試劑。3.使用不銹鋼燒結(jié)吸液濾頭。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第24頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章2、高壓進(jìn)樣閥必須做!每次使用后要沖洗潔凈進(jìn)樣閥中殘留樣品和緩沖鹽。預(yù)防無(wú)機(jī)鹽沉積和樣品微粒磨損閥轉(zhuǎn)子。禁止用!禁止使用氣相色譜那樣尖頭針進(jìn)樣。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第25頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章3、紫外檢測(cè)器每次做1、流過池每次使用后連同色譜柱一起清洗2、使用脫過氣流動(dòng)相,預(yù)防氣泡卡在流過池內(nèi)。經(jīng)常做不定時(shí)使用空流過池校正波長(zhǎng)。農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第26頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章4、操作極限預(yù)防1.禁止在無(wú)流動(dòng)相時(shí)開啟高壓輸液泵.2.設(shè)定泵上限壓力(≤25Mpa)預(yù)防長(zhǎng)久壓力過高損壞泵和進(jìn)樣閥.3.設(shè)定泵下限壓力(0.5~1Mpa)預(yù)防流動(dòng)相抽干和嚴(yán)重泄漏.農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第27頁(yè)5、預(yù)柱與保護(hù)柱從泵來(lái)流動(dòng)相預(yù)柱進(jìn)樣器保護(hù)柱分析柱到檢測(cè)器農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第28頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章使用保護(hù)柱帶整體過濾片保護(hù)柱農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第29頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章步驟1：使用含鹽緩沖液后（如離子對(duì)試劑）應(yīng)用溶解性強(qiáng)溶劑（如水）進(jìn)行沖洗步驟2：先斷開檢測(cè)器，然后用對(duì)來(lái)自樣品中物質(zhì)有強(qiáng)溶解性溶劑進(jìn)行沖洗。對(duì)于反相色譜柱，可使用甲醇，乙睛四氫呋喃，氯仿，庚烷等，在此條件下，應(yīng)防止溶劑pH低于2或高于8若經(jīng)過步驟1和步驟2后，壓力仍沒下降至步驟36、柱堵塞修復(fù)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第30頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章步驟3：斷開檢測(cè)器，將色譜柱反方向放置，然后檢驗(yàn)柱壓（1）若壓力穩(wěn)定下降，至步驟4（2）若壓力不下降，至步驟5步驟4：保持色譜柱反方向連接，用低于0.5ml/min流速?zèng)_洗1小時(shí)若步驟4不能降壓，至步驟56、柱堵塞修復(fù)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第31頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章步驟5：若內(nèi)置過濾器被堵塞，應(yīng)沖洗或更換。柱連接端拆卸或重裝會(huì)造成柱效下降（有效塔板數(shù)下降和不對(duì)稱峰）若步驟5不能降低柱壓，至步驟6步驟6：若進(jìn)口端填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復(fù)，只能經(jīng)過去掉進(jìn)口端個(gè)別填料，重新填充進(jìn)行有限柱效恢復(fù)。（2~5mm）6、柱堵塞修復(fù)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第32頁(yè)

五、FL2200型液相色譜儀1、高壓輸液泵2、高壓進(jìn)樣閥3、液相色譜柱4、紫外檢測(cè)器5、溶劑箱農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第33頁(yè)1、高壓輸液泵輸液系統(tǒng)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第34頁(yè)2、高壓輸液泵農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第35頁(yè)樣品完全溶解在流動(dòng)相中樣品沒有完全溶解過濾樣品，不含固體顆粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱溶劑溶解樣品進(jìn)樣量盡可能小六、常見峰問題1、樣品制備農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第36頁(yè)2、峰形問題（雙峰）柱頭塌陷或柱床運(yùn)動(dòng)。泵頭過濾芯(Frit)個(gè)別堵塞。組份共流出正常雙峰柱頭塌陷農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第37頁(yè)問題：一個(gè)有紫外吸收流動(dòng)相與一個(gè)沒有紫外吸收流動(dòng)相動(dòng)態(tài)混合產(chǎn)生噪音，增加靜態(tài)混合器能夠降低這種噪音。缺點(diǎn):增加了延遲體積靜態(tài)混合器3、噪音農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第38頁(yè)檢測(cè)池臟檢測(cè)池?zé)裟芰肯陆涤杀靡l(fā)脈沖檢測(cè)器上溫度效應(yīng)檢測(cè)池中有氣泡經(jīng)過Time(min.)4、基線噪音農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第39頁(yè)5、基線漂移梯度洗脫引發(fā)溫度不穩(wěn)定（RID）流動(dòng)相臟柱子沒有用流動(dòng)相平衡系統(tǒng)中污染物溢出農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第40頁(yè)6、鬼峰20%～100%MeOH梯度洗脫，沒有進(jìn)樣鬼峰：沒有進(jìn)樣就有色譜峰出現(xiàn)。原因－流動(dòng)相臟農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第41頁(yè)7、柱外擴(kuò)展用較短、窄內(nèi)徑毛細(xì)管連接進(jìn)樣器和色譜柱以及柱子和檢測(cè)器。確認(rèn)連接管接頭都相互匹配。使用死體積小流動(dòng)池減小進(jìn)樣量增加柱外死體積農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第42頁(yè)8、峰擴(kuò)展全部峰都擴(kuò)展柱效降低或有柱塌陷進(jìn)樣體積過大流動(dòng)相粘度大個(gè)別峰擴(kuò)展前一次分析樣品流出物高分子量樣品－蛋白質(zhì)或聚合物農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第43頁(yè)知識(shí)窗拖尾因子ABExcellentt=1.0-1.05Acceptablet=1.2Unacceptablet=2Awfult=4農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第44頁(yè)9、拖

尾柱頭有污染物堆積重金屬反應(yīng)全部峰均拖尾柱子失效小峰在大峰后洗脫出來(lái)個(gè)別峰拖尾二次保留效應(yīng)殘留硅醇相互作用拖尾因子＞1.2農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第45頁(yè)正常前伸10、前伸峰柱子過載小峰在大峰之前洗脫出來(lái)拖尾因子＜0.9農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第46頁(yè)11、負(fù)

峰溶解樣品溶劑經(jīng)過柱子時(shí)平衡被破壞樣品吸收比流動(dòng)相吸收小。RID中最常見正常負(fù)峰農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第47頁(yè)本節(jié)首頁(yè)退出本章七、壓力問題

壓力問題壓力過高壓力過低壓力波動(dòng)???農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第48頁(yè)1、壓力過高

柱子進(jìn)口過濾芯被污染PURGE閥過濾芯被污染

色譜柱被污染

連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞

進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞

進(jìn)樣針或針座被阻塞

壓力測(cè)量使用此閥分割系統(tǒng)農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第49頁(yè)溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞連接管路泄漏或其它備件（泵密封墊）溶劑或流速改變主動(dòng)閥失靈四元百分比閥失靈單向出口閥失靈色譜柱失效(固定相)2、壓力過低壓力測(cè)量溶劑進(jìn)口過濾芯農(nóng)藥殘留測(cè)定方法專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)第50頁(yè)溶劑進(jìn)口過濾芯3