hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第1頁

HIV感染及AIDS試驗(yàn)診療hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第2頁揭開AIDS歷史第一頁MMWR

JUNE5,1981/VOL.30/NO.21MORBIDITYANDMORTALITYWEEKLYREPORThiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第3頁

愛滋病是一個(gè)有病毒引發(fā)全身性傳染病,其定義是血液中查到人類免疫缺點(diǎn)病毒抗體或其它相關(guān)病毒學(xué)指標(biāo),機(jī)體抵抗感染和疾病免疫機(jī)能受到破壞，而發(fā)生一系列對(duì)應(yīng)癥狀．

HIV感染者定義是血液呈HIV陽性而無癥狀感染者。

取得性免疫缺點(diǎn)綜合征(Acquiredimmuno-deficiencySyndrome,AIDS)hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第4頁1.發(fā)展簡(jiǎn)史

1983年,法國(guó)巴斯德研究所分離到一個(gè)新逆轉(zhuǎn)錄病毒，命名為L(zhǎng)AV。1984年美國(guó)國(guó)立癌腫研究所分離出命名為HTLV-Ⅲ病毒。同年，美國(guó)加州大學(xué)分離出AIDS相關(guān)病毒（AIDSRelatedVirus,ARV）.1986年，非洲西部發(fā)覺了另一個(gè)病毒．國(guó)際微生物學(xué)會(huì)及病毒分類學(xué)會(huì)統(tǒng)一命名為HIV。一）生物學(xué)特征hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第5頁2.HIV結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)功效HIV呈球形或卵形，直徑為100-120nm，雙層結(jié)構(gòu)。關(guān)鍵由兩個(gè)相同拷貝RNA及蛋白質(zhì)、反轉(zhuǎn)錄酶、核糖核酸酶及整合酶組成，關(guān)鍵外為病毒衣殼，20面體立體對(duì)稱，有蛋白質(zhì)（P17/P18、P24/P25）。最外層是膜蛋白。包膜上有刺突，含糖蛋白gp120，在雙層脂質(zhì)中有g(shù)p41

。一）生物學(xué)特征hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第6頁HIV病毒顆粒及其結(jié)構(gòu)蛋白和其它毒粒蛋白hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第7頁人類免疫缺點(diǎn)病毒HIVhiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第8頁HIV基因編碼產(chǎn)物及其功效hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第9頁HIV結(jié)構(gòu)蛋白包含:關(guān)鍵蛋白(gag),包膜蛋白(env)聚合蛋白(pol)。關(guān)鍵蛋白包含:P17位于核蛋白與殼層之間基質(zhì)上，包被于包膜蛋白內(nèi)部。P24和P15包被于內(nèi)部核酸外圍核衣殼主要為P24。包膜蛋白為糖蛋白:gp160是前體分子，在感染早期產(chǎn)生，然后分解成gp120和gp41。聚合酶蛋白包含:P66、P51和P31，聚合酶抗原位于病毒核區(qū)內(nèi)，與病毒核酸緊密相關(guān)。其功效為轉(zhuǎn)錄RNA為DNA；整合病毒DNA到宿主細(xì)胞DNA上和切割前體分子使之成為有活性小分子。HIV結(jié)構(gòu)蛋白hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第10頁HIV-1分為M、O、N三組，M組包含A、B、C、D、E、F、G、H、I、J共10個(gè)亞型，加上O、N型共12個(gè)亞型。HIV-2最少有A、B、C、D、E、F等6個(gè)亞型。3.HIV病原特異性：hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第11頁HIV亞型ABCDEFGHIJOHIV2SIVAdaptedfrom:J.Levy"HIVandthePathogenesisofAIDS"HIV1hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第12頁HIV-1亞型全球分布B,a,c,d,f,oA,O,d,g,hB,a,d,e,oBBBBB,f,cB,eBCA,D,eC,a,dC,a,b,eC,E,bE,bB,e,cB,eB,a,c,d,g,hB,iUNAIDSDec.1996非洲及亞洲個(gè)別地域有重組株病毒。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第13頁HIV亞型特點(diǎn)有相對(duì)優(yōu)勢(shì)亞型同一亞型差異很大亞型內(nèi)變異水平估算存在時(shí)間不一樣亞型傳輸路徑和致病性不一不一樣亞型反抗-HIV藥品引發(fā)耐藥不一樣亞型重組hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第14頁屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，復(fù)制速度快可感染人體各種細(xì)胞，造成多器官損傷破壞含有調(diào)整免疫系統(tǒng)功效T4淋巴細(xì)胞在血液、淋巴液、精液、陰道分泌液和乳汁中其抗體無保護(hù)作用對(duì)外界抵抗力弱（低于乙肝病毒）人類免疫缺點(diǎn)病毒hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第15頁1.艾滋病成為全球第四大殺手，傳染性疾病

第一大殺手奪取了超出280萬人性命；2.截止年，15-49歲HIV患病人數(shù)已經(jīng)有4000萬，其中40%是15-24歲青年.(有120萬兒童)3.亞洲人感染艾滋病增加速度最快，尤其是中國(guó)和印度；4.HIV研究仍跟不上其破壞速度；5.治療性控制是能夠到達(dá)。二）流行病學(xué)hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第16頁全球愛滋病感染人數(shù)及感染路徑

依據(jù)聯(lián)合國(guó)愛滋病委員會(huì)和世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年新感染愛滋病帶毒者410萬。(24h全球增加16000感染者)

因HIV死亡人數(shù)超出了280萬,已超出了肺結(jié)核(病死率200萬)和瘧疾(100萬).hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第17頁1.西方國(guó)家HAART使用，患病率和病死率在下降，而發(fā)展中國(guó)家AIDS形勢(shì)嚴(yán)峻；2.以注射吸毒和性傳輸(以異性間傳輸為主)；3.不潔血液采集;4.女性病例上升；母嬰傳輸5.兒童病例增加（<15歲）。多年AIDS流行特點(diǎn)：hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第18頁AIDS流行情況hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第19頁

全國(guó)愛滋病患者匯報(bào)人數(shù)已超出65萬人

年新感染人數(shù)已超出7萬人

31省市自治區(qū)全部發(fā)覺HIV感染者

三種傳輸路徑均已存在全國(guó)愛滋病流行經(jīng)過散發(fā)期（1985-1988）、局部流行期（1989-1994），現(xiàn)已進(jìn)入廣泛

流行期（1995至今）

愛滋病已成為名副其實(shí)第三世界疾病.中國(guó)愛滋病近況：hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第20頁蘇州市自92年起共發(fā)覺艾滋病例600多例,而去年一年新感染者達(dá)190余例,這些統(tǒng)計(jì)數(shù)字充分表明了我國(guó)當(dāng)前真可謂艾滋病病毒感染快速增加期。(體檢發(fā)覺)

聯(lián)合國(guó)艾滋病中國(guó)專題組在北京以《中國(guó)艾滋?。何ｋU(xiǎn)泰坦尼克號(hào)》為題公布了年中國(guó)艾滋病形勢(shì)最新匯報(bào)。匯報(bào)警告說，中國(guó)正處于艾滋病災(zāi)難邊緣，一艘巨輪正在沖向冰山。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第21頁1.HIV借助CD4受體結(jié)合到靶細(xì)胞表面，經(jīng)過靶細(xì)胞內(nèi)吞作用和gp41融合作用，其細(xì)胞膜被穿透，病毒進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)；2.在RT作用下，第一條RNA轉(zhuǎn)錄為DNA，繼之以第一條DNA為模板，形成前病毒；3.在整合酶作用下，形成雙股DNA整合到宿主細(xì)胞中，感染連續(xù)存在；4.前病毒成為潛伏狀態(tài)；5.前病毒DNA復(fù)制，含有新一代病毒遺傳物質(zhì)；6.復(fù)制好新病毒顆粒，再感染別細(xì)胞，而原感染細(xì)胞死亡三）致病機(jī)制hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第22頁2.HIV感染過程hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第23頁HIV感染/AIDS過程窗口期（1-3月）無癥狀攜帶階段，6-15年或更長(zhǎng)人體感染HIV后大多經(jīng)７－１０年潛伏期（愛滋病前期）愛滋病期---機(jī)會(huì)性感染及機(jī)會(huì)性腫瘤HIV感染者及AIDS病人均具傳染性hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第24頁1.“窗口期”:感染HIV到對(duì)應(yīng)抗體產(chǎn)生.2.“急性感染期”

:普通在一月后產(chǎn)生抗體，平均45天。在急性感染期病毒復(fù)制顯著，血中常可出現(xiàn)P24抗原和HIVRNA，也可培養(yǎng)到HIV。3.“潛伏期”:可連續(xù)數(shù)月至17年以上。此時(shí)僅能檢出抗體，但有低濃度HIV復(fù)制。4.AIDS臨床階段。急性HIV感染誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答進(jìn)程HIV感染過程hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第25頁HIV感染過程hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第26頁感染早期，出現(xiàn)病毒血癥，可檢出HIV和HIVRNA；血清陽轉(zhuǎn)后可檢出各種結(jié)構(gòu)蛋白引發(fā)對(duì)應(yīng)抗體，如P24、P55、gp160、gp120、gp41、P51等，均為IgG；抗HIVIgM出現(xiàn)峰度很低，連續(xù)時(shí)間短；抗gag抗體，如P55、P24是常規(guī)篩選和確認(rèn)試驗(yàn)最早檢出抗體；(平均22天)普通均出現(xiàn)血液淋巴細(xì)胞下降。CD4細(xì)胞數(shù)目為最主要反應(yīng)臨床進(jìn)展指標(biāo)；HIV感染者2m和新蝶呤水平升高并與其病程相關(guān)。3.感染后免疫反應(yīng)hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第27頁

HIV感染后血清學(xué)改變1.血清中HIV抗原在感染后3-4周到達(dá)高峰，9-10周逐步降低甚至消失。HIV抗體出現(xiàn)并維持高水平多年，尤以P41時(shí)間最長(zhǎng)；2.HIV抗原消失或極少往往表示病毒潛伏期，在血清中再次大量出現(xiàn)可能已是AIDS晚期。此時(shí)HIV抗體下降。HIV感染血清學(xué)改變hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第28頁4.HIV感染后T細(xì)胞改變CD4+T連續(xù)不停下降，及Th1,Th2亞群失調(diào)．反抗原反應(yīng)性減低．細(xì)胞因子如IFN-r,TNF-a水平升高，產(chǎn)生細(xì)胞因子功效受損，如IL1,IL2能力下降；CD8+T早期有較顯著上升，發(fā)病前1-2年顯著下降，CTL功效下降，但如加IL-2處理可恢復(fù)活性。CD3+T在早期下降不顯著，在AIDS發(fā)病前1-2年出現(xiàn)顯著下降。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第29頁CD4+淋巴細(xì)胞格局hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第30頁HIV病毒培養(yǎng)與分離；HIV毒株分析；HIV核酸測(cè)定；（AbbottLCxHIV-RNA）P24抗原測(cè)定；第四代酶免試劑HIV抗體測(cè)定：常分為初篩和確認(rèn)兩步。初篩試驗(yàn)室和常見初篩方法有：

HIV病毒抗體金標(biāo)快速法（InstantCHEK-HIV1+2）愛滋病毒抗體篩選酶免試劑（MUREXHIV）DetermineHIV1+2+0亞型試紙（Abbott）雙抗原夾心酶免試劑

確認(rèn)試驗(yàn)主要是免疫印跡技術(shù)（WesternBlot,WB）四）HIV試驗(yàn)診療hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第31頁1.HIV抗體檢測(cè)試劑盒1985.3HIV-11990.6HIV-21992.4HIV-1/2敏感度和特異度不停提升．三代ELISA均達(dá)99%以上.1998.三代ELISA檢測(cè)ＨIV1/HIV2(P24Ab)..四代ELISA(ＨIV1/HIV2(P24Ag))

快速診療試劑(膠體金標(biāo)識(shí))hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第32頁EIA實(shí)際試劑盒進(jìn)展代次抗原方法檢測(cè)時(shí)間1全病毒間接>2個(gè)月2重組或多肽間接42-45d3重組+多肽夾心

22d4抗原+抗體夾心

16d(抗原5pg)5基因擴(kuò)增法，基因芯片

6-11.5dhiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第33頁HIV抗體篩查試劑1.MurexHIV1.2.O：

第三代抗體試劑雙抗原夾心法模式兩步法酶標(biāo)法測(cè)試，能夠用來檢測(cè)HIV抗體I型，II型和O亞型。手工/自動(dòng)化酶標(biāo)儀檢測(cè)，用血清/血漿樣本。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第34頁MurexHIV-1.2.O.夾心模式板底樣本結(jié)合物抗原包被（1）辣根過氧化物酶標(biāo)識(shí)抗原（2）模式：雙抗原夾心法。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第35頁MurexHIV-1.2.O抗原HIV-1envHIV-1envHIV-1envHIV-1envHIV-1envHIV-2envHIV-1envHIV-1p24

HIV-1envPODPOD

PODHIV-O

HIV-OHIV-2多肽抗原重組抗原板結(jié)合物CDSDPODHIV-1envHIV-1p24HIV-1p24P41/p36hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第36頁前帶/后帶效應(yīng)機(jī)制兩步?jīng)_洗法---可防止此效應(yīng)低濃度結(jié)合物高濃度結(jié)合物hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第37頁

HOOK效應(yīng)機(jī)制Ag變構(gòu)是二步夾心酶免出現(xiàn)鉤狀HOOK原因．被測(cè)抗原如含有多重決定族與親和性高于包被抗體酶標(biāo)抗體發(fā)生交叉重合結(jié)合，因?yàn)榱Ⅲw效應(yīng)和相互擠壓，Ag分子發(fā)生構(gòu)象改變而從包被抗體上脫落，造成反應(yīng)信號(hào)下降．hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第38頁2.POCT在艾滋病毒檢測(cè)中應(yīng)用快速DetermineHIV1/2O抗體檢測(cè)第三代抗體試劑雙抗原夾心法模式能夠用來檢測(cè)HIV抗體I型，II型和O亞型?？捎檬种?靜脈血，15分鐘出結(jié)果，可用血清/血漿/全血樣本結(jié)果可密封保留。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第39頁hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第40頁hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第41頁hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第42頁快速試劑研制背景就地檢測(cè)（POCT）概念：

急診----手術(shù)，緊急輸血，事故緊急檢測(cè)。（醫(yī)護(hù)人員和病人保護(hù)）篩查概念： 母嬰篩查，就職，移民，性及吸毒犯罪人員體檢等----簡(jiǎn)單易用。日常檢測(cè)： 大，中，小型試驗(yàn)室，及極少許HIV樣本試驗(yàn)室，偏遠(yuǎn)地域，試驗(yàn)室條件或設(shè)備不齊，外出檢測(cè)----方便攜帶，使用。結(jié)果可保留。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第43頁

靈敏度排名及分?jǐn)?shù)產(chǎn)品排名分?jǐn)?shù)GenscreenHIV1/21237MurexHIV1.2.O2235ImxHIV?III3231OrthoHIV1/23231AbbottHIV?Beads4229Murex1/25227OrganonUniII..x5..214-225InnotestHI1/2Last178hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第44頁3.第四代試劑及抗原相關(guān)試劑HIV抗原/抗體聯(lián)合試劑：MurexHIVAg/Ab：第四代試劑

大大提升靈敏度篩查試劑，深入縮短了檢測(cè)“窗口期”。RIADeltaHIVAg/Ab：放免HIV抗原/抗體聯(lián)合試劑。

HIV抗原試劑：MurexHIV抗原單克隆試劑： 臨床上只用于HIV抗原檢測(cè)以早期檢測(cè)樣本，或觀察HIV疾病進(jìn)程。MurexHIV抗原確認(rèn)試劑,確認(rèn)抗原試劑陽性樣本。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第45頁HIV–標(biāo)識(shí)物CDCgroupICDCgroupII/IIICDCgroupIVHIVAg/RNAIgMIgG(env)IgG(p24)HIVAg/RNA第一代第二代第三代第四代抗原補(bǔ)充hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第46頁hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第47頁hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第48頁4.HIV特殊試劑HIV抗體WB確認(rèn)試劑： 為唯一一個(gè)經(jīng)典和全球公認(rèn)抗體確認(rèn)試劑，2..2版本包含有極早期血清轉(zhuǎn)換片段，便于早期樣本確實(shí)認(rèn)。LCxHIV核酸物質(zhì)定性/定量分析：（LCR和PCR技術(shù)） 用于HIV病人遺傳物質(zhì)檢測(cè)，可用于個(gè)別確認(rèn)，和病人治療監(jiān)測(cè)。hiv感染和aids的實(shí)驗(yàn)診斷第49頁結(jié)構(gòu)蛋白HIV-1HIV-2envgp160前體gp140gp120外部gp105/125gp41跨膜gp36/41polP66逆轉(zhuǎn)錄酶p68P51逆轉(zhuǎn)錄酶p53P31內(nèi)切酶p31/34ga