組織學(xué)與胚胎學(xué)

HistologyandEmbryology

組織學(xué)研究?jī)?nèi)容和意義組織學(xué)常用研究方法。組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法組織學(xué)學(xué)習(xí)內(nèi)容一、組織學(xué)的研究?jī)?nèi)容和意義一、組織學(xué)的研究?jī)?nèi)容和意義1.細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)2.組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織4.器官和系統(tǒng)人體3.亞細(xì)胞和分子二、組織學(xué)研究技術(shù)

光鏡技術(shù)：普通光鏡和熒光顯微鏡電鏡技術(shù)：掃描電鏡、透射電鏡組織化術(shù)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

原位雜交技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)和組織工程技術(shù)圖像分析技術(shù)（一）光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope,LM）技術(shù)1.普通組織標(biāo)本的制備技術(shù)石蠟標(biāo)本制片的技術(shù)2.HE染色HE染色：蘇木精（Hematoxylin）伊紅（Eosin）染色堿性染料將嗜堿性物質(zhì)（本身酸性）染成藍(lán)色酸性染料將嗜酸性物質(zhì)（本身堿性）染成紅色細(xì)胞核中的DNA、RNA細(xì)胞質(zhì)中的RNA細(xì)胞質(zhì)、膜性結(jié)構(gòu)（線粒體、溶酶體、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）嗜酸性（Basophilia）嗜堿性（Acidophilia）中性（Neutrophilia）HE染色具有局限性，下圖所示：顯示神經(jīng)元的全貌需嗜銀染色，顯示肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)染色等，稱為特殊染色。肥大細(xì)胞嗜銀染色(二）電子顯微鏡（electronmicroscope,EM）技術(shù)電鏡一般包括透射電鏡和掃描電鏡1.透射電鏡（transmissionelectronmicroscope）：是把標(biāo)本制作成超薄切片，然后進(jìn)行醋酸鈾和枸櫞酸鉛電子染色，觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的技術(shù)。

2.掃描電鏡（scanningelectronmicroscope)：不需要制片，在其表面噴鍍薄層金屬膜或者碳膜觀察組織或細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu)。（三）組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（histochemistryandcytochemistry)定義：介于組織學(xué)與生物化學(xué)之間的邊緣科學(xué)?；驹硎抢没瘜W(xué)試劑與組織樣品中的某些物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成可見的有色沉淀，能在組織切片上定性、定位的顯示某種物質(zhì)的存在與否及其分布狀態(tài)。（三）組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（histochemistryandcytochemistry)對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA、脂類、糖類等化學(xué)物質(zhì)的顯示還學(xué)要組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，它是介于組織學(xué)與生物化學(xué)之間的邊緣科學(xué)?；驹硎抢没瘜W(xué)試劑與組織樣品中的某些物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成可見的有色沉淀，能在組織切片上定性、定位顯示某種物質(zhì)的存在及其分布狀態(tài)。1.過碘酸Schiff反應(yīng)(periodicacidSchiffreaction)：簡(jiǎn)稱

PAS反應(yīng)，是確定組織或細(xì)胞中有無多糖和糖蛋白存在的一種方法。圖片中紅色沉淀為PAS陽性部位（四）免疫組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

如果顯示組織細(xì)胞內(nèi)某一蛋白的存在和分布，需要提純蛋白作為抗原，免疫動(dòng)物產(chǎn)生抗體，提純抗體進(jìn)行標(biāo)記，下圖所示：利用抗原（antigen,Ag），抗體（antibody）特異結(jié)合的原理，用已知標(biāo)記抗體檢測(cè)未知抗原。如下圖所示，顯示組織內(nèi)抗原稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)，棕黃色是免疫組織化學(xué)陽性細(xì)胞。如下圖所示，顯示細(xì)胞內(nèi)抗原稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，不同的標(biāo)記顯色不同，棕黃色為辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，綠色熒光為異硫氰酸熒光素?zé)晒馑貥?biāo)記抗。（五）原位雜交（Insituhybridization）用已知堿基順序的一段核酸片段，標(biāo)上標(biāo)記物，制成探針。在一定條件下使探針與細(xì)胞內(nèi)的待測(cè)核酸按堿基互補(bǔ)原則形成雜交體，再經(jīng)標(biāo)記物的顯示，檢測(cè)核酸的一種方法。（六）組織或細(xì)胞培養(yǎng)

主要利用機(jī)械，或著酶消化法，分離和純化組織中的某種細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板，使之貼壁生長(zhǎng)或懸浮生長(zhǎng)，稱為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；如果培養(yǎng)的是組織塊稱為組織培養(yǎng)技術(shù)。三、組織學(xué)在醫(yī)學(xué)中的重要地位及學(xué)習(xí)方法1.形態(tài)和功能結(jié)合：譬如分泌蛋白為主的細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)含有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，細(xì)胞質(zhì)嗜堿性。2.理論與實(shí)踐（觀察切片）相結(jié)合，譬如理論學(xué)習(xí)和切片觀察相結(jié)合。3.二維和三維結(jié)合，細(xì)胞是立體的，切片是平面的，不同的斷面由不同的形態(tài)，如：一個(gè)細(xì)胞，有的斷面有核，有的只切到胞質(zhì)。4.正常結(jié)構(gòu)與病理結(jié)構(gòu)比較；結(jié)構(gòu)相似的器官比較等。學(xué)習(xí)目標(biāo)：

掌握：組織學(xué)的定義，光鏡技術(shù)、HE染色，電鏡染色的相關(guān)術(shù)語。熟悉：光鏡的特殊染色方法。了解：組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、原位雜交技術(shù)和組織培養(yǎng)、圖像分析技術(shù)。

問題

解決方法

觀察對(duì)象太小

放大

顯微鏡

觀察對(duì)象無色，無反差

制片、染色（HE染色）

觀察對(duì)象生化成