食用菌菌種標(biāo)準(zhǔn)使用指南第1頁/共49頁金科玉律種子法食用菌菌種管理辦法黑木耳菌種GB19169-2003香菇菌種GB19170-2003雙孢蘑菇菌種GB19171-2003平菇菌種GB19172-2003杏鮑菇和白靈菇菌種NY862-2004第2頁/共49頁一、術(shù)語和定義我國食用菌菌種繁育體系菌種culture生長在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。第3頁/共49頁一、術(shù)語和定義母種stockculture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，也稱一級種、試管種。

第4頁/共49頁一、術(shù)語和定義原種motherspawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。也稱二級種。

第5頁/共49頁一、術(shù)語和定義栽培種spawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。栽培種只能用于栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。也稱三級種。

第6頁/共49頁一、術(shù)語和定義拮抗現(xiàn)象antagonism具有不同遺傳基因的菌落間互相抑制產(chǎn)生不生長區(qū)帶或形成不同形式線形邊緣的現(xiàn)象。

第7頁/共49頁一、術(shù)語和定義角變sectoring因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、生長緩慢、菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。第8頁/共49頁一、術(shù)語和定義高溫抑制線（高溫圈）high-temperaturedline食用菌菌種在培養(yǎng)過程中受高溫和通氣不足的不良影響，培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、發(fā)暗或菌絲變稀弱的現(xiàn)象。第9頁/共49頁一、術(shù)語和定義生物學(xué)效率biologicalefficiency單位數(shù)量培養(yǎng)料的風(fēng)干物質(zhì)所培養(yǎng)產(chǎn)生出的子實(shí)體或菌絲體質(zhì)量（鮮重），常用百分?jǐn)?shù)表示。如風(fēng)干料100千克產(chǎn)生了新鮮子實(shí)體50千克，即為生物學(xué)效率50％。

種性charactersofvariety指食用菌的品種特性。一般包括生理特性、農(nóng)藝性狀和商品性狀。第10頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

容器感官檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)菌絲生長速度母種農(nóng)藝性狀和商品性狀第11頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

母種質(zhì)量要求容器：使用玻璃試管和棉塞試管18mm×180mm或20mm×200mm棉塞要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。第12頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

母種質(zhì)量要求感官要求：項(xiàng)目要求容器完整，無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的四分之一至五分之一培養(yǎng)基斜面長度頂端距棉塞40mm－50mm接種量（3-5）mm×（3-5）mm菌種外觀菌絲生長量長滿斜面菌絲體特征潔白濃密、棉毛狀菌絲體表面均勻、平整、無角變菌絲分泌物無黑木耳黃褐色色素菌落邊緣整齊雜菌菌落無斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，顏色均勻、無暗斑、無色素氣味有特有香味，無酸、臭、霉等異味第13頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

項(xiàng)目要求備注菌絲生長狀態(tài)粗壯、豐滿、均勻黑木耳菌絲粗細(xì)不均，常出現(xiàn)根狀分枝鎖裝聯(lián)合有雙孢蘑菇?jīng)]鎖狀聯(lián)合雜菌無第14頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

母種質(zhì)量要求：菌絲生長速度：在PDA上，在適溫下，長滿斜面10d~14d。香菇：24±1℃10d~14d平菇：25±2℃6d~8d黑木耳：26±2℃10d~15d雙孢蘑菇：24±1℃15d~20d母種栽培性狀：供種單位，需經(jīng)試驗(yàn)確證農(nóng)藝性狀和商品性等種性合格后，方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。產(chǎn)量性狀：平菇生物學(xué)效率不低于10％雙孢蘑菇需進(jìn)行EST同工酶類型鑒定，判定與對照相同生物學(xué)效率不低于3％.第15頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

原種質(zhì)量要求容器：使用650ml-750ml，耐126℃高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶，或850ml耐126℃高溫白色半透明符合GB9678衛(wèi)生規(guī)定的塑料菌種瓶；或15cm×28cm耐126℃高溫符合GB9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋；棉塞要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。也可以使用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞第16頁/共49頁二、檢測內(nèi)容原種質(zhì)量要求感官要求：項(xiàng)目要求容器完整，無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離50mm±5mm接種量（4－6）瓶（袋），≥12mm×15mm菌種外觀菌絲生長量長滿容器菌絲體特征潔白濃密、生長健旺培養(yǎng)物表面菌絲體生長均勻、無角變、無高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮培養(yǎng)基表面分泌物無，允許有少量深黃色至棕黃色水珠雜菌菌落無拮抗現(xiàn)象無子實(shí)體原基無允許有少量膠質(zhì)、琥珀色顆粒狀耳芽氣味有特有香味，無酸、臭、霉等異味第17頁/共49頁原基primordium

尚未分化的原始子實(shí)體的組織團(tuán)。第18頁/共49頁項(xiàng)目要求備注菌絲生長狀態(tài)粗壯、豐滿、均勻黑木耳菌絲粗細(xì)不均，常出現(xiàn)根狀分枝鎖裝聯(lián)合有雙孢蘑菇?jīng)]鎖狀聯(lián)合雜菌無原種質(zhì)量要求和母種質(zhì)量要求相同微生物學(xué)要求：第19頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

原種質(zhì)量要求：菌絲生長速度：在適宜培養(yǎng)基上，在適溫（23±2℃）下，長滿容器35d-50d。香菇（23±2℃）35d-50d。平菇（25±2℃）25d-30d。黑木耳（26±2℃）40d-45d。雙孢蘑菇（24±1℃）≤45d。栽培性狀（無），與母種不同第20頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

栽培種質(zhì)量要求：容器：可以使用原種規(guī)定使用的容器；或≤17cm×35cm耐126℃高溫符合GB9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋；第21頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

栽培種質(zhì)量要求感官要求：項(xiàng)目要求容器完整，無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離50mm±5mm接種量（30－50）瓶（袋）菌種外觀菌絲生長量長滿容器菌絲體特征潔白濃密、生長健旺培養(yǎng)物表面菌絲體生長均勻、無角變、無高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮培養(yǎng)基表面分泌物無，允許有少量深黃色至棕黃色水珠雜菌菌落無拮抗現(xiàn)象無子實(shí)體原基無允許有少量淺褐色至黑褐色菊花狀或不規(guī)則膠質(zhì)耳芽氣味有特有香味，無酸、臭、霉等異味第22頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

栽培種質(zhì)量要求和母種、原種質(zhì)量要求相同微生物學(xué)要求：項(xiàng)目要求備注菌絲生長狀態(tài)粗壯、豐滿、均勻黑木耳菌絲粗細(xì)不均，常出現(xiàn)根狀分枝鎖裝聯(lián)合有雙孢蘑菇?jīng)]鎖狀聯(lián)合雜菌無第23頁/共49頁二、檢測內(nèi)容

栽培種質(zhì)量要求：菌絲生長速度：在適宜培養(yǎng)基上，在適溫（23±2℃）下，長滿容器40d-50d。栽培性狀（無），與母種不同，和原種相同第24頁/共49頁三、抽樣

質(zhì)檢部門的抽樣應(yīng)具有代表性；母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時間分批編號；原種、栽培種按菌種來源、制種方法和接種時間分批編號。按批隨機(jī)抽取被檢樣品母種、原種、栽培種抽樣量10％、5％、1％抽樣數(shù)量不得少于10支(瓶、袋)超過100支(瓶、袋)的，可進(jìn)行兩級抽樣.第25頁/共49頁四、試驗(yàn)方法感官檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)菌絲生長速度母種農(nóng)藝性狀和商品性狀留樣第26頁/共49頁四、試驗(yàn)方法感官檢驗(yàn)肉眼觀察必要時使用5×放大鏡鼻嗅第27頁/共49頁母種感官檢驗(yàn)方法（一）1.棉塞或無棉塑料蓋檢測方法肉眼觀察棉塞的材料、潔凈度和干燥與否，手捏棉塞是否松緊適度，是否有彈性,手提棉塞外露部分，棉塞應(yīng)不松動、不脫落。2.培養(yǎng)基灌入量按常規(guī)做培養(yǎng)基斜面的方法目測判斷培養(yǎng)基灌入量，應(yīng)為試管總?cè)莘e的四分之一至五分之一。3.斜面長度用游標(biāo)卡尺測量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距離（mm）。第28頁/共49頁母種感官檢驗(yàn)（二）4.接種塊大小（接種量）

在無菌條件下挑出接種塊,用游標(biāo)卡尺測量接種菌絲面的長和寬，用mm×mm表示，保留整數(shù)位。5.菌種外觀檢測5.1菌絲生長量觀察菌絲是否長滿整個斜面。5.2菌絲體特征肉眼觀察菌絲體的顏色、密集程度，菌絲體是否舒展、旺健及其形態(tài)（棉毛狀、細(xì)羊毛狀等）。第29頁/共49頁母種感官檢驗(yàn)（三）5.3菌絲體表面肉眼觀察菌絲體是否生長均勻、平整，有無角變現(xiàn)象。5.4菌絲分泌物

肉眼觀察有無分泌物，如有則記錄分泌物的顏色和數(shù)量。5.5菌落邊緣肉眼觀察菌落邊緣是否整齊。5.6雜菌菌落用放大鏡觀察菌絲體顏色和外觀形態(tài)，根據(jù)顏色和形態(tài)是否有差異判定是否有雜菌菌落。第30頁/共49頁母種感官檢驗(yàn)（四）5.7蟲（螨）體用放大鏡觀察培養(yǎng)物上有無蟲（螨）體。6.斜面背面外觀根據(jù)培養(yǎng)基是否與試管相脫離判斷是否干縮；在充足的光線下，對著光源方向，觀察顏色是否均勻，有無色素和暗斑。7.氣味在無菌條件下打開棉塞（或無棉塑料蓋），聞試管內(nèi)氣味是否正常。第31頁/共49頁菌種退化在母種階段的表現(xiàn)1.菌落形態(tài)不正常，如本來菌落平展的品種表現(xiàn)為菌落緊皺；絲狀的氣生菌絲變?yōu)檠┗?；氣生菌絲變多或變少甚至沒有了；菌絲色澤變化，如多數(shù)種和品種在母種斜面上菌絲呈白色，退化了品種常呈現(xiàn)微黃色、淺褐色或其他色澤，或由鮮亮變暗淡；2.菌絲倒伏，生長勢弱；3.長速變慢,過快或過慢都是不正常的；4.個體間長速和長相不均一；5.色素的出現(xiàn)。多數(shù)食用菌菌種在母種階段不形成色素,如果出現(xiàn)色素,說明品種退化嚴(yán)重。第32頁/共49頁四、試驗(yàn)方法微生物學(xué)檢驗(yàn)菌絲生長狀態(tài)和鎖狀聯(lián)合用≥10×40的光學(xué)顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個視野。細(xì)菌檢驗(yàn)：取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于(營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液)GB/T4789.28，25℃-28℃振蕩培養(yǎng)1d-2d，觀察培養(yǎng)液是否混濁。若混濁，則有細(xì)菌污染。霉菌檢驗(yàn)：取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于(PDA)GB/T4789.28，25℃-28℃培養(yǎng)5d-7d，菌落出現(xiàn)白色以外的雜色者，或有異味者為霉菌污染。必要時進(jìn)行水封片進(jìn)行觀察。第33頁/共49頁菌絲生長狀態(tài)取干凈載波片，滴1滴無菌水，用無菌操作方法挑取少量菌絲涂于水滴中，蓋上蓋玻片，置于10×40顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)，是否粗壯、豐滿、均勻，是否有鎖狀聯(lián)合。每一檢樣應(yīng)檢查不少于50個視野。第34頁/共49頁鎖狀聯(lián)合第35頁/共49頁雜菌—細(xì)菌檢驗(yàn)根據(jù)不同菌種選擇適用的方法1.1在無菌條件下，挑取少許疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物接種至肉湯培養(yǎng)液中，于25~28℃振蕩培養(yǎng)1~2天，觀察培養(yǎng)液是否渾濁，若渾濁則有細(xì)菌污染，澄清透明為未污染細(xì)菌。1.2在無菌條件下，挑取可疑或有代表性的樣品，接種于肉湯培養(yǎng)基斜面或平板，于25~28℃振蕩培養(yǎng)1~2天，觀察培養(yǎng)基斜面是否有細(xì)菌菌落長出，有細(xì)菌菌落長出者做顯微鏡檢查，確認(rèn)是細(xì)菌，則判定為細(xì)菌污染；否則為無細(xì)菌污染。第36頁/共49頁雜菌—霉菌檢驗(yàn)挑取少許可疑的霉菌污染的培養(yǎng)物或有代表性的樣品接至PDA培養(yǎng)基中，于25~28℃培養(yǎng)4天，出現(xiàn)其他色澤的菌落或其他形態(tài)的菌落或有異味的為霉菌污染物，必要時進(jìn)行水封片鏡檢。第37頁/共49頁第38頁/共49頁四、試驗(yàn)方法菌絲生長速度母種：PDA24℃±1℃原種和栽培種：規(guī)定的培養(yǎng)基（24℃±1℃）計算長滿天數(shù)。第39頁/共49頁母種生長速度檢測方法菌種不同,對母種生長速度的測定方法和要求亦不同：選擇A.1或A.2培養(yǎng)基配方，配制后按菌種生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)要求分裝于試管（18×180mm或20×200mm）中，121℃滅菌30min，取出擺成斜面或制備培養(yǎng)基平板（90mm），冷卻，隨機(jī)抽取10~20支斜面或3個培養(yǎng)基平板置于28℃±2℃培養(yǎng)24小時，確認(rèn)滅菌良好后使用。將待檢菌種接種于PDA培養(yǎng)基或CPDA培養(yǎng)基上，接種塊（3~5）×（3~5）mm，置于斜面中央偏下或培養(yǎng)皿中央，恒溫培養(yǎng)箱適宜條件下培養(yǎng)，計算長滿斜面的天數(shù)。三個重復(fù)。第40頁/共49頁四、試驗(yàn)方法母種農(nóng)藝性狀和商品性狀將被檢母種制成原種。規(guī)定的培養(yǎng)基；菌棒45根接種后，分三組進(jìn)行管理做好栽培記錄與該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對照黑木耳含水量62％±2％雙孢蘑菇含水量68％360kg，分3組，每組2m2雙孢蘑菇酯酶同工酶母種長滿所需時間總產(chǎn)原種長滿所需時間單產(chǎn)菌棒長滿所需時間單菇質(zhì)量第一潮產(chǎn)量最高的時間生物學(xué)效率第二潮產(chǎn)量最高的時間菇形、質(zhì)地、色澤產(chǎn)菇盛期持續(xù)的時間菇蓋直徑、厚度、柄長、柄直徑第41頁/共49頁四、試驗(yàn)方法母種農(nóng)藝性狀和商品性狀判定：以時間計的項(xiàng)目，不得推遲5d（含5d）產(chǎn)量顯著低于對照的；子實(shí)體形態(tài)明顯與對照不同或畸形的第42頁/共49頁四、試驗(yàn)方法留樣各級菌種均要留樣備查留樣數(shù)量：3-5支（瓶），于4℃～6℃時間：香菇：母種、原種7個月；栽培種5個月平菇：母種5個月、原種4個月；栽培種2個月黑木耳：母種、原種6個月；栽培種4個月雙孢蘑菇：母種5個月、原種4個月；栽