白血病淋巴瘤免疫分型第一頁，共34頁。流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,簡(jiǎn)稱FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性的技術(shù)，同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量2第二頁，共34頁。散射光信號(hào)和熒光信號(hào)前向角散射光（FSC,ForwardScatter） 入射激光的前向散射光信號(hào) 細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積側(cè)向角散射光（SSC,SideScatter） 入射激光90角的散射光信號(hào) 細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜性熒光素與特異抗體結(jié)合，熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生的熒光信號(hào)越強(qiáng)。3第三頁，共34頁。CD45/SS示意圖4第四頁，共34頁?？乖植?/p>

表面,胞漿,核內(nèi)是共同檢測(cè)還是分別檢測(cè)?表面胞漿核內(nèi)CD3,CD4,CD8,tetramercytokinesDNACD3,4,8,tetramer+CytokinesCD3,4,8,tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8,tetramer+Cytokines+DNA5第五頁，共34頁。設(shè)門08-033076第六頁，共34頁。設(shè)門全部細(xì)胞門內(nèi)細(xì)胞08-033077第七頁，共34頁。8第八頁，共34頁。血液腫瘤分類進(jìn)程9第九頁，共34頁。白血病免疫分型的理論基礎(chǔ)

白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原標(biāo)志是表達(dá)于正常造血細(xì)胞不同分化發(fā)育階段的分化抗原。雖然是惡性腫瘤細(xì)胞，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對(duì)白血病/淋巴瘤進(jìn)行免疫分型。為了正確分析白血病/淋巴瘤細(xì)胞，必須對(duì)正常造血細(xì)胞分化抗原的表達(dá)模式有充分的了解。只有熟悉正常細(xì)胞的抗原表達(dá)模式，才能辨認(rèn)白血病/淋巴瘤細(xì)胞的存在。10第十頁，共34頁。細(xì)胞類型鑒定Borowitzetal(1993)AJCP100:534-40.Steltzeretal(1993)AnnNYAcadSci667:265-28011第十一頁，共34頁。CD45/SS示意圖正常骨髓細(xì)胞血液腫瘤細(xì)胞老化粒細(xì)胞、噬酸細(xì)胞早幼—成熟粒細(xì)胞M3、CML單核細(xì)胞M4、M5LGL淋巴細(xì)胞CLL、ALL、CLD正常前體細(xì)胞M0、M1、M2、嗜堿性粒細(xì)胞M4、M5、ALL成熟紅細(xì)胞、血小板M6、M7、MM細(xì)胞碎片Pre-B-ALL非血液來源細(xì)胞12第十二頁，共34頁。B淋巴細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine13第十三頁，共34頁。T淋巴細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine14第十四頁，共34頁。粒細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine15第十五頁，共34頁。單核細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine16第十六頁，共34頁。非腫瘤T淋巴細(xì)胞表型17第十七頁，共34頁。非腫瘤B淋巴細(xì)胞表型18第十八頁，共34頁。非腫瘤粒細(xì)胞、單核細(xì)胞表型19第十九頁，共34頁。非腫瘤粒細(xì)胞、單核細(xì)胞表型20第二十頁，共34頁。白血病免疫分型根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列相關(guān)抗原，確定其系列來源。如：淋系T/B、粒單系、紅系、巨核系等。根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列分化其相關(guān)抗原進(jìn)一步分型。如：早前B，前B，普通B…21第二十一頁，共34頁。初治急白分型AcuteLeukemia–BlastsPresent>20%MyeloidLineageCD13+and/orCD117+and/orCD33+CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid,noorminimalmaturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-,CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-,CD14-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic&Monocytic紅系和巨核系的鑒定需要另外增加二線抗體。如:CD71、GPA、CD41、CD6122第二十二頁，共34頁。AML-M323第二十三頁，共34頁。AML-M424第二十四頁，共34頁。AML-M425第二十五頁，共34頁。初治急淋分型AcuteLeukemia–BlastsPresent>20%CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+DualCD4+/CD8+sCD3-CD2+CD5+CD4+orCD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pre-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarlyB-Precursor26第二十六頁，共34頁。B-ALL27第二十七頁，共34頁。Pre-BALL28第二十八頁，共34頁。

白血病免疫分型的價(jià)值確定ALL的細(xì)胞類型（B細(xì)胞或T細(xì)胞）和ALL的分化階段。鑒定AML的特征。對(duì)形態(tài)學(xué)上未分化的急性白血病有助于鑒定細(xì)胞類型。診斷一些少見類型的白血病。如：M6、M7、M0等。29第二十九頁，共34頁。多發(fā)性骨髓瘤（MM）

多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞異常增生性疾病。正常漿細(xì)胞為CD38+/CD45dim/-，使用CD38/CD45雙標(biāo)記檢測(cè)外周血和骨髓標(biāo)本，可以準(zhǔn)確劃定漿細(xì)胞群。通常使用CD38和CD45，結(jié)合輕鏈檢查，對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行分析。另外，正常漿細(xì)胞的表面標(biāo)記為CD19+/CD56-，而多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞通常為CD19-/CD56+。CD138目前認(rèn)為是漿細(xì)胞最特異的指標(biāo)。這樣，使用流式細(xì)胞儀對(duì)外周血或骨髓標(biāo)本進(jìn)行多參數(shù)分析，并計(jì)算異常漿細(xì)胞含量，對(duì)于多發(fā)性骨髓瘤的診斷和治療評(píng)估具有重要意義。

30第三十頁，共34頁。MM31第三十一頁，共34頁。流式免疫表型診斷血液腫瘤的劣勢(shì)1、纖維化、硬化的骨髓可能沒有足夠的細(xì)胞分析。2、細(xì)胞太多聚集或成團(tuán)也可能沒有足夠的分析細(xì)胞。3、硬化的組織也很難得到足夠的分析細(xì)胞。4、組織結(jié)構(gòu)關(guān)系、形態(tài)關(guān)系丟失。5、比例太低的單克隆B細(xì)胞很難檢測(cè)到。32第三十二頁，共34頁。流式免疫表型診斷血液腫瘤的劣勢(shì)6、沒有異常免疫表型的T細(xì)胞淋巴瘤