天然藥物化學課程項目二成分提取分離及鑒定技術(shù)任務(wù)2分離及精制方法-溶劑萃取法溶劑萃取法（一）簡單萃取法（二）逆流連續(xù)萃取法（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法溶劑萃取法溶劑萃取法1．概念利用提取物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而將所需成分萃取出來，達到分離的一種方法。溶劑萃取法2．原理利用混合物中各種成分在兩相互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的差異而達到分離的目的。分配系數(shù)(K)可以用下式表示：式中，Cu表示溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度；CL表示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。溶劑萃取法3．萃取溶劑的選擇一般根據(jù)被萃取化合物的性質(zhì)選擇萃取劑。如果從水提液中萃取親脂性成分，一般選用苯、三氯甲烷或乙醚；萃取偏親水性成分，需改用乙酸乙酯、丁醇等。應(yīng)注意的是，有機溶劑的親水性越大，與水作兩相萃取的效果就越差。對于堿性、酸性、兩性成分的萃取分離，常選用pH梯度萃取法。（一）簡單萃取法（一）簡單萃取法這是一種常用的簡便萃取技術(shù)，小量萃取一般在分液漏斗中進行。（一）簡單萃取法1．操作技術(shù)一般是選擇一個大小適中的分液漏斗，在活塞上涂好潤滑脂，安裝好玻璃塞，旋轉(zhuǎn)數(shù)圈，使密封，然后裝入待萃取物和溶劑，裝入約占分液漏斗約1／3的有機溶劑，蓋好塞子，倒轉(zhuǎn)，緩緩振搖2～3分鐘，放置使其自然分層，靜置，使兩液分開后開啟活塞使下層液放出，而上層液從分液漏斗上端倒出，以免污染。此次為一次萃取，若要反復(fù)萃取數(shù)次，分液漏斗內(nèi)保留上層或下層液需按實際情況來定。（一）簡單萃取法2．適用范圍適用于分配系數(shù)差異較大的成分的分離。（一）簡單萃取法3．特點操作簡便，設(shè)備簡單，實驗室常用。但是有些因素需要注意：①要避免猛烈振搖，以免發(fā)生乳化而影響分層。若已形成乳化，可分出乳化層，再用新的溶劑萃取，或?qū)⑷榛瘜映闉V，或熱敷將乳化層加溫使之破壞；也可較長時間放置并用玻璃棒不時旋轉(zhuǎn)攪拌，有時加入適量氯化鈉或滴人數(shù)滴戊醇也有助于分層。②在兩相溶劑萃取操作中，水提取液的濃度最好在相對密度1.1～1.2之間，過稀溶劑用量大，過濃萃取不完全，影響操作。一般萃取3～4次即可，每次溶劑與水提取液應(yīng)保持一定的比例，第一次萃取時溶劑用量要多一些，一般為水提取液的1／3，以后用量可以少一些，一般為1／4～1／6。（二）逆流連續(xù)萃取法（二）逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法。本方法是利用兩相溶劑密度不同，即密度小的作為分散相逆流連續(xù)穿過密度大的固定相，使某種成分發(fā)生轉(zhuǎn)溶的原理。逆流連續(xù)萃取裝置如下圖所示，是用一根或數(shù)根萃取管串聯(lián)制成。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加兩相溶劑萃取時的接觸面。（二）逆流連續(xù)萃取法逆流連續(xù)萃取裝置圖（二）逆流連續(xù)萃取法1．操作技術(shù)將密度小的相液置高位貯存器中，而密度大者則作為固定相置萃取管內(nèi)，萃取管的數(shù)目可根據(jù)分配效率的需要來決定選用一根、數(shù)根或多根，管內(nèi)填充小瓷環(huán)或小不銹鋼絲圈，開啟活塞，則高位貯存器中液相在高位壓力下流入萃取管，遇瓷圈撞擊分散成細滴，增大萃取接觸面積，兩相溶劑在萃取管內(nèi)可自然分層。最后，可取試樣用色譜、顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)等進行檢查，判斷萃取是否完全。（二）逆流連續(xù)萃取法2．使用范圍適用于各種密度的溶劑萃取。（二）逆流連續(xù)萃取法3．特點操作簡便，萃取較完全。（三）逆流分溶法（三）逆流分溶法逆流分溶法是一種在加樣量一定，容量也一定的兩相溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而使混合物中的各種成分分離的方法。本法與逆流連續(xù)萃取法原理相似。（三）逆流分溶法1．操作技術(shù)將混合物經(jīng)儀器操作，在兩相溶劑系統(tǒng)中進行反復(fù)多次的振搖、靜置、分離、和轉(zhuǎn)移等萃取步驟，使分配系數(shù)不同的成分達到分離。如下圖所示，在多個分液漏斗中裝入密度小的固定相，然后在0號漏斗中加入密度大的流動相，振搖使充分混合，靜置分層后，分出流動相移入1號漏斗，并在0號漏斗中重新補加新鮮的流動相，分別充分振搖混合。重復(fù)上述操作反復(fù)多次，混合物中各成分的分配系數(shù)不同，經(jīng)多次轉(zhuǎn)移后，終應(yīng)在某一管中有最高濃度，故可用此法得到分離。（三）逆流分溶法逆流分溶法原理圖（三）逆流分溶法2．適用范圍適用于分離中等極性、分離因子較小及不穩(wěn)定的物質(zhì)。（三）逆流分溶法3．特點被分離物質(zhì)在兩相溶劑中的分配系數(shù)比較接近，用一般方法不易分離，用本法能取得較好的分離效果。用分液漏斗進行多次轉(zhuǎn)移操作十分不便，可改用逆流分溶儀；因操作較繁，消耗溶劑多，含量微小的成分易損失于大體積的溶劑中，而且反復(fù)多次地振動溶劑系統(tǒng)易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，故式樣極性過大或過小，或分配系數(shù)受溫度或濃度影響過大及易于乳化的溶劑系統(tǒng)均不宜采用此法。（四）液滴逆流分配法（四）液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流色譜法，本法的原理類似于逆流分配法，是利用混合物中多組分在兩相溶液中的分配系數(shù)的差別，由流動相形成液滴，通過作為固定相的液柱而達到分離純化的目的。由于移動相形成液滴，在細的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦、不斷形成新的表面，促進溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配，故其分離效果往往好于逆流分配法，且不會產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。（四）液滴逆流分配法1．操作技術(shù)目前應(yīng)用的裝置如下圖所示，分為三個組成部分。首先由微型泵、移動相溶劑貯存槽和式樣液注入器組成輸液部分，第二部分由300～500根內(nèi)徑約2mm、長度為20～40㎝的萃取管連接而成。組成第三部分的是檢出器及分步自動收集儀。操作時，先將選擇好的兩相溶劑中的固定相充入全部萃取管內(nèi)，然后加樣口注入已溶于（1∶1）兩相溶劑中的待分離試樣，再由微型泵注入移動相，移動相在萃取管中形成液滴，不斷地與固定相有效地接觸、摩擦形成新表面，促使溶質(zhì)在兩相溶劑中實現(xiàn)充分的分配，獲得很高的分離效果，且不易乳化或產(chǎn)生泡沫，若用氮氣驅(qū)動流動相，可避免被分離物質(zhì)的氧化。從萃取管中流出的移動相通過檢出器進行分部收集，完成液滴逆流分配的全過程。（四）液滴逆流分配法液滴逆流分配裝置圖（四）液滴逆流分配法2．適用范圍適用于皂苷類化學成分的分離。（四）液滴逆流分配法3．特點使用溶劑較少，可定量回收試樣，分離效果較逆流分溶法好。由于移動相形