鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液工藝驗證摘要：為驗證鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的制備工藝，在制備過程中對左氧氟沙星、氯化鈉、EDTA-2Na、藥用炭［1］的用量及配制時間、滅菌溫度等可能會影響到成品質量的因素進行嚴格控制，從而對鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的工藝進行再驗證。結果：按照處方工藝配制鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液，通過檢測其性狀為淡黃綠色澄明液體；pH在4.6-4.7范圍之內；裝量在100-102mL(111.66g-113.67g)范圍內；內毒素＜0.6EU/mg；氯化鈉的平均含量為101.50%，相對偏差為0小于2010年版藥典規(guī)定的3%。左氧氟沙星的平均含量為99.40%；相對偏差為0.2%小于2010年版藥典規(guī)定的1.5%；澄明度檢查無白點、白塊、纖維、色點、塑膠屑等不合格品。以上結果表明，按照處方工藝進行生產，生產出的鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液各項指標均符合國家藥典標準，證實該系統(tǒng)能持續(xù)穩(wěn)定地生產出符合質量標準和預定用途的鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液。關鍵詞：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液；制備；性狀；pH；裝量；內毒素；含量；澄明度Levofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjectionprocess

revalidationLIFAN-fan(Class1ofPharmaceuticPreparation,Graduatedin2015)AbstractObjective:levofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjectionprocessinthepreparationofcentre-leftofloxacin,sodiumchloride,EDTA-2na,thedosageofthemedicinalcharcoalandpreparationtime,sterilizationtemperaturewillaffectthequalityofproducts,throughstrictcontroloftheprocessoflevofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjectionprocessforrevalidation.Methods:accordingtotheprescriptioncraftcompoundlevofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjection,goodcontrolduringtheprocessofpreparationmaybealltheexternalfactorsaffectthefinishedproduct.Results:accordingtotheprescriptioncrafttoproducethelevofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjectionofvariousindexesmeetthenationalpharmacopoeiastandards.Conclusion:Carriedoutinaccordancewiththeprescriptioncraftproduction,confirmthesystemsteadyandcanproducemeetqualitystandardsandtheusageoflevofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjection.Keywords:levofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjection,preparation,test左氧氟沙星（LevofloxacinLVFX）是第三代喹諾酮類抗菌藥，是氧氟沙星的左旋體，其抗菌活性約為氧氟沙星的2倍，它的主要作用機制為抑制細菌DNA旋轉酶活性，抑制DNA復制。鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液由靜脈直接輸注入血液，作用迅速直接。用于敏感菌引起的：呼吸系統(tǒng)感染，包括急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、彌漫性支氣管炎、支氣管擴張合并感染、肺炎、扁桃體炎（扁桃體周圍膿腫）；泌尿系統(tǒng)感染，包括腎盂腎炎、復雜性尿路感染等；生殖系統(tǒng)感染，包括急性前列腺炎、急性副睪炎、宮腔感染、子宮附件炎、盆腔炎（疑有厭氧菌感染時可合用甲硝唑）；皮膚軟組織感染，包括傳染性膿皰病、蜂窩組織炎、淋巴管（結炎）、皮下膿腫、肛膿腫等；腸道感染，包括細菌性痢疾、感染性腸炎、沙門菌屬腸炎、傷寒及副傷寒；敗血癥、粒細胞減少及免疫功能低下患者的各種感染。用藥期間可能出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹部不適、腹瀉、食欲不振、腹痛、腹脹、失眠、頭暈、頭痛等癥狀；皮癥、搔癢、紅斑及注射部位發(fā)紅、發(fā)癢或靜脈炎等癥狀。亦可出現(xiàn)一過性肝功能異常，如血清轉氨酶增高、血清總膽紅素增加等。上述不良反應發(fā)生率在0.1?5%之間。偶見血中尿素氮升高、倦怠、發(fā)熱、心悸、味覺異常等［2］。一般均能耐受，療程結束后癥狀可消失。為確保產品質量，確認該產品生產工藝具有可行性和可靠性。經過產品工藝的驗證，確認大容量注射劑鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液在確定的環(huán)境、工藝和操作下，按照本品種的工藝規(guī)程進行生產，能生產出符合質量標準的產品［3,4］；驗證時應對生產過程控制情況進行逐一確認，對生產產品進行取樣、檢驗，根據(jù)生產情況和檢驗結果綜合評價。1材料與方法1.1試驗地點、時間本試驗于2015年1月至4月間在河南科倫藥業(yè)有限公司進行。1.2主要儀器設備FE20型精密pH計（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；UV-1750型紫外-可見分光光度計（島津國際貿易有限公司）；YB-2型澄明度檢測儀（長沙楚天科技有限公司）；JJ1000型高精密電子天平（美國雙杰測試儀器廠）等。1.3主要試劑左氧氟沙星（上虞京新藥業(yè)有限公司，批號：DK20-1411133）；氯化鈉（中鹽宏博集團云夢云虹制藥股份有限公司，批號： 20141218）；依地酸二鈉（湖南爾康制藥股份有限公司，批號：102320140901）；藥用炭（上?；钚蕴繌S，批號：1451286）；鱟試劑（靈敏度0.125EU/mL，廈門鱟試劑廠，批號：141225）；細菌內毒素工作標準品（160EU/支，中國藥品生物制品檢定所，批號：201412），細菌內毒素檢查用水（2mL/支，廈門鱟試劑廠，內毒素含量＜0.01EU/mL，批號：141203）試管、膠管等玻璃器皿均按中國藥典2010年版除細菌內毒素處理。鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，上述試劑使用時都在有效期內。1.4操作方法和過程鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液注冊處方：鹽酸左氧氟沙星2.32g（相當左于氧氟沙星2g），氯化鈉9.00g，EDTA-2Na0.05g，藥用炭0.15g，NaOH適量，加注射用水至1000mL。鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液生產處方：鹽酸左氧氟沙星19.02（相當于左氧氟沙星16.4g），氯化鈉73.8g，EDTA-2Na0.41g，藥用炭1.23g，NaOH適量，加注射用水至820萬mL。1.4.1濃配濃配罐內加入總量20%-50%的注射用水（調節(jié)溫度40-60°C），將稱量好的氯化鈉原料投入濃配罐內，攪拌溶解。加入處方量2/3藥用炭，開啟蒸汽閥攪拌5min，加熱煮沸15min，關閉蒸汽閥，經鈦棒粗濾轉移至稀配罐中。濃配藥液過濾完畢，加注射用水1200kg（分三次加入）對濃配灌進行沖洗，將沖洗水全部泵入稀配灌中。1.4.2稀配接收濃配藥液及三次沖洗水的同時，向稀配灌加注射用水20%-50%，開始攪拌，加入稱量好的左氧氟沙星、EDTA-2Na、攪拌溶解，開啟稀配注射用水閥，向稀配灌內加注射用水至全量，關閉注射用水閥，向稀配灌內加處方量1/3藥用炭，開啟自循環(huán)閥門藥液泵開始攪拌15min。1.4.3灌裝、滅菌調節(jié)灌裝時間，對藥品進行灌裝，采用高溫水浴滅菌法滅菌（115CX30min），滅菌過程中各種參數(shù)的設置：蒸汽壓力0.3?0.5MPa；冷卻水壓力0.3?0.5MPa；壓縮空氣壓力0.5?0.8MPa，純化水壓力控制范圍0.15?0.3MPa。1.4.4大容量注射劑生產工藝大容量注射劑生產工藝流程圖（見圖1）。1.4.5對配制好的鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液進行檢測（1） 性狀：取本品適量采用目視觀察法檢測。（2） pH:用FE20型精密pH計測定藥液的pH［5］（供試品溫度25.1C，室內溫度25C，室內濕度54%）。（3） 裝量：使用美國雙杰JJ1000型高精密電子天平（精確度為0.001g）測量裝量。（4） 內毒素檢測：采用鱟試驗法進行檢測，取供試品用細菌內毒素檢查用水稀釋成12:4:8的溶液，按中國藥典2010年版細菌內毒素檢測方法進行檢測［6,7］。（5） 含量檢測氯化鈉含量檢測：分別精密量取3份鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液10mL，加水40mL，2%的糊精溶液5mL、碳酸鈣0.1g與熒光黃指示液6滴，然后用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液由黃綠色變?yōu)槲⒓t色，每1mL的硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當于5.844mg的氯化鈉（室內濕度54%，滴定液溫度為24C，標定液溫度為21C），其中硝酸銀的濃度為1.003mol/L，記錄消耗滴定液的體積，計算鹽酸左氧氟沙星注射液中氯化鈉的含量。左氧氟沙星含量檢測：采用紫外分光光度法進行檢測［8,9］，對照品溶液的制備（左氧氟沙星對照品來源為中國食品藥品檢定研究院）精密量取左氧氟沙星對照品25.13mL、25.18mL置50mL容量瓶中分別標記為1、2，加0.03mol/L鹽酸溶液并稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中約含左氧氟沙星0.5g的溶液，作為對照品貯備液，精密量取對照品貯備液10mL，置100mL的容量瓶中，加0.1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，再精密量取10mL置100mL的容量瓶中，加0.1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，制成每1mL中約含左氧氟沙星5ug的溶液，搖勻、即得。供試品溶液的制備，精密量取本品 5mL，置100mL容量瓶中，加0.1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5mL，置100mL容量瓶中，加0.1mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，制成每1mL中約含0.5ug的溶液，搖勻，即得供試品溶液濃度為0.5昭/mL［10］。用UV-1750型紫外-可見分光光度計測定其吸光度［1。,11］，計算鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中左氧氟沙星的含量。2結果與分析2.1性狀目視觀察該藥液為黃綠色澄明液體。2.2pH值經測量藥品的pH值在4.6-4.7之間。2.3裝量稱量結果最小重量為111.66g，最大重量為113.67g。計算裝量均在在100-102mL范圍之內。2.4細菌內毒素檢測內毒素檢測采用鱟試驗法進行檢測，檢測結果見表1。由表1可知測定結果呈陰性，藥液無變化，無渾濁絮狀，粘液狀反應。結果表明，鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液經細菌內毒素檢查均合格。表1鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液鱟試驗法檢測結果Table3levofloxacinhydrochlorideandsodiumchlorideinjectionmethodoflimulustestresults供試品Theproductbatch1234陰性對照Negativecontrol陽性對照Positivecontrol1_____+2_____+3_____+2.5含量檢測2.4.1氯化鈉含量的檢測測定結果消耗硝酸銀滴定液的體積分別為V1=15.58mL、V2=15.58mL、V3=15.58mL，測得氯化鈉含量的平均值為101.50%，相對偏差為0小于2010年版藥典規(guī)定的3%。2.4.2左氧氟沙星含量的檢測采用紫外分光光度法測定對照品及供試品的吸光度［12］，測定結果見表2。表2左氧氟沙星吸收值測定結果Table2levofloxacinabsorptionvaluedeterminationresults吸收值測定結果/123平均(Onaverage)Absorptionvalue對照品1(Referencesubstance1)0.4500.4500.4490.449determinati對照品2(Referencesubstance2)0.4490.4500.4490.449onresults供試品1(1ofthetest)0.4580.4570.4580.458供試品2(1ofthetest)0.4570.4570.4580.457根據(jù)含量％=A供忙對/A對*C供測得左氧氟沙星的含量分別為99.34%，99.76%，99.12%，99.54%平均值為99.40%相對偏差為0.2小于2010年版藥典規(guī)定的1.5%。2.6澄明度檢測按照可見異物檢查法進行檢查無白點、白塊、纖維、色點、塑膠屑等。通過對鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的形狀、pH、裝量、內毒素、含量、性狀進行檢測，其檢測結果均符合2010年版藥典規(guī)定，證實該藥品質量可靠，安全可控，可用于工業(yè)化大生產。3討論在GMP生產條件下，成品質量標準能反映對注射劑的一般要求，本試驗對產品的性狀、PH、裝量、內毒素、含量及澄明度進行檢測，檢測結果均符合中國藥典2010年版。證明該生產工藝可行，質量可控，可用于工業(yè)化大生產[13]。鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液配制過程實質是通過對帶菌、帶熱原、帶雜質顏色的原輔料進行溶解、升溫、吸附、過濾、調節(jié)、混合處理后，達到降低微生物負荷、去除熱原、調節(jié)物理參數(shù)(濃度和pH值等)、去除有色雜質等的過程。其中濃配開始到稀配結束時間間隔＜4h，稀配結束到灌裝結束時間間隔＜10h，灌裝開始到滅菌開始時間間隔＜5h，控制工藝時限的目的是要求在規(guī)定時間內完成配制作業(yè)，防止有菌藥液低溫存放時間過長微生物過量繁殖、熱原物質增長。滅菌過程中蒸汽壓力和流量對滅菌升降溫過程有重要影響，冷卻水壓力和流量對冷卻速度有重影響，壓縮空氣壓力和流量對保壓過程的壓力穩(wěn)定起決定性作用，純化水壓力和流量決定注水時間，可能影響生產效率。滅菌溫度和保溫時間是保證滅菌過程達到預期無菌保證水平(F0值＞8的前提)，裝載方式可能影響滅菌效果。對這些關鍵工藝參數(shù)應經確認，保證嚴格執(zhí)行。滅菌過程中輸液瓶焊蓋部位、包裝中的藥液經受高溫、高壓滅菌，可能出現(xiàn)包裝密封被破壞、組分穩(wěn)定性發(fā)生變化等風險。為保證實際滅菌工藝對產品質量影響在可接受范圍內，應通過風險評估方法確立有所有裝載部位的產品質量影響程度，并盡可能在最大風險點取樣檢測。生產過程中對對鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液工藝驗證所使用的關鍵物料進行平衡計算。應根據(jù)實際領、用情況，產品產出情況等綜合因素進行核算，證實實際生產過程控制能力達到工藝規(guī)程預定的物料定額，能保證產出穩(wěn)定。對于鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液生產過程的控制，對藥品生產過程中可能影響產品質量的因素進行了風險識別、評估和控制，包括空調系統(tǒng)、壓縮空氣及工藝用水系統(tǒng)風險評估，制坯、制瓶、配制、洗灌封、滅菌、燈檢和包裝工序風險評估，以及大容量注射劑無菌取樣風險評估。通過這些評估活動，加強了生產過程控制。致謝：本試驗是在河南科倫藥業(yè)有限公司進行的，本論文是在苑麗老師的悉心指導和親切關懷下