醫(yī)學細胞生物學實驗第六次實驗實驗十二正常人非顯帶染色體的核型分析實驗目的1．觀察人類中期染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目。2．了解并掌握常規(guī)染色體的分類、分組標準。3．掌握染色體的核型分析方法。術(shù)語和定義核型（karyotype）核型指一個體細胞中的全部染色體，按其大小，形態(tài)，特征順序排列所構(gòu)成的圖形。核型分析（karyotypeanalysis）將染色體配對、排列后，對其特征進行定量和定性的描述，即核型分析。核型分析通常包括兩個方面的內(nèi)容：1.確定一物種的染色體數(shù)目；2.辨析每條染色體的特征。一般采用分散良好、形態(tài)清楚而典型的有絲分裂中期的染色體標本來完成這項工作。丹佛體制（DenverSystem）

1960年，在美國丹佛市召開第一屆國際細胞遺傳學會議，討論并確立了正常人核型的基本特點，規(guī)定了人類體細胞中各對染色體的識別標準和統(tǒng)一的分組編號，即丹佛（Denver）體制。

Denver體制是識別和分析人類各種染色體病的基礎(chǔ)。丹佛體制規(guī)定1.將人類體細胞的46條染色體按其相對長度、臂率和著絲粒位置等三個參數(shù)予以識別，分為23對。2.其中22對為男女共有，稱常染色體，以其長度遞減和著絲粒位置依次編為1～22號；劃分為7個易區(qū)分的組，即以字母A～G表示7組染色體；另一對與性別形成有關(guān)，隨性別而異，稱為性染色體。3.將副縊痕和隨體作為識別染色體的輔助指標。4.XX代表女性，XY代表男性。人類23對染色體染色體（chromosome）的特征

染色體：通常由長臂和短臂、著絲點和著絲粒、次縊痕和隨體、端粒等幾部分組成。

著絲粒：每條染色體由兩條染色單體組成，兩條染色單體保持連接在一起的初縊痕區(qū)稱為著絲粒又稱主縊痕，它將染色體分為短臂和長臂。有的染色體長臂上還可看到另一些較小的狹窄區(qū)，稱為次縊痕。

隨體：隨體是位于染色體末端的、圓形或圓柱形的染色體片段，通過次縊痕與染色體主要部分相連。它是識別染色體的主要特征之一。根據(jù)隨體在染色體上的位置，可分為兩大類：隨體處于末端的，稱為端隨體；處于兩個次縊痕之間的稱為中間隨體。人類13、14、15、21和22號染色體具有隨體，其余染色體無隨體。隨體次縊痕短臂p著絲粒（主縊痕）短臂p端粒亞中著絲粒中央著絲粒近端著絲粒按著絲粒在染色體上的位置分中央著絲粒染色體：1/2～5/8亞中著絲粒染色體：5/8～7/8近端著絲粒染色體：7/8至末端隨體人類染色體的三種類型人體細胞分裂中期染色體長臂q著絲粒（主縊痕）長臂q次縊痕按著絲粒位置分類染色體長度測定

染色體長度：可在顯微鏡下用測微尺直接測量或在放大的照片上測量得到。通常以微米表示。絕對長度：不穩(wěn)定，只有相對意義。相對長度：是每條染色體的絕對長度與正常細胞全部染色體總長度的比值，通常用百分比表示。是穩(wěn)定的比較可靠的數(shù)據(jù)。著絲粒的位置

著絲粒的位置常用染色體的長臂（q）和短臂（p）的比值來表示。著絲粒的位置著絲粒位置臂比（q

/p）表示符號正中著絲粒中部著絲粒近中著絲粒近端著絲粒端部著絲粒11～1.71.7～3.03.0～7.07.0以上Mmsmstt核型的描述

染色體總數(shù)性染色體正常男性46XY正常女性46XX核型描述方法

在用核型式描述一個核型時，第一項是染色體總數(shù)（包括性染色體），然后是一個逗號，最后是性染色體。下面是一些核型式的舉例：

46，XX正常女性

46，XY正常男性

45，X特納氏綜合征。是女性缺少第二條X染色體。表現(xiàn)在女性，智力正常，體形矮小，但生殖器不成熟，不排卵。

47，XXY克氏綜合征。男子染色體核型中X增多，睪丸的曲細精管發(fā)育不全、變性、纖維化，造成嚴重精子生成障礙，一般無生育能力。染色體觀察及核型分析

染色體顯帶是將染色體經(jīng)過一定程序的處理，并用特定的染料染色后，使染色體在其長軸上顯示出一個個明暗交替或深淺不同的橫紋，這樣的橫紋就叫做染色體的帶。染色體的顯帶技術(shù)分為兩大類：一類為整條染色體的顯帶技術(shù)，如Q帶和G帶，另一類為染色體局部的顯帶技術(shù)，如J帶和C帶。利用Q帶、G帶等顯帶技術(shù)，可以顯示出人類每一條染色體的特異帶型，這為識別和分析每條染色體提供了必要的條件。顯帶染色體染色體觀察及核型分析

染色體標本制作好后，不經(jīng)處理直接染色，一般用Giemsa

染色，使染色體（除著絲粒和次縊痕外）都均勻著色。由于非顯帶染色體標本不能將每一條染色體本身的特征完全顯示出來。所以，只能根據(jù)各染色體的大致特征（大小、著絲粒位置）來識別染色體。因此，非顯帶染色體核型很難準確鑒別出組內(nèi)染色體的序號。非顯帶染色體非顯帶染色體核型分析的意義

在臨床和科研工作中，常需要在光學顯微鏡下對所研究的非顯帶染色體進行初步的觀察分析。這是染色體分析的第一步，通過它可以了解中期染色體的分散情況及標本質(zhì)量的好壞，也可以篩選出染色體數(shù)目異?；蜉^大的形態(tài)異常。它是初學者的一項基本訓練內(nèi)容，也是對標本進行顯微攝影的一個不可少的步驟。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序觀察細胞的標準1．細胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上。2．染色體形態(tài)和分布良好。3．最好無重疊，即使有個別重疊，也要能明確辯認，以免差錯。4．所觀察的細胞處于同一有絲分裂階段，即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣。5．在所觀察的細胞周圍，沒有離散的單個或多個染色體存在，以免影響計數(shù)。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序

觀察方法先用低倍鏡選擇分散良好的中期分裂相，在高倍鏡下再檢查一下中期分裂相的質(zhì)量，分散差的、分散過度的、分散的圓形輪廓不太完整的、有染色體重疊的、染色體著色差的或與其它分裂相太靠近的都不要。轉(zhuǎn)換油鏡對選擇好的分裂相進行仔細觀察。找出符合下列要求的分裂相做核型分析：46條；無重疊；形態(tài)、大小適中，著絲點位置清晰。未完全壓縮，染色體過長，著絲點位置不明顯染色體壓縮過度，太短，長短臂不易區(qū)分染色體過分聚集，重疊聚集、重疊、過度壓縮染色體數(shù)目不夠46條無重疊形態(tài)、大小適中，著絲點位置清晰46條無重疊形態(tài)、大小適中，著絲點位置清晰染色體的基本形態(tài)特征及分析順序

觀察統(tǒng)計方法按染色體自然分布的圖形大致分為幾個區(qū)域，分別計數(shù)每區(qū)的染色體條數(shù)，然后加起來即是該細胞的染色體總數(shù)。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序1.顯微鏡觀察標準：統(tǒng)計10～20個細胞的染色體。2.顯微照片分析：

1）染色體計數(shù)；

2）同源染色體進行配對（大小、著絲點位置、有無隨體），剪下染色體，按從長到短的順序排列；

3）染色體排列分組：短臂向上、長臂向下，著絲點在一條直線上，如全長相等，則按短臂長度順序排序，長者在前。性染色體一律排在最后；

4）貼成一完整的染色體核型圖。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序首先確定A組：A組是七組染色體中最大的一組。A組包括三對，即第1~3號6條染色體。第1號為最大、是中央著絲粒染色體，長臂近側(cè)有次縊痕；第2號第二大、亞中央著絲粒染色體；第3號第三大，是中央著絲粒染色體。比1號小三分之一。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序接著確定B組：

B組二對，即第4～5號（4條）染色體，較大，均為亞中著絲點，兩者不易區(qū)分開。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序第三確定G組：

G組二對，即第21～22號4條染色體，是最小的一組。最小的近端著絲粒染色體，短臂末端有隨體，長臂常呈分叉狀，21號稍小于22號。

Y染色體被隸屬于G組。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序Y染色體：形態(tài)和大小，跟G組染色體相似。它有以下幾個特征：1.呈現(xiàn)異固縮狀態(tài)；2.Y染色體長臂常平行靠攏，此點為Y染色體與21、22號染色體鑒別的重要標志；3.在許多細胞中，在其長臂上可見到次縊痕；4.一般來說，它比第21、22染色體要長一些；5.沒有隨體；6.長臂的端部模糊不清，呈“細毛狀”。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序第四確定F組：

F組二對，即第19～20號4條染色體，染色體比G組稍大（最小的）；均為最小的中央著絲點，呈“梅花”狀。易與其它組區(qū)分，但組內(nèi)兩對染色體不易區(qū)分。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序第五確定D組：

D組三對，即第13～15號6條染色體，中等大小。為最大近端著絲粒染色體，短臂末端有隨體。彼此間不易區(qū)分。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序第六確定E組：

E組三對，即第16～18號6條染色體，較?。ū菴組小），第16號是中央著絲點，長臂上有一次縊痕；17、18號是亞中著絲點，后者的短臂較短。ABCDEFG染色體的基本形態(tài)特征及分析順序余者為C組：

C組包括7對常染色體和1對X染色體。按大小順序依次排列，均是亞中著絲點；該組染色體數(shù)目多，它們的大小相差不大，在常規(guī)標本中是最難將它們一一識別的。

9號染色體的長臂有一次溢痕，從著絲粒處延伸到長臂的中部。有時11號的長臂也會發(fā)現(xiàn)有次溢痕，位置在長臂的1/4～1/3處。12號是C組中最小的1對，不易與組內(nèi)其他較短的相互區(qū)別。X染色體被隸屬該組，大小居6～7號之間，是亞中著絲點。其中的1個常有“細毛狀”的外觀。染色體的基本形態(tài)特征及分析順序確定性別:

一般根據(jù)C組和G組的染色體數(shù)目來判斷。如果C