細(xì)菌學(xué)診斷標(biāo)本的采集和送檢六原則細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查方法細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原的檢測分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制病原微生物感染的防治

一、標(biāo)本的采集和送檢六原則避免雜菌污染不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位運(yùn)送注意保存標(biāo)本必須新鮮病原菌的檢查程序藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)顯微鏡放大法——細(xì)菌形體微小，肉眼不能直接看到，必須借助顯微鏡（普通光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡）放大后才能觀察。

二、細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查方法

普通光學(xué)顯微鏡的分辨率為0.25um。一般細(xì)菌都大于0.25um，故可用普通光學(xué)顯微鏡觀察。普通光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)顯微鏡放大法

電子顯微鏡的分辨率為1nm。不僅能看清細(xì)菌的外形，內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)可一覽無余。電子顯微鏡(electronmicroscope)肺炎鏈球菌莢膜莢膜顯微鏡放大法標(biāo)本處理：1.不染色:可觀察細(xì)菌的生長和運(yùn)動(dòng)，常用懸滴法和壓滴法2.染色法：可觀察細(xì)菌形態(tài)、排列，也可通過染色反應(yīng)性鑒別細(xì)菌.一般程序：

標(biāo)本涂片固定染色鏡檢（觀察鏡下特征：菌體形態(tài)、排列、染色性及特殊結(jié)構(gòu)等）初步鑒定注：對形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列方式和染色性無特征的細(xì)菌，直接涂片染色鏡檢無意義革蘭染色法：結(jié)晶紫碘液95%乙醇復(fù)紅抗酸染色：石炭酸復(fù)紅3%鹽酸酒精美蘭原理:見書染色法1min1min1min脫色5min脫色革蘭陽性

革蘭陰性

抗酸染色革蘭染色法：革蘭陽性菌（紫色）革蘭陰性菌（紅色）抗酸染色法：抗酸陽性菌（紅色）抗酸陰性菌（藍(lán)色）特殊染色法：細(xì)菌莢膜、芽孢、鞭毛、細(xì)胞壁、核質(zhì)等染色三細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定培養(yǎng)基(I)—固體培養(yǎng)基普通瓊脂平板血瓊脂平板選擇鑒別瓊脂平板：SS、MacC、TCBS等巧克力瓊脂平板厭氧血瓊脂平板細(xì)菌的分離培養(yǎng)1、培養(yǎng)基(II)半固體培養(yǎng)基雙層培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：普通肉湯培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管等

接種方法

(I)—稀釋法(II)—?jiǎng)澗€分離法菌落接種法(III)細(xì)菌培養(yǎng)法普通培養(yǎng)二氧化碳培養(yǎng)微需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)2、形態(tài)學(xué)鑒定3、生化試驗(yàn)鑒定4、血清學(xué)鑒定：利用已知的特異性抗體測定有無相應(yīng)的細(xì)菌抗原，確定菌種或菌型。玻片凝集反應(yīng)5、藥物敏感試驗(yàn)6、動(dòng)物試驗(yàn)

體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)的目的：1.對其敏感性不能預(yù)測的臨床分離菌株必須常規(guī)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)以供臨床選擇治療藥物時(shí)參考。2.臨床因治療的反應(yīng)差而考慮更換抗菌藥物史，應(yīng)對擬選藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。3.了解所在醫(yī)院或地區(qū)常見病原菌耐藥性的變遷情況，定期通報(bào)臨床，有助于臨床的經(jīng)驗(yàn)治療選藥4.評價(jià)新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等藥效學(xué)特性。5.對細(xì)菌耐藥譜進(jìn)行分析和分型有助于某些菌種的鑒定，并作為醫(yī)院流行病學(xué)調(diào)查的手段之一。抑菌試驗(yàn)K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法:是目前各國臨床微生物實(shí)驗(yàn)室廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法。稀釋法E實(shí)驗(yàn)四、病原菌抗原的檢測

用已知Ab檢測待測Ag：特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高，Ag的檢出與病原菌的死活無關(guān)常用于細(xì)菌學(xué)診斷的免疫學(xué)技術(shù)有：血清學(xué)診斷沉淀反應(yīng)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、免疫熒光法、對流免疫電泳、酶免疫測定和免疫印跡技術(shù)。免疫檢測技術(shù)(I)—基本原理免疫檢測技術(shù)(II)

—ELISA免疫檢測技術(shù)(III)—免疫熒光法免疫檢測技術(shù)(IV)—凝集和沉淀五、分子生物學(xué)技術(shù)PCR檢測核酸核酸雜交技術(shù)基因芯片六、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制室間質(zhì)量控制質(zhì)量控制：臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系室內(nèi)質(zhì)量控制（一）人員與組織管理制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序手冊培養(yǎng)基商品化干粉培養(yǎng)基：按說明書自制培養(yǎng)基：選原材料按手冊配制外觀、無菌試驗(yàn)、量、Ph、用已知性能標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行性能試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制（二）試劑、染料、診斷血清的質(zhì)量控制藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制培養(yǎng)基（MH培養(yǎng)基）質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株種類質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株來源：衛(wèi)生部菌種保藏中心、美國菌種保藏中心（ATCC）質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株保存：一般保存法冷凍干燥法抑菌圈的質(zhì)控范圍室間質(zhì)量控制各級臨檢中心、參考實(shí)驗(yàn)室對各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查。包括：一般檢查項(xiàng)目熟練程度檢察盲點(diǎn)檢察質(zhì)控結(jié)果分析與評價(jià)七、病原微生物感染的防治

將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體獲得免疫力的一種防治微生物感染的措施。人工主動(dòng)免疫主要生物制品死疫苗活疫苗類毒素亞單位疫苗DNA重組疫苗核酸疫苗治療性疫苗抗毒素細(xì)胞免疫制劑人工被動(dòng)免疫

注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力主要生物制品抗菌血清胎盤球蛋白丙種球蛋白人工主動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫區(qū)別要點(diǎn)人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子等免疫出現(xiàn)時(shí)間慢，2~4周快，立即免疫維持時(shí)間長，數(shù)年~數(shù)月短，2~3周主要用途預(yù)防