薄層色譜

薄層色譜

實驗原理

利用混合物中各組份的物理化學性質(zhì)的差別，在層析過程中，在不相溶的兩個相中分布的不同，達到分離目的。

兩個相:一個是涂布在薄層板上的吸附劑，叫固定相(吸附劑最常用的是氧化鋁和硅膠)

，另一個是在展開過程中流過固定相的展開劑（有機溶劑），叫流動相。

薄層色譜

由于吸附劑對混合物中不同物質(zhì)的吸附力不同，對極性大的物質(zhì)吸附力強，對極性小的物質(zhì)吸附力弱。因此當溶劑流過時，不同物質(zhì)在吸附劑和溶劑之間發(fā)生連續(xù)不斷地吸附、解吸附、再吸附、再解吸附。易被吸附的物質(zhì)相對移動較慢，在薄層板上移動的距離就?。环粗?，較難被吸附的物質(zhì)相對移動較快一些，在薄層板上移動的距離則大。

經(jīng)過一段時間的展開，混合物中各組份在薄層板上連續(xù)不斷地進行吸附和解吸附過程，從而使各組份移動的速度產(chǎn)生差異，不同物質(zhì)就被彼此被分開，最后形成互相分離的斑點。

薄層色譜薄層色譜法優(yōu)點

1.展開時間短；

2.分離能力強，斑點集中；

3.靈敏度高，幾至幾十微克的物質(zhì)即可被檢出；

4.顯色方便，可直接噴灑腐蝕性的顯色劑

5.所用儀器簡單，操作方便，可以普及；

6.薄層板價格低廉,一塊板可同時檢測多個樣品；

7.色譜直觀性強。薄層色譜薄層色譜法的應用

1.用于藥品和制劑的質(zhì)量控制及雜質(zhì)檢查

2.控制化學反應進程，反應副產(chǎn)物的檢查及中間體的分析

3.探索柱色譜的分離條件

4.精制和制備純品的藥物

5.臨床和生化檢驗

6.毒物分析

7.中藥成分分析和含量測定

8.中藥材品種真?zhèn)螜z查及其代用品尋找

9.其它微量鑒定和分析薄層色譜反式偶氮苯在光照下吸收紫外光形成活化分子?；罨肿邮ミ^量的能量返回順式或反式基態(tài)，得到順式和反式異構體。反式偶氮苯的偶極矩為0，順式偶氮苯的偶極矩為3.0D，利用兩者極性不同把它們分離。經(jīng)過薄層層析后，沒有經(jīng)過光照的偶氮苯在薄層板上只有一個斑點，而經(jīng)過光照的偶氮苯有兩個斑點。順、反偶氮苯異構體進行分離、分析薄層色譜在薄板上混合物的各個組分上升的高度與展開劑上升的前沿之比稱為該化合物的比移值，用Rf表示。前沿線色斑起始線薄層色譜示意圖比移值薄層色譜實驗裝置

薄層色譜薄層板的制備與活化

將1.5g硅膠G在攪拌下加入到盛有5ml去離子水的小燒杯中，調(diào)成有粘稠度的漿料(5-10min)立即倒在玻璃板上，用手指夾住兩邊，沿水平方向輕輕振蕩，使?jié){狀物表面光滑且均勻地附在載玻片上，水平放置。用同樣的方法再制一塊。要求薄層板的厚度為0.25mm。將薄層板于室溫下在水平臺上晾干，置于105℃-110℃烘箱中活化30分鐘,貯于干燥器中冷卻備用。實驗步驟

薄層色譜

2.點樣在薄板一端1cm處用筆輕輕畫一橫線作為起點線，用內(nèi)徑為1mm，管口平整的毛細管垂直點在起點線上。注意動作要輕，毛細管口不要碰到吸附劑。

如果溶液過稀，一次點樣后樣品量過少，可在前一次點樣干燥后，在原處再點。點樣的直徑不要超過2mm。因為斑點過大，會造成拖尾、擴散，影響分離效果。

如果需要點多個樣，點之間距離不小于1～1.5cm。薄層色譜

薄層色譜的展開是在密閉容器中進行的。將展開劑（6mL環(huán)己烷和2mL苯的混合物）倒入層析缸中，待層析缸中充滿溶劑蒸氣后，將點好樣的層析板放入缸中展開。

點樣的位置必須在展開劑液面之上。當展開劑展開至距頂端0.5～1cm時，取出層析板用鉛筆畫出溶劑前沿位置，晾干。3.展開薄層色譜前沿線色斑起始線薄層色譜示意圖常用的顯色手段：紫外燈，顯色劑如碘、硫酸等4.計算Rf薄層色譜實驗結果樣品X樣品Y板1Rf板2Rf平均Rf薄層色譜4.劃線點樣：在活化好的板上離底部約1cm的地方輕輕的劃一條線，用毛細管在線上點一個已知樣和一個未知樣，樣品圈不能大于2mm.5.將點好樣的板放入層析缸，展開，在展開劑離頂部1cm的時刻取出，用鉛筆畫出前沿的位置，并劃出斑點的位置。6.在另一塊板上重復一次實驗。7.計算順反偶氮苯的的比移值，并確定哪個斑點是順式偶氮苯。薄層色譜注意事項

1．層析缸不要洗，廢液要倒入廢液缸2．薄板要放平。3．注意觀察展開劑的位置，作好標記。

薄層色譜A.會使點樣里的組份分不開B.可能會淹沒所劃出來的細線,從而溶解所點的樣C.展開劑會揮發(fā)出來D.展開劑與硅膠G發(fā)生反應1.展開劑如果過多，會有何后果？(B)薄層色譜A.所點的試樣的樣點的圈太大B.鋪的薄板不均勻C.薄板放的不平衡D.薄板老化時間不夠2.如果斑點出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,這可能是什么原因?

A薄層色譜3.若分離極性很小的物質(zhì),最好采用哪種展開劑?A.環(huán)己烷B.四氯化碳C.丙酮D.乙酸D薄層色譜4.在