第五章

細(xì)胞融合與單克隆抗體(kàngtǐ)第一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt本章主要內(nèi)容：細(xì)胞融合的基本概念人工(réngōng)誘導(dǎo)細(xì)胞融合技術(shù)雜種細(xì)胞的篩選細(xì)胞雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體人源單克隆抗體第二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt細(xì)胞融合（cellfusion)，是指在離體條件下將不同(bùtónɡ)種生物或同種生物不同(bùtónɡ)類型的單細(xì)胞通過無性方式融合成一個(gè)雜合細(xì)胞的技術(shù)。細(xì)胞融合技術(shù)的出現(xiàn)標(biāo)志著細(xì)胞工程的誕生！一、細(xì)胞融合的定義(dìngyì)第三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt自發(fā)(zìfā)細(xì)胞融合（一）細(xì)胞膜融合(rónghé)受精過程（二）體內(nèi)細(xì)胞的自發(fā)融合

1、肌管的形成2、胚胎著床3、巨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的形成4、腫瘤細(xì)胞的融合第五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt顯微鏡下細(xì)胞融合過程(guòchéng)第六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt二、人工(réngōng)誘導(dǎo)細(xì)胞融合

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法有：病毒誘導(dǎo)融合(rónghé)化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合物理方法（電融合）

第七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt二、人工(réngōng)誘導(dǎo)細(xì)胞融合

（一）病毒(bìngdú)誘導(dǎo)的細(xì)胞融合

有許多種類的病毒能介導(dǎo)細(xì)胞融合，如皰疹病毒、副粘液病毒、雞新城疫病毒等。其中最常用的是滅活的仙臺(tái)病毒（HVJ）,為RNA病毒。

第八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）生物(shēngwù)法：滅活的病毒(bìngdú)（喪失感染性、保留(bǎoliú)抗原結(jié)構(gòu)）第九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt病毒促使(cùshǐ)細(xì)胞融合的主要步驟：兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近；通過病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間互相滲透，胞質(zhì)互相滲透；兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核互相融合，兩個(gè)細(xì)胞融為一體；進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有(hányǒu)兩種染色體的雜種細(xì)胞。第十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt化學(xué)融合劑主要有高級(jí)脂肪酸衍生物（如甘油-醋酸酯、油酸、油胺等）、脂質(zhì)體（如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸等）、鈣離子、水溶性高分子化合物（如聚乙二醇）、水溶性蛋白質(zhì)和多肽（如牛血清白蛋白、多聚L-賴氨酸等），其中最常用的是聚乙二醇（PEG）。

1、聚乙二醇(PEG)法2、Ca2+法3、溶血(rónɡxuè)卵磷脂優(yōu)點(diǎn)是易得，用法簡(jiǎn)單，融合效果穩(wěn)定。(二)化學(xué)方法(fāngfǎ)誘導(dǎo)細(xì)胞融合第十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選pptPEG的作用機(jī)理：由于PEG分子(fēnzǐ)具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在在質(zhì)膜之間形成分子(fēnzǐ)橋，其結(jié)果是使細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生粘連進(jìn)而促使質(zhì)膜的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動(dòng)性，也使細(xì)胞的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。

PEG誘導(dǎo)融合的特點(diǎn)：其優(yōu)點(diǎn)是融合成本低，勿需特殊設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物種限制。其缺點(diǎn)(quēdiǎn)是融合過程繁瑣，PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。

第十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt聚乙二醇（PEG）法細(xì)胞融合步驟（1）將兩種不同(bùtónɡ)親本細(xì)胞各5×l06混勻；（2）離心沉淀，吸去上清液；（3）加1ml50％PEG溶液，用吸管吹打，使之與細(xì)胞接觸1分鐘；（4）加9ml培養(yǎng)液，離心沉淀，吸去上清液；（5）加5ml培養(yǎng)液，分別接種5個(gè)直徑60mm平皿，每個(gè)平皿加培養(yǎng)液至5ml，37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（6）6—24小時(shí)后，換成選擇培養(yǎng)液篩選雜交細(xì)胞。第十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt（三）物理方法(fāngfǎ)誘導(dǎo)細(xì)胞融合電融合法是80年代出現(xiàn)的細(xì)胞融合技術(shù)，在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。電融合法的優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性強(qiáng)、對(duì)細(xì)胞傷害小；裝置(zhuāngzhì)精巧、方法簡(jiǎn)單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可控性強(qiáng)。第十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt電融合的基本過程：細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時(shí)，電場(chǎng)通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場(chǎng)作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串；膜的擊穿(jīchuān)：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個(gè)緊密接觸的細(xì)胞融合在一起。

電融合誘導(dǎo)法原理(yuánlǐ)示意圖第十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt三、雜種細(xì)胞(xìbāo)的篩選根據(jù)已經(jīng)發(fā)生融合的細(xì)胞中所含有核的類型，可將其分為以下(yǐxià)幾種類型：異核細(xì)胞：非同源細(xì)胞的融合體。同核細(xì)胞：兩個(gè)相同細(xì)胞的融合體。多核細(xì)胞：含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體。第十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt基于酶缺陷型細(xì)胞(xìbāo)和藥物抗性所建立的雜種篩選基于營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞所建立的雜種篩選由溫度敏感型細(xì)胞組成的雜種細(xì)胞的篩選具有所需性狀雜種細(xì)胞的篩選常用的雜種(zázhǒng)細(xì)胞篩選方法第十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt細(xì)胞融合的意義(yìyì)理論上說任何細(xì)胞，都有可能通過體細(xì)胞雜交而成為新的生物資源。這對(duì)于(duìyú)種質(zhì)資源的開發(fā)和利用具有深遠(yuǎn)的意義。融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機(jī)制的限制，為遠(yuǎn)緣物種間的遺傳物質(zhì)交換提供了有效途徑。體細(xì)胞雜交產(chǎn)生的雜種細(xì)胞含有來自雙親的核外遺傳系統(tǒng)，在雜種的分裂和增殖過程中雙親的葉綠體、線粒體DNA亦可發(fā)生重組，從而產(chǎn)生新的核外遺傳系統(tǒng)。淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。第十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt四、細(xì)胞(xìbāo)雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體第十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第二十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt

免疫器官：免疫細(xì)胞生成、成熟或集中分布的場(chǎng)所，包括骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)等

免疫細(xì)胞（發(fā)揮免疫作用(zuòyòng)的細(xì)胞）：1．吞噬細(xì)胞2．淋巴細(xì)胞（起源骨髓中的造血干細(xì)胞）T細(xì)胞（在胸腺中成熟）B細(xì)胞（在骨髓中成熟）

免疫活性物質(zhì)：由免疫細(xì)胞或其他細(xì)胞產(chǎn)生的發(fā)揮免疫作用的物質(zhì)，包括抗體、淋巴因子、溶菌酶等第二十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第二十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt基本概念抗原(kàngyuán)抗體抗原決定簇（抗原表位）細(xì)胞克隆多克隆抗體單克隆抗體第二十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt抗原（antigen，Ag），是指一種能刺激人或動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能與這些產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)?？乖幕拘再|(zhì)具有異物性、大分子性和特異性。異物性是指進(jìn)入(jìnrù)機(jī)體組織內(nèi)的抗原物質(zhì)，必須與該機(jī)體組織細(xì)胞的成分不相同。大分子性是指構(gòu)成抗原的物質(zhì)通常是相對(duì)分子質(zhì)量大于10000的大分子物質(zhì)，分子量越大，抗原性越強(qiáng)。特異性是指一種抗原只能與相應(yīng)的抗體或效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合。第二十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt抗體（antibody,Ab)是機(jī)體免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B細(xì)胞或記憶(jìyì)細(xì)胞增殖分裂成漿細(xì)胞所產(chǎn)生的可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。主要存在于血清等體液中，能與相應(yīng)抗原特異性地結(jié)合，具有免疫功能。第二十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt抗原(kàngyuán)決定簇（Antigenicdeterminant）是指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，又稱表位(epitope).抗原以抗原決定簇與相應(yīng)淋巴細(xì)胞的抗原受體結(jié)合(jiéhé)而激活淋巴細(xì)胞引起免疫應(yīng)答。淋巴細(xì)胞表面的抗原識(shí)別受體通過識(shí)別抗原決定簇而區(qū)分“自身”與“異己”。抗原也是以抗原決定簇與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合而發(fā)生反應(yīng)的。第二十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt細(xì)胞克隆(kèlónɡ)：由一個(gè)細(xì)胞增殖而成的細(xì)胞集團(tuán)第二十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第二十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt多克隆抗體（Polyclonalantibody,PcAb）：針對(duì)(zhēnduì)多種抗原決定簇的混合抗體第二十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合(jiéhé)的受體，一種細(xì)胞帶一種受體，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合(jiéhé)其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞，使之活化，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群，分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi)，在機(jī)體中就會(huì)誘導(dǎo)出針對(duì)不同抗原決定簇的多種抗體，如果要把這些抗體一一分開，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。

第三十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt

第三十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt1975年科勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，培養(yǎng)出既能迅速(xùnsù)生長(zhǎng)無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對(duì)某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。第三十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種(yīzhǒnɡ)特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖雜種(zázhǒng)細(xì)胞動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合創(chuàng)始人：米爾斯坦單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖第三十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt單克隆抗體（Monoclonalantibody,McAb）由單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)單一(dānyī)抗原決定簇的同源抗體第三十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt

第三十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt

單克隆和多克隆抗體的比較(bǐjiào)和用途特異性敏感性均一性McAbPcAb低差無高強(qiáng)有1、用于免疫學(xué)檢測(cè)，輔助(fǔzhù)臨床診斷2、McAb用于親和層析，分離(fēnlí)微量可溶性抗原3、標(biāo)記的McAb用于基礎(chǔ)研究，了解細(xì)胞分化等4、制備生物導(dǎo)彈用于腫瘤、移植等的臨床治療。第三十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt單克隆抗體(kàngtǐ)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑（1）病原微生物抗原抗體的檢測(cè)(jiǎncè)（2）腫瘤抗原的檢測(cè)（3）免疫細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)（4）激素測(cè)定（5）細(xì)胞因子的測(cè)定蛋白質(zhì)的提純腫瘤的導(dǎo)向治療和放射免疫顯像技術(shù)第三十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合技術(shù)B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤只有(zhǐyǒu)雜種細(xì)胞才能活動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體制備過程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞第三十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合技術(shù)B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤只有目的雜種細(xì)胞(xìbāo)才能活單克隆抗體制備(zhìbèi)過程第三十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選pptHAT選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)基HAT選擇培養(yǎng)基組分(zǔfèn)

次黃嘌呤核苷酸（hypoxanthine,H)氨甲喋呤（aminopterin,A)（二氫葉酸還原酶抑制劑）胸腺嘧啶核苷酸（thymidine,T)第四十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt細(xì)胞(xìbāo)DNA合成途徑1.主要途徑：

氨基酸谷氨酰胺尿核苷單磷酸

葉酸及其衍生物（必不可少的媒介(méijiè)）2.補(bǔ)救途徑：次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）

胸腺嘧啶核苷酸激酶（TK）第四十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第四十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt視頻(shìpín)：?jiǎn)慰寺】贵w的制備第五十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt免疫標(biāo)記技術(shù)放射物標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)技術(shù)免疫熒光技術(shù)其他標(biāo)記技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)酶免疫組化技術(shù)雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法雙抗原夾心法間接法雙位一點(diǎn)法第五十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選pptELISA原理(yuánlǐ)使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物(chǎnwù)，產(chǎn)物(chǎnwù)的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)第五十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選pptELISA基本(jīběn)的實(shí)驗(yàn)過程包被：將已知抗原或抗體通過物理吸附到固相載體表面，使抗原或抗體固相化抗原抗體反應(yīng)：先后加入被檢標(biāo)本(biāoběn)和酶結(jié)合物，使之與固相抗原或抗體發(fā)生免疫反應(yīng)而被結(jié)合固定酶促反應(yīng)：在反應(yīng)體系中加入酶作用的底物，使發(fā)生酶促反應(yīng)而顯色第五十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第六十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt單抗純化(chúnhuà)方法：鹽析凝膠過濾離子交換(lízǐjiāohuàn)層析親和層析法第七十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt用中性鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的方法為鹽析。大量的鹽加入到蛋白溶液中，高濃度的鹽離子有很強(qiáng)的水化力，可奪取蛋白質(zhì)的水化層，使蛋白質(zhì)膠粒失水發(fā)生(fāshēng)凝聚而沉淀析出。

血清50%飽和度硫酸胺

上清（清蛋白）沉淀（球蛋白）33%飽和度硫酸胺上清沉淀擬球蛋白r球蛋白鹽析法第七十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt凝膠過濾法干燥的凝膠顆粒吸水后形成了多孔膠粒，將蛋白質(zhì)溶液加在凝膠柱上進(jìn)行洗脫(xǐtuō)時(shí)，大分子蛋白不能穿過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入膠粒內(nèi)，留在膠粒間隙的溶液中，隨洗脫(xǐtuō)液最先流出，小分子蛋白可穿過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入膠粒內(nèi)，受到凝膠的阻留，向下移動(dòng)較慢洗脫(xǐtuō)出來較慢，據(jù)此將不同大小的蛋白質(zhì)分離出來。交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex)瓊脂糖凝膠(Sepharose)第七十二頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt離子交換(lízǐjiāohuàn)層析法DEAE纖維素：結(jié)合溶液(róngyè)中帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)，又稱陰離子交換劑CM纖維素：結(jié)合溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)，又稱陽(yáng)離子交換劑第七十三頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt親和層析法將抗原（或抗體）連接到固相載體上，特異性吸附液相中的抗體（或抗原），形成(xíngchéng)抗原抗體復(fù)合物，然后改變條件，使抗原抗體復(fù)合物解離洗脫出純化的抗體（或抗原）第七十四頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt單克隆抗體特性理化性狀高度均一，生物活性專一，只與一種抗原(kàngyuán)表位發(fā)生反應(yīng)，特異性強(qiáng)，純度高，易于實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化和大量制備第七十五頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt單抗鑒定(jiàndìng)方法：效價(jià)（凝集反應(yīng)、Elisa、放免）特異性（免疫熒光、Elisa、間接血凝、免疫(miǎnyì)印跡）第七十六頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt原理：WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素膜NC膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式(xíngshì)吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。第七十七頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第七十八頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt聚丙烯酰胺凝膠電泳第七十九頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt考馬斯亮藍(lán)染色(rǎnsè)蛋白電泳結(jié)果第八十頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt免疫(miǎnyì)組織化學(xué)技術(shù)第八十一頁(yè)，共八十七頁(yè)。精選ppt第五節(jié)人源單克隆抗體(kàngtǐ)主要困難（1）缺乏合適的人骨髓瘤細(xì)胞株作為融合親本?，F(xiàn)有的細(xì)胞株大多是融合率不高，雜交瘤抗體產(chǎn)生水平低，而且細(xì)胞不穩(wěn)定，易喪失抗體分泌能力