（優(yōu)選）紫外分光光度法測(cè)飲料中咖啡因濃度本文檔共24頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分CompanyLogo2生活中含有咖啡因的食物、藥品：茶、咖啡1可樂、紅牛、功能飲料等2巧克力3復(fù)方阿司匹林、小兒氨酚匹林咖啡因片等感冒消炎藥4去痛片5本文檔共24頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分《食品科學(xué)》（JournalofFoodScience）最近發(fā)布的研究說，健康成年人每天攝入的咖啡因含量最多不要超過400毫克（相當(dāng)于4杯咖啡左右）。適度地使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇可以有效抗威脅我們身體健康的自由基，而自由基是造成許多疾病的主因。本文檔共24頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分過度攝入的缺點(diǎn)神經(jīng)過敏易怒焦慮震顫肌肉抽搐失眠心悸本文檔共24頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時(shí)的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神藥品。

簡(jiǎn)介咖啡因圖示本文檔共24頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分

化學(xué)咖啡因?qū)儆诩谆S嘌呤的生物堿。純的咖啡因是白色的，強(qiáng)烈苦味的粉狀物。它的化學(xué)式C8H10N4O2。它的化學(xué)名是1,3,7-三甲基黃嘌呤或3,7-二氫-1,3,7三甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮。分子量，194.19物理白色粉末或六角棱柱狀結(jié)晶,熔點(diǎn)238°,178°,升華。1g溶于46ml水、5.5ml80°的水、1.5ml沸水、66ml乙醇、22ml60°的乙醇、50ml丙酮及5.5ml氯仿等。

性質(zhì)本文檔共24頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分高效液相色譜法紫外分光光度法氣質(zhì)聯(lián)用分析法近紅外光譜法飲料中咖啡因含量的檢測(cè)本文檔共24頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分CompanyLogo8紫外分光光度法儀器與試劑：SPECORD200紫外分光光度計(jì);KQ一50B型超聲清洗器;AnkeTDL一4型離心機(jī);Mettler-ToledoAB104一N電子天平。100mL微量進(jìn)樣器;5mL注射器三氯甲烷;咖啡因(分析純);各種可樂飲料。本文檔共24頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分實(shí)驗(yàn)方法一、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)樣品0.0500g于100mL的容量瓶中,用三氯甲烷溶解后定容得濃度為500mg/L的儲(chǔ)備液。實(shí)驗(yàn)前用三氯甲烷稀釋,配成0.5,

2,5,

10,

15,

20,

30mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。(氯仿的極性很弱作萃取劑）。以三氯甲烷作空白,測(cè)定其在278nm處的吸光度值。本文檔共24頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分二、樣品前處理

取少量可樂飲料用超聲清洗器在常溫下超聲脫氣l--2min,用100μg/L的微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確量取100μL超聲脫氣后的可樂飲料至5mL的離心試管中,加入2mL三氯甲烷,放入離心機(jī),在2500r/min下離心3min,用5mL注射器吸取下層清液（有機(jī)層）進(jìn)行紫外光譜分析.本文檔共24頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分三、樣品測(cè)定樣品前處理方法處理市售的娃哈哈無咖啡因兒童可樂飲料來制備參比溶液,并以此為空白在278nm處測(cè)定經(jīng)同樣方法處理過的樣品溶液中咖啡因的吸光度值,重復(fù)三次,取平均值。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。（或者以三氯甲烷作參比液，測(cè)定其紫外吸收。）本文檔共24頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分分析條件的優(yōu)化1、溶劑的選擇2、樣品和體積的混合體積比選擇本文檔共24頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分溶劑的選擇

準(zhǔn)確移取三份1.0mL200mg/L咖啡因水溶液于三支10mL比色管中,分別加入二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯8.0mL,充分震蕩,萃取后離心分離,取清液在250~300nm波長范圍內(nèi)掃描.比較咖啡因在不同溶劑中的紫外吸收光譜,可以看出三氯甲烷作溶劑時(shí),吸光度最大,最大吸收峰位于276nm.由此可知三氯甲烷的萃取效率最佳..本文檔共24頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分咖啡因紫外吸收?qǐng)D譜本文檔共24頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分有關(guān)咖啡因萃取常用溶劑的常用性質(zhì)本文檔共24頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分1、咖啡因在氯仿中的分配比最高,在三氯乙烯中的最小.因此,在通常的咖啡因萃取過程中研究者們較多采用氯仿為溶劑來獲得較高的萃取效率。2、部分溶劑如乙酸乙酯與水之間有一定的相溶性,因此,在飲料中的咖啡因萃取過程中,若取少量的飲料與萃取溶劑進(jìn)行混合時(shí),飲料中的水及其它各組分和溶劑就會(huì)形成一個(gè)混容體系而不會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象。3、水在三氯甲烷中的溶解度很小,萃取過程后可直接取下層氯仿萃取液進(jìn)行儀器分析而不需要其它的處理過程如干燥等。4、根據(jù)萃取理論,萃取效率E=1-(l+Kφ)-n,其中K為分配比,φ為相比,n為萃取次數(shù),本實(shí)驗(yàn)φ為20,K為15,n為1,則E=0.9967,即一次萃取效率可達(dá)99.67%,單步萃取效率高.本文檔共24頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分

選用溶劑為2mL,樣品用量分別選100,200和400μL即相比分別為20,10和5進(jìn)行測(cè)定,樣品體積為400μL時(shí),所得咖啡因含量相對(duì)略偏低,而樣品體積為100μL和200μL時(shí)結(jié)果基本一致,為了取樣方便(100μL微量進(jìn)樣器取樣),本實(shí)驗(yàn)取樣體積為100μL,即相比為20.本文檔共24頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分觀察咖啡因的標(biāo)準(zhǔn)曲線可知隨著咖啡因含量的增加,其在最大吸收波長處的吸光度也逐漸增加,呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。線性方程為:Y=0.0491X+0.001相關(guān)系數(shù)R2=0.9999標(biāo)準(zhǔn)曲線本文檔共24頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分實(shí)驗(yàn)結(jié)果本文檔共24頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分高效液相色譜分析實(shí)驗(yàn)試劑及設(shè)備：①Waters1525-2996系統(tǒng)②HypersilODS25um色譜柱③Millipore純水過濾器④4.5umF型過濾膜⑤甲醇HPLC級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品:含咖啡因濃度分別為20、40、80、160、320μg?mL-1等5份對(duì)照品溶液⑥試樣：市售可樂色譜條件：①流動(dòng)相：等度為60:40（甲醇：水）②檢測(cè)波長：254③進(jìn)樣量：5μL④運(yùn)行時(shí)間：6min⑤積分：自動(dòng)積分本文檔共24頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分實(shí)驗(yàn)步驟(1)將配制好的流動(dòng)相于超聲波清洗器上脫氣15min；(2)系統(tǒng)除氣泡、大流速泵抽、裝柱子、小流速裝柱；(3)平衡：流速由小至大，配比緩慢增加至壓力恒定；(4)精密配制含咖啡因濃度為約1mg?mL-1的咖啡因甲醇溶液。將此甲醇稀釋為含咖啡因濃度分別為20、40、80、160、320μg?mL-1等5份對(duì)照溶液；(5)根據(jù)前述色譜條件，將儀器調(diào)節(jié)至進(jìn)樣狀態(tài)，待儀器流路與電路條件達(dá)到平衡狀態(tài)后，色譜工作站記錄的基線呈平直，即可進(jìn)樣分析；(6)依次分別吸取5μL的5份對(duì)照品溶液進(jìn)樣分析，記錄色譜數(shù)據(jù)；(7)將可樂試樣稀釋一倍，經(jīng)超聲波脫氣后，精密吸取5μL可樂試樣，進(jìn)樣分析，記錄色譜數(shù)據(jù)；(8)實(shí)驗(yàn)完成后，按要求關(guān)好儀器。本文檔共24頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期一\18點(diǎn)23分標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制用逐級(jí)稀釋法配制成濃度為480,320,160,80,48,40,32,16,8μg/m