動物染色體標本的制備與分析

線粒體的活體染色與觀察實驗四本文檔共25頁；當前第1頁；編輯于星期二\5點26分動物染色體標本的制備與分析P60本文檔共25頁；當前第2頁；編輯于星期二\5點26分

1.掌握動物骨髓細胞染色體標本制備的基本過程及基本原理。2.觀察染色體的數(shù)目以及形態(tài)特征。本文檔共25頁；當前第3頁；編輯于星期二\5點26分細胞周期？提問秋水仙素的作用？細胞周期分為哪兩個期？各又分為什么期？本文檔共25頁；當前第4頁；編輯于星期二\5點26分

骨髓細胞具有高度分裂能力，分裂相多，不需經(jīng)體外培養(yǎng)就可直接觀察到分裂細胞。經(jīng)秋水仙素處理后，分裂的骨髓細胞被阻斷在有絲分裂中期，便可制作出理想的染色體標本，是研究動物細胞遺傳學的好材料。再經(jīng)過低滲、固定、滴片就可以獲得大量的骨髓細胞染色體分裂相。本文檔共25頁；當前第5頁；編輯于星期二\5點26分1.頸椎脫臼法處死小白鼠，取股骨，去掉兩端，暴露骨髓腔；

3.低滲處理：37攝氏度水浴中靜置15min。使細胞漲大，染色體分散，在滴片時細胞才能破裂，染色體才能平鋪在載玻片上。

2.收集骨髓細胞:取低滲液5ml，用注射器吸取低滲液進行反復(fù)沖洗，直至股骨發(fā)白；本文檔共25頁；當前第6頁；編輯于星期二\5點26分4.預(yù)固定：取新鮮固定液0.5ml加入可以使細胞表面輕微固定，以防止細胞結(jié)團。5.離心：2500rpm，5min。

6.

固定：棄上清，留沉淀，加固定液5ml，吹打混勻，靜置8min。7.離心：同上使得染色體形態(tài)更為清晰可見本文檔共25頁；當前第7頁；編輯于星期二\5點26分8.制細胞懸液：棄上清，留沉淀，加固定液吹打混勻。9.滴片：冰載玻片，高度30cm以上。10.微烤：酒精燈火焰上方來回5次。使細胞充分破裂，暴露染色體，并充分附著、鋪散開，便于制得分散清晰的中期染色體。本文檔共25頁；當前第8頁；編輯于星期二\5點26分11.染色：姬姆薩染色8min。12.沖洗、晾干。13.鏡檢：先在低倍鏡下找到分散較好的染色體，再置于高倍鏡下觀察。本文檔共25頁；當前第9頁；編輯于星期二\5點26分實驗結(jié)果10倍鏡下本文檔共25頁；當前第10頁；編輯于星期二\5點26分高倍鏡下本文檔共25頁；當前第11頁；編輯于星期二\5點26分12本文檔共25頁；當前第12頁；編輯于星期二\5點26分1.從第2步，即“取股骨”開始操作；2.注意識別股骨，與身體骨骼相連接的骨段；3.剪股骨兩頭時，一點一點試著剪。4.固定液現(xiàn)配先用，甲醇：冰醋酸=3:1；5.滴片一定要有高度，30cm以上，越高越利于細胞破裂，染色體分散。本文檔共25頁；當前第13頁；編輯于星期二\5點26分6.微烤時注意部位和時間，不能烤干。7.禁止將小白鼠殘體丟入水槽中。本文檔共25頁；當前第14頁；編輯于星期二\5點26分線粒體的活體染色與觀察P25本文檔共25頁；當前第15頁；編輯于星期二\5點26分1.掌握線粒體的活體染色方法和原理；2.了解光鏡下線粒體的形態(tài)。本文檔共25頁；當前第16頁；編輯于星期二\5點26分活體染色？提問線粒體功能？染料？本文檔共25頁；當前第17頁；編輯于星期二\5點26分線粒體是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。詹納斯綠B是線粒體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色，而在周圍的細胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。

本文檔共25頁；當前第18頁；編輯于星期二\5點26分與《實驗指導(dǎo)》稍有區(qū)別，1.取普通載片；滴1、2滴0.02%詹納斯綠B染液于載玻片上。2.牙簽刮取口腔粘膜上皮細胞，牙簽尖上可見小顆粒。3.染色：將牙簽于染液內(nèi)滾動，放置5min。4.鏡檢：染色后蓋蓋玻片，先低倍鏡以下觀察，找到清晰的口腔黏膜上皮細胞后在高倍下觀察。本文檔共25頁；當前第19頁；編輯于星期二\5點26分實驗結(jié)果本文檔共25頁；當前第20頁；編輯于星期二\5點26分本文檔共25頁；當前第21頁；編輯于星期二\5點26分本文檔共25頁；當前第22頁；編輯于星期二\5點26分1.取材是這個實驗內(nèi)容的關(guān)鍵，刮取口腔粘膜上皮細胞時部位要準確、用力不要太大。2.蓋蓋玻片：這里不用頭發(fā)絲，用鑷子夾住蓋玻片的一側(cè)，以另一側(cè)斜著接觸載玻片和液體，順勢放下。若液滴較小，可適當加一點液體，以防干枯。本文檔共25頁；當前第23頁；編輯于星期二\5點26分操作流程圖頸椎脫臼法處死小白鼠滴1滴詹納斯綠B于載玻片上取股骨，剪掉兩端。取5ml低滲液于離心管中，用注射器吸取低滲液將骨髓沖洗到離心管中染色5min蓋上蓋玻片37℃水浴中低滲處理放置15min預(yù)固定，加入固定液0.5ml，離心2500rpm,5min鏡檢姬姆薩染色8min，沖洗，晾干,鏡檢棄上清，加入固定液5ml，吹打混勻，靜置8min離心，2500rpm,5min，棄上清，加0.3ml固定液，吹打混勻制成細胞懸液冰載玻片，30cm以上滴片,微烤牙簽刮取口腔黏膜上皮細胞涂于染液中本文檔共25頁；當前第24頁；編輯于星期二\5點26分值日生的值日標準1.清點實驗器材，每組有腎形盤1個，剪刀、鑷子各1把，注射器、離心管各1個，一次性吸管1根，剪刀是否擦干晾在試管架上。2.抹布（大紗布）、手套是否洗凈晾在試管架上。