關(guān)于糖的提取分離結(jié)構(gòu)測(cè)定第1頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一、提取

單糖、低聚糖及苷類化合物常用水或醇提取，然后用不同的有機(jī)溶劑萃取得到不同極性的化合物。多糖常用熱水、稀堿或稀酸溶液進(jìn)行提取。植物體內(nèi)苷常與水解酶共存，所以要?dú)⒚富蛞种泼傅幕钚?。?頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三提取流程第3頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三二、分離1.季銨鹽沉淀法與酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分離。常用季氨鹽有十六烷基三甲胺溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。提高溶液PH值或加入硼砂緩沖液，也可沉淀分離中性多糖。第4頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2.分級(jí)沉淀或分級(jí)溶解法按比例由小到大的順序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同濃度下析出的沉淀，反復(fù)溶解與沉淀。為了多糖的穩(wěn)定，一般在PH7時(shí)進(jìn)行，酸性多糖在PH2-4時(shí)進(jìn)行。第5頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三分級(jí)沉淀法得到的多糖，常含有較多的蛋白質(zhì)，需將其去除方法：選擇使蛋白質(zhì)沉淀而不使多糖沉淀的試劑（如酚、三氯醋酸、鞣質(zhì)等）處理

sevag法：（用氯仿:丁醇5:1混合）酶解法：（蛋白水解酶，常與sevag法合用）三氟三氯乙烷法三氯醋酸法蛋白質(zhì)的去除第6頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三3.離子交換色譜常用交換劑為陽離子或陰離子交換纖維素。陽離子交換纖維素適用于分離酸性、中性多糖和粘多糖。中性多糖與硼酸絡(luò)合后可增加酸性，可被陽離子交換纖維素吸附酸性基團(tuán)多的吸附力強(qiáng)，對(duì)于線性分子，分子量大的比小的吸附力強(qiáng)，直鏈分子比支鏈分子易吸附。第7頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三4.凝膠柱色譜

分子篩原理，按照分子量的大小不同進(jìn)行分離。

常用葡聚糖凝膠（sephadexG）5.纖維素柱色譜（吸附＋分配）6.制備性區(qū)域電泳（分子大小、形狀、電荷不同，在電場(chǎng)作用下的遷移速率不同）第8頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三第六節(jié)糖的核磁共振性質(zhì)

第9頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一、糖的1H-NMR性質(zhì)

1.1H-NMR化學(xué)位移糖的端基質(zhì)子信號(hào)在δ4.3~6.0甲基五碳糖的甲基信號(hào)在δ1.0左右糖上其余質(zhì)子信號(hào)在δ3.2~4.2之間。第10頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2.化學(xué)位移的應(yīng)用根據(jù)糖的端基質(zhì)子信號(hào)的個(gè)數(shù)和化學(xué)位移值可推測(cè)連有糖的個(gè)數(shù)、糖的種類。根據(jù)甲基質(zhì)子信號(hào)的個(gè)數(shù)和化學(xué)位移值可推測(cè)甲基五碳糖的個(gè)數(shù)、糖的種類。第11頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三3.偶合常數(shù)質(zhì)子的鄰位偶合常數(shù)與二面角有關(guān)兩面角90度J=0Hz；

兩面角0或180度J=6~8Hz；兩面角60度J=2~4Hz第12頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三當(dāng)2-H為直立鍵時(shí)β-D-和α-L-型糖的1-H和2-H鍵為雙直立鍵，φ=180，J=6~8Hz第13頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三α-D-和β-L-型糖

1-H為e鍵，2-H為a鍵，φ=60，J=2~4Hz第14頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿洛糖的2-H均為直立鍵當(dāng)其成α苷時(shí)，端基質(zhì)子與2-H的J約為4Hz；當(dāng)其成β苷時(shí)，端基質(zhì)子與2-H的J約為8Hz。第15頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2-H為e鍵，1-H無論處于e鍵還是a鍵，與2-H的兩面夾角均約60度，不能用J判斷苷鍵構(gòu)型。如D-甘露糖第16頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三L-鼠李糖優(yōu)勢(shì)構(gòu)象為1C式，2-H為平伏鍵，1-H與2-H的兩面夾角約60度，所以苷鍵的構(gòu)型不能J來判斷。第17頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三二、糖的13C-NMR性質(zhì)

1.化學(xué)位移

CH3

~18ppm甲基五碳糖的C6

CH2OH~62ppmC5或C6

CHOH68~85ppm糖氧環(huán)上的C2~C4

-O-CH-O-95~105ppm端基C1或C2

環(huán)上的碳，帶有a-OH的較帶有e-OH的出現(xiàn)在較高場(chǎng)處（尤其是端基碳，但不適于甘露糖、鼠李糖的端基碳）；第18頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三D-葡萄糖苷C1——α型97~101ppmβ型103~106ppm在13C-NMR譜中：

第19頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2.偶合常數(shù)

（吡喃糖中端基碳的碳?xì)渑己铣?shù))

吡喃糖中端基質(zhì)子處于橫鍵（a-D或?-L型苷鍵）時(shí)，其端基碳?xì)涞呐己铣?shù)為170~175Hz；處于豎鍵（?-D或a-L型苷鍵）時(shí)則為160~165Hz。鼠李糖相反（1C式）第20頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三3.苷化位移

糖與苷元成苷后，苷元的α-C、β-C和糖的端基碳的化學(xué)位移值均發(fā)生了改變，稱為苷化位移。第21頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三

如：

C1

位移

β-D-葡萄糖

96.7

甲基-β-D-葡萄糖苷104.0+8.3

β-D-半乳糖

97.3

甲基-β-D-半乳糖104.5+8.3

α-L-鼠李吡喃糖

95.1

甲基-α-L-鼠李糖苷102.6+7.5第22頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三醇型苷：端基碳的苷化位移與苷元醇羥基種類有關(guān)

α-Glc

β-Glc端基碳δC-1ΔδδC-1Δδ伯醇100.0+7.1104.4+6.7仲醇98.5+4.4102.3+3.5叔醇94.6+0.598.9+0.1

伯醇>仲醇>叔醇第23頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三①伯醇苷（成苷后）苷元α-C向低場(chǎng)位移約8個(gè)化學(xué)位移單位β-C向高場(chǎng)位移約4個(gè)化學(xué)位移單位第24頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三②環(huán)醇苷

前手性碳：對(duì)稱碳原子增加一個(gè)取代基后，變?yōu)榉菍?duì)稱碳，這樣的碳原子稱之為前手性碳a.兩個(gè)β-C均為仲碳的苷成苷后α-C向低場(chǎng)位移7個(gè)單位，端基碳向高場(chǎng)位移約1~4個(gè)單位（與甲苷比），β-C的前手性構(gòu)型與端基碳構(gòu)型相同時(shí)，向高場(chǎng)位移約2個(gè)單位；不同時(shí)，向高場(chǎng)位移約4個(gè)單位。

同小異大：指β碳第25頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三b.一個(gè)β-C為仲碳，另一個(gè)為叔碳或季碳的苷

α-C與糖的端基碳構(gòu)型相同時(shí)，α-C向低場(chǎng)位移約5個(gè)單位；不同時(shí)α-C向低場(chǎng)位移約10個(gè)單位。β-C和端基碳的變化較復(fù)雜。同五異十其余七指：

α-C第26頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三③叔醇苷

成苷后α-C向低場(chǎng)位移約7個(gè)單位；β-C向高場(chǎng)位移約5個(gè)單位。④酯苷和酚苷苷元α-C向高場(chǎng)位移，區(qū)別于上述苷。

第27頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三第七節(jié)糖鏈的結(jié)構(gòu)測(cè)定第28頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一、純度測(cè)定（多糖）

多糖純品實(shí)質(zhì)上是指一定分子量范圍的均一組分。

測(cè)定方法：

超離心法、高壓電泳法、凝膠柱色譜法、旋光測(cè)定法、官能團(tuán)摩爾比恒定法等。第29頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三二、分子量測(cè)定

單糖、低聚糖及其苷的分子量測(cè)定主要采用質(zhì)譜法。多采用化學(xué)電離質(zhì)譜(CI-MS)、場(chǎng)解吸質(zhì)譜(FD-MS)、快原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)等方法，ESI-MS及FAB-MS是目前測(cè)定苷類分子量常用的方法。應(yīng)用甲基化法和過碘酸氧化法進(jìn)行的末端分析法也常用來推算多糖的分子量第30頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三三、單糖的鑒定

一般是將苷鍵全水解，用PC檢出單糖的種類，糖類的PC常用的展開劑大多為含水的溶劑系統(tǒng)，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，經(jīng)顯色后用薄層掃描法求得各種糖的分子比。用GC或HPLC對(duì)單糖定性定量，GC常以甘露醇或肌醇為內(nèi)標(biāo)，用已知單糖作為對(duì)照品。NMR譜，也可以有效地鑒定苷分子中糖的種類。第31頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三四、糖的連接位置的測(cè)定

1.甲基化法：

將被測(cè)物全甲基化，水解苷鍵，用GC定性定量分析，具有游離羥基的部位是糖的連接位點(diǎn)。2.1H-NMR法：

根據(jù)乙?；蟮馁|(zhì)子化學(xué)位移判斷糖的連接位點(diǎn)。3.13C-NMR法：

通過苷化位移，推斷糖的連接位點(diǎn)。第32頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三五、糖鏈連接順序的確定

1.部分水解法：將糖鏈水解成較小片段（低聚糖），然后分析片段推斷糖鏈的結(jié)構(gòu)。2.質(zhì)譜法根據(jù)質(zhì)譜中的裂解規(guī)律和裂解碎片推測(cè)糖鏈的連接順序。3.NMR和2D-NMR法。第33頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2.質(zhì)譜法FDMS、FABMS等。優(yōu)點(diǎn)：不必制備衍生物,用量小,準(zhǔn)確,簡便。第34頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三是將糖及其苷類衍生物全乙?；?，測(cè)定觀察兩糖之間質(zhì)子的遠(yuǎn)程偶合或NOE效應(yīng)，確定糖的連接順序。3.NMR和2D-NMR法。通過HMBC可確定糖的連接位點(diǎn)。第35頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三六、苷鍵構(gòu)型及氧環(huán)的確定

1.苷鍵構(gòu)型確定方法包括：

1H-NMR法、酶解法、分子旋光差法等。

1H-NMR法

1利用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)