實(shí)驗(yàn)

抗菌藥物敏感性試驗(yàn)?zāi)康囊?．掌握紙片擴(kuò)散法（K-B法）的原理、操作方法、結(jié)果的判讀及其臨床意義。2．掌握紙片擴(kuò)散法的質(zhì)量控制。器材和試劑1．菌種：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。2．培養(yǎng)基：水解酪蛋白瓊脂（MH瓊脂）。3．試劑：無菌肉湯、0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管、抗菌藥物紙片。4．其他：無菌棉拭、鑷子、毫米尺、接種環(huán)。步驟和方法（一）原理（二）方法（三）結(jié)果（一）原理將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種檢測菌的瓊脂平板上。在紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)檢測菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對檢測菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。（二）方法1.挑取孵育16～24h的血平板上數(shù)個(gè)菌落置于肉湯管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)。2.用無菌棉拭蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后，在MH瓊脂表面均勻涂布3次，每次旋轉(zhuǎn)60°，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周。3.室溫干燥3~5min后貼抗菌紙片，各紙片中心距離不小于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm。4.平板室溫放置15min后倒放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。藥敏紙片的選擇待測菌藥物金黃色葡萄球菌ATCC25923AMK、PEN、OXA、VAN、GEN、CIP大腸埃希菌ATCC25922AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM銅綠假單胞菌ATCC27853AMK、FTX、GEN、PIP、CIP、IPM（三）結(jié)果1.結(jié)果判讀：平板置黑色無反光背景上，測量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進(jìn)入抑菌環(huán)；磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。（三）結(jié)果2.結(jié)果解釋：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參照標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果。按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報(bào)告。3.質(zhì)量控制：標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈應(yīng)落在預(yù)期范圍內(nèi)。如果超出該范圍，應(yīng)視為失控而不發(fā)報(bào)告，須及時(shí)查找原因，予以糾正。影響結(jié)果的因素培養(yǎng)基抗菌藥物紙片菌量操作質(zhì)量培養(yǎng)基pH：7.2～7.4最適宜，堿性擴(kuò)大氨基糖苷類藥物的抑菌環(huán)，酸性擴(kuò)大四環(huán)素類藥物的抑菌環(huán)。瓊脂含量：影響抑菌環(huán)的大小。厚度：影響抑菌環(huán)的大小，以4mm為宜?？咕幬锛埰埰幜浚号c紙片的重量、吸水性、直徑等有關(guān)，影響抑菌環(huán)的大小，批量制備。紙片的保存：須在有干燥劑的容器內(nèi)低溫(-10℃以下)保存。只拿出少量放4℃?zhèn)淙粘９ぷ饔谩Ｑb紙片的容器從冰箱取出后，必須在室內(nèi)溫暖l0分鐘以上才可打開。菌量加大菌量：抑菌環(huán)減小。減少菌量：抑菌環(huán)擴(kuò)大。操作質(zhì)量平板使用時(shí)應(yīng)放于35℃溫箱30min，去除過多的水分。接種細(xì)菌后應(yīng)室溫放置3~5min