番茄黃花卷葉病的基因檢測(cè)第1頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)原理番茄黃花卷葉病概況抗病檢測(cè)主要內(nèi)容與技術(shù)方案原理（Ty-1、Ty-2、Ty-3）（每組選1個(gè)）數(shù)據(jù)分析實(shí)例涉及實(shí)驗(yàn)技術(shù)第2頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月表型DNA

RNA

Protein

Phenotype實(shí)驗(yàn)原理第3頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月

重要農(nóng)藝性狀基因連鎖標(biāo)記的篩選技術(shù)目標(biāo)基因的標(biāo)記篩選是進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇（MAS）育種的基礎(chǔ)。用于MAS育種的分子標(biāo)記須具備三個(gè)條件：分子標(biāo)記與目標(biāo)基因緊密連鎖，一般要求兩者間的遺傳距離小于5cM,最好1cM或更小；標(biāo)記實(shí)用性強(qiáng)，重復(fù)性好，而且能夠經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便地檢測(cè)大量個(gè)體；不同遺傳背景選擇有效。第4頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月MAS與表型選擇的比較可以進(jìn)行早期選擇，加快育種進(jìn)度；區(qū)別較細(xì)微的差異，如多位點(diǎn)控制的數(shù)量性狀，直接選擇困難；可同時(shí)對(duì)幾個(gè)性狀進(jìn)行選擇。第5頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月MAS存在的問題標(biāo)記信息的丟失。標(biāo)記并不是基因，由于重組使標(biāo)記與基因分離，導(dǎo)致選擇偏離方向。QTL定位和效應(yīng)估算的不精確性。上位性的存在。由于QTL與環(huán)境、QTL與QTL間存在互作，導(dǎo)致不同環(huán)境、不同背景下選擇效率發(fā)生偏差。QTL篩選與育種過程相脫離。第6頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)展飽和的遺傳圖譜，尋找與目的基因緊密連鎖的兩側(cè)標(biāo)記，提高基因型與表現(xiàn)型的一致性。從全基因組水平上對(duì)QTL展開研究，包括QTL的數(shù)目、位置、效應(yīng)以及QTL與QTL間、QTL與環(huán)境的互作、QTL的一因多效性等，充分發(fā)掘QTL的信息，選擇最佳組合進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇。QTL篩選與品種選育過程相結(jié)合，如選擇商業(yè)品種作為作圖親本之一，或利用回交高代QTL方法將篩選與育種同步進(jìn)行。將常規(guī)選擇與標(biāo)記輔助選擇相結(jié)合，針對(duì)不同性狀的特點(diǎn)，研究高效的選擇方法。各研究機(jī)構(gòu)的良好合作也是MAS成功應(yīng)用的重要基礎(chǔ)。MAS成功應(yīng)用？第7頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月ZamirD,etal.Mappingandintrogressionofatomatoyellowleafcurlvirustolerancegene,Ty-1[J].TheoreticalandAppliedGenetics,1994,88:141-146第8頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月圖

利用21號(hào)染色體上STR位點(diǎn)D21S1446進(jìn)行唐氏綜合征基因診斷注:1、2為患者1：1：1帶型；3、4為正常人；5、6為對(duì)照組；7為2：1帶型。（鄔晉芳等，利用21號(hào)染色體上STR位點(diǎn)進(jìn)行唐氏綜合征基因診斷的研究，中國(guó)兒童保健雜志，2009，17（5）：520-522）第9頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月概況番茄（LycopersiconesculentumMill.），茄科茄屬草本植物，為常見蔬菜之一，廣泛分布于中國(guó)各地，成為主要的溫室產(chǎn)品之一。茄果類蔬菜作為重要的蔬菜品類，果實(shí)品質(zhì)一直是果菜類育種研究的重點(diǎn)。

第10頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月黃化曲葉病

番茄黃化曲葉病毒病發(fā)病初期主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲緩，節(jié)間縮短，植株矮化，上部葉片變小、變厚、有褶皺、向上卷曲、變形、葉片邊緣至葉脈區(qū)域黃化，下部葉片癥狀不明顯。發(fā)病后期表現(xiàn)為坐果困難，果實(shí)僵化不膨大，或膨大速度極慢，果實(shí)變小，成熟期果實(shí)不能正常轉(zhuǎn)色、失去商品價(jià)值，導(dǎo)致減產(chǎn)或絕收第11頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月黃化曲葉病毒病

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)番茄黃化曲葉病毒病的年發(fā)生面積超過6.7萬hm2，年經(jīng)濟(jì)損失至少20億人民幣，且將嚴(yán)重威脅我國(guó)番茄產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。第12頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月苗期抗感對(duì)比第13頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月感病第14頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月

田間驗(yàn)證結(jié)果番茄對(duì)TYLCV的抗病性鑒定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)第15頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月抗病檢測(cè)：重要育種手段之一。即利用已知的的基因標(biāo)記對(duì)番茄樣品的抗病基因進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)PCR產(chǎn)物以電泳的方式做檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果選育抗病品種。第16頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月番茄中至少有15個(gè)抗病基因已被分離鑒定，其中抗黃化曲葉病毒病基因主要有TY-1、TY-2、TY-3、TY-4第17頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月抗病檢測(cè)主要內(nèi)容與技術(shù)方案選取以目的基因設(shè)計(jì)的引物針對(duì)性的對(duì)所需檢測(cè)的植株的DNA進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果對(duì)植物的抗病性做鑒定所需檢測(cè)植株的DNA提取、檢測(cè)PCR擴(kuò)增、檢測(cè)第18頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-1基因大部分的TYLCV抗性商品品種都含有Ty-1,最早鑒定出的抗性位點(diǎn)Ty-1是源于智利番茄的，將1個(gè)主效基因Ty-1定位在番茄第6號(hào)染色體上。該基因被定位在RFLP標(biāo)記TG297和TG97附近,與標(biāo)記TG97緊密連鎖；目前以PCR為基礎(chǔ)的TG97標(biāo)記已被各研究機(jī)構(gòu)和商業(yè)公司用于MAS(Molecularassistantselection)。第19頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月ZamirD,etal.Mappingandintrogressionofatomatoyellowleafcurlvirustolerancegene,Ty-1[J].TheoreticalandAppliedGenetics,1994,88:141-146第20頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-2基因抗病基因Ty-2來源于野生種多毛番茄材料多毛番茄Ih902是危地馬拉和其它中東國(guó)家很重要的育種系抗性材料第22頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月GarciaBE,etal.Co-dominantSCARmarkerfordetectionofthebegomovirusresistanceTy-2locusderivedfromSolanumhabrochaitesintomatogermplasm，,2007許爽等，多重PCR技術(shù)鑒定番茄Ty-2和Ty-3基因及田間驗(yàn)證，2009第23頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-3基因Ty-3基因定位于第6染色體長(zhǎng)臂上cLEG2312P16和T1079之間第24頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月JensenKS,etal.Co-dominantSCARMarker,P6-25,forDetectionofthety-3,Ty-3,andTy-3aallelesat25cMofChromosome6ofTomato[J]./GeminivirusResistantTomatoes/Markers/MAS-Protocols/Ty3a-allele.pdf.2007第25頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-1抗性基因檢測(cè)結(jié)果Ty-1基因的CAPS引物擴(kuò)增結(jié)果

Ty-1基因的398bp特異片段經(jīng)TaqⅠ酶切第27頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-1基因的398bp特異片段經(jīng)TaqⅠ酶切后為303bp和98bp的特異片段，ty-1基因的398bp的特異片段不能被TaqⅠ酶切。材料1，2，3，5，9，10的基因型為Ty-1/ty-1；材料4，7，8的基因型為Ty-1/Ty-1；材料6，7，8的基因型為ty-1/ty-1。Ty-1基因的CAPS1引物擴(kuò)增后經(jīng)TAQI酶切結(jié)果第28頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月表Ty-1酶切反應(yīng)體系（10μL）成分Composition含量ContentTaqⅠ(Taq酶)0.5μL100×BSA0.1μL10×Buffer1μLPCR產(chǎn)物8.4μL第29頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-2抗性基因檢測(cè)結(jié)果（SCAR1）

Ty-2基因的SCAR1引物擴(kuò)增結(jié)果所有材料均沒有出現(xiàn)Ty-2基因900bp的特異片段，僅擴(kuò)增出ty-2基因的800bp的特異片段，表明本所有鑒定材料均不含Ty-2抗性基因。第30頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-2抗性基因檢測(cè)結(jié)果（SCAR2）

Ty-2基因的SCAR2引物擴(kuò)增結(jié)果Ty-2/Ty-2基因型的植株均擴(kuò)增出600bp的特異片段，ty-2/ty-2基因型的株系均擴(kuò)增出約480bp的特異片段，Ty-2/ty-2基因型的株系擴(kuò)增出600bp和480bp的特異片段，與SCAR1對(duì)這22份材料鑒定結(jié)果完全一致。第31頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月Ty-3抗性基因檢測(cè)結(jié)果

Ty-3基因的SCAR3引物擴(kuò)增結(jié)果材料1，2，4，7，8的基因型為Ty-3/Ty-3，材料3，5，9，10的基因型為Ty-3/ty-3，材料6，11，12的基因型為ty-3/ty-3。第32頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月涉及實(shí)驗(yàn)技術(shù)番茄DNA提取瓊脂糖凝膠電泳PCR反應(yīng)第33頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月1.獲取細(xì)胞：研磨、勻漿……2.裂解細(xì)胞：凍融、SDS……3.分離DNA：

CTAB、苯酚……4.純化DNA

乙醇、RNA酶……真核細(xì)胞的核基因組存在于細(xì)胞核內(nèi)，所以提取真核基因組DNA需要先破碎細(xì)胞膜和核膜，然后分離和純化DNA。提取過程中要防止酸、堿和DNA酶對(duì)DNA的降解番茄DNA提取第34頁，課件共35頁，創(chuàng)作于2023年2月瓊脂糖凝膠