γ￣萜品烯(.)?(２)苦橙３個部位揮發(fā)油表現出不同程度的抗氧化活性?其中苦橙幼果、葉及花的揮劉亞男?文雅麗?陳霞蔚?等?.苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析[Ｊ].廣西植物?(６):苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析摘要:為較全面地研究苦橙(.)全植株揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性?該研究以其葉、花、幼果為材料?采用水蒸氣蒸餾法()結合氣相色譜－質譜(￣)聯用技術分析其成分?并利用體外測試方法比較了三者的抗氧化與抗菌活性?結果表明:(１)從苦橙葉、花、幼果３個部位揮發(fā)油中共分離鑒定出種成分?３個部位的揮發(fā)油成分種類及含量存在一定差異?其中種為共有成分?從葉中鑒芳樟醇(.)和ｄ￣檸檬烯(.)?從幼果中鑒定出種揮發(fā)性成分?主要含有ｄ￣檸檬烯(.)和定出芳樟醇(.)和ｄ￣檸檬烯(.)?從幼果中鑒定出種揮發(fā)性成分?主要含有ｄ￣檸檬烯(.)和?幼果揮發(fā)油的抗氧化活性最好?(３)苦橙幼果揮發(fā)油對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌表現出的抗菌活性強于葉和花?該研究結果為苦橙葉、花及其幼果中揮發(fā)油的提取與利用提供了理論依據??:?::.?廣西植物卷的鈴蘭香味、清新的檸檬香味和柑橘味?廣泛應用于香料、日化和食品等方面(?)?已進入美國食品香料和萃取物制造者協會()的食用香料名錄?同時被?中國食品添加劑使用衛(wèi)生標準?納入允許食品香料?更為重要的是?從苦橙中的鈴蘭香味、清新的檸檬香味和柑橘味?廣泛應用于香料、日化和食品等方面(?)?已進入美國食品香料和萃取物制造者協會()的食用香料名錄?同時被?中國食品添加劑使用衛(wèi)生標準?納入允許食品香料?更為重要的是?從苦橙中及、法國等地被用來緩解多種疼痛、抑郁、痙攣等)γ￣苦橙(.)為蕓香科()柑橘屬常綠帶刺小喬木?為酸橙()的一個栽培變種?廣泛種植于中國長江以南地區(qū)(黃善松等?)?作為中藥枳實與枳脹、破氣消積、化痰散痞之功效?現代研究表明?苦橙可用于焦慮癥、肺癌和前列腺癌等多種疾病香科植物普遍含有揮發(fā)油?主要成分為萜烯類、芳香族、脂肪族和含硫含氮類化合物(靖會和佐建鋒??陳麗艷和崔志恒?)?而苦橙揮發(fā)油植物資源是指來源于植物的器官(如根、莖、研究者開始關注藥用植物的非藥用部位或全株?檢測其成分和效用差異?以實現資源的全面利用?柑橘屬植物果實在外果皮的表層生長有大量油囊?合成并儲存具有獨特芳香氣味的揮發(fā)油?廣泛(樊榮?)?然而?苦橙藥用部位主要是其未成熟的果實?已有研究對苦橙葉和花中揮發(fā)油成分進行了分析?并進行了抗炎和抗菌活性比較?但其幼果的揮發(fā)油成分種類、相對含量和抗氧化活性尚不明確?而將其幼果作為揮發(fā)油提取原料也未見報道?為了全面開發(fā)苦橙全植株?避免造成資源浪費?從而達到綜合開發(fā)其地上部分的目的?本研究采用水蒸氣蒸餾法分別對苦橙葉、花及其幼果的揮發(fā)油進行提取?并應用￣分析其化學成分?通過法和法對苦橙不同部位揮發(fā)油的抗氧化活性進行研究?并對其抗菌活性進行評價?以期為苦橙葉、花及其幼果中揮發(fā)油的提取與利用提供理論依據?材料:苦橙葉、花和幼果來源于浙江省金華市浙八味中藥材市場?以上材料由桂林醫(yī)學院黃德青副教授鑒定為苦橙(.)試劑:(純度≥)、(純度為)、(純度為)均購自￣公司?瓊脂粉購自成都科龍化學試劑有限公司?無水乙醇購自南寧西隴化工有限責任公司?６期劉亞男等:苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析/低溫冷卻循環(huán)泵(鞏義市予華儀器有限責光光度計(上海美譜達科學儀器有限公司)?￣(光光度計(上海美譜達科學儀器有限公司)?￣(昆山市超聲儀器有限公司)?(昆山市超聲儀器有限公司)?苦橙葉揮發(fā)油的提取依照年版?中國藥典?四部通則中揮發(fā)油測定法提取苦橙)加入蒸餾水?置于電爐上加熱使微沸?連續(xù)提取５發(fā)油?連續(xù)提?。荡魏蟮玫娇喑热~揮發(fā)油供試品苦橙花揮發(fā)油的提取取鹽浸苦橙花.苦橙幼果揮發(fā)油的提取取干燥苦橙幼果法提取苦橙幼果揮發(fā)油(.Ｏ)?連續(xù)提取４次得黃綠色油狀物?冷卻后收集得２.苦橙幼果揮幼果揮發(fā)油單次提取率為０.?.析色譜條件:￣石英毛?進樣口溫度.析色譜條件:￣石英毛婷等()的方法?精密稱取６.于棕色容量瓶中?用蒸餾水溶解并定容至刻溶液?另精密稱取.于棕色容量瓶中?用蒸餾水溶解并定容至刻度?搖勻后得.合定容至棕色容量瓶中?室溫下暗處反應后?用無水乙醇稀釋至其在處吸光濃度揮發(fā)油乙醇溶液和工作液?渦旋混勻?置于室溫下避光反應后于處測量樣品吸光度()?用無水乙醇代替樣品溶液按上述方法測定對照品溶液吸光度()?用無水乙醇代替工作液按上述方法測定空白吸光度()?以為陽性對照?平行試驗３次取平自由基清除率(％)＝()×等()的方法?精密稱取標準品于棕色容量瓶中?用無水乙醇溶解并定容至刻母液?置于冰棕色容量瓶中?用無水乙醇稀釋并定容?搖工作液?在具塞試管中依次加入不同濃度的揮發(fā)油乙醇溶液反應后在處測定樣品吸光度()?用無水乙醇代替樣品溶液按上述方法測定對照品溶液吸光度()?用無水乙醇代替工作液按上述方法測定空白吸光度()?以為陽性對自由基清除率(％)＝()×學院微生物實驗室提供的３種致病菌?即大腸桿菌()、金黃色葡萄球菌(廣西植物卷明烯類成分是苦橙)和銅綠假單胞菌()?抽取供基中?通過經典的圓盤擴散試驗評估３種精油的制備陰性對照?用慶大霉素作陽性對照?℃下孵育后?通過測量抑菌圈的大小來評估抑菌活性?)的測定采用肉湯微量稀釋法測定精油對供試菌的(.?)?試驗菌懸液用無菌生理鹽水調至１×?不同部位精油在中采用２倍)μｇ.的最終濃度?將μＬ菌懸液轉移到孔培養(yǎng)板上?陽性對照品和陰性對照品分別用相同體積的慶大霉素溶液和空白溶液制備?不加供試品?℃下孵育?定義為無肉眼可見菌生長的測試樣品的最低濃度?利用峰面積歸一化法對其揮發(fā)性成分進行定量分析(魏婧等?)?所有數據均以３次重復測量的平均值±標準差表示?苦橙不同部位揮發(fā)油經￣分析后?得到采用.Ｌ標準譜庫計算機檢索進行定性分析?經質譜解析?苦橙３個部位中共鑒定出種苦橙不同部位揮發(fā)油經￣分析后?得到葉和花中含量最高的均是芳樟醇?分別為.、和γ￣萜品烯(.)?苦橙葉揮發(fā)油中醇類化合.?和γ￣萜品烯(.)?苦橙葉揮發(fā)油中醇類化合.?烯類占.?主要化學成分有芳樟醇)烯(４.)等?苦橙花揮發(fā)油中醇類化合物成分最酯類占２.?主要化學成分有芳樟醇(.)、發(fā)油中烯類成分最多?占.?醇類占.?６期劉亞男等:苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析表１苦橙不同部位中的揮發(fā)性成分及相對含量編號保留時間()化合物類別分子式相對含量(％)１２３假枯烯烯類烷烴類烯類 ４檜烯烯類５６７８偽檸檬烯烯類呋喃類烯類烯類— ———９紫蘇醇醇類Ｏ——芳香烴類 烯類烯類醇類酯類 異蒲勒醇烯類醇類——芳樟醇醇類Ｏ香芹醇醇類Ｏ 異蒲勒醇醇類醇類烯類醇類醇類醇類 — — —百里香酚醛類醇類醇類酚類Ｏ — — 薄荷醇醇類醇類醇類 — —橙花醇醛類醇類—— 甲酸芳樟酯酯類 廣西植物卷續(xù)表１編號保留時間()化合物類別分子式相對含量(％)檸檬醛醛類Ｏ 香芹酚酚類Ｏ 酚類Ｏ——吲哚吲哚類Ｎ——氨茴酸甲酯氨茴酸甲酯]酚類烴類烴類烯類烯類酯類 — — —— 可巴烯酯類烯類 丙酸葉醇酯酯類Ｏ 依蘭烯烯類——]茉莉酮烯類酮類Ｏ— — 烯類烯類— — 石竹烯烯類賽斯奎沙賓烷烴類——環(huán)苜蓿烯烯類酮類烯類烯類烯類烯類烯類 —— ——))喇叭烯烯類烯類 — —大根香葉烯醇類烯類 —桉油烯醇醇類醇類 藍桉醇醇類Ｏ 愈創(chuàng)木醇醇類Ｏ——白千層醇醇類醇類 — —６期劉亞男等:苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析續(xù)表１編號保留時間()化合物類別分子式相對含量(％)醇類Ｏ 月桂烯醇醇類Ｏ 白菖醇烯類醇類醇類— — 十氫二甲基甲乙烯基萘酚醇類酚類— —法尼醇烯類醇類— — 杜松樟腦萜類Ｏ 醇類醛類ＯＯ — —依蘭醇醇類Ｏ 烯類烯類ＯＯ— — 十六酸甲酯酯類Ｏ 鄰苯二甲酸二丁酯酯類Ｏ——西柏烯烯類 亞油酸甲酯酯類Ｏ 亞麻酸甲酯酯類Ｏ 葉綠醇醇類Ｏ—亞油酸乙酯酯類Ｏ :處有最強吸收峰?當其與抗氧化劑結合后?兩者反應能使溶液本身的藍綠色褪去?其褪色程度與抗氧化劑成定量關系?由圖２可知?和苦橙不同部位揮發(fā)油對自由基的清除能力均隨著濃度的增大而逐步增強?當苦橙葉揮發(fā)油濃.?表現出較強的抗氧化能力?當苦橙花揮?對的清除率可時?對的清除率可達.?而幼果、?可見?幼果的揮發(fā)油清除自由基能力優(yōu)于花和葉的?在單電子?在波長處有最大吸收?當其醇溶液與抗氧化劑反應時?抗氧化劑可以和孤對電廣西植物卷下同?圖３不同部位揮發(fā)油對自由基的清除率子配對使得吸收逐漸下降?甚至褪色消失?其吸光度下降程度與其接受的電子數量成定量關系?由對自由基的清除能力不斷增強?當苦橙葉的清除率可達.?與陽性組的清除率基本達到相同水平?并且繼續(xù)增大濃度?清除率基本保持不變?當苦橙花揮發(fā)油濃度小于.時?其對自由基的清除能力均小于陽性發(fā)油對自由基的清除率大于對自由基的清除率?最高清除率達.?苦橙幼?苦橙幼果揮發(fā)油對的清除率達.?繼續(xù)增大濃度?清除率見?幼果的揮發(fā)油清除自由基能力優(yōu)于花和葉的?(.２~.７)的大腸桿菌具有一定的抗菌活性?此外?苦橙的花和幼果對被試菌有較強的抗分別為.和.?３種揮發(fā)油對被試菌的值不同?大腸桿菌對揮發(fā)油更敏感?苦橙?苦橙幼果的常見的揮發(fā)油提取方法有水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取法、超聲波輔助萃取法等?超臨界流體萃取法雖然能夠提升揮發(fā)油的提取率?但從經濟效益、設備要求等多方面綜合考慮?水蒸氣蒸餾法更適用于工業(yè)生產(孫吳倩等?)?本研究采用水蒸氣蒸餾法提取苦橙葉、花及其幼果的揮發(fā)油?應用氣相色譜－質譜(￣)聯用技術對其化學成分進行定性定量分析?本研究結果表明油含量較高?易于獲取?為可持續(xù)利用資源?而苦橙３揮發(fā)油?應用氣相色譜－質譜(￣)聯用技術對而形成了各自的特性:苦橙葉揮發(fā)油呈微黃綠色松油醇(.)、甲酸芳樟酯(.)、橙花醇松油醇(.)、甲酸芳樟酯(.)、橙花醇)６期劉亞男等:苦橙不同部位揮發(fā)油成分及抗氧化與抗菌活性分析表種揮發(fā)油的抗菌活性微生物菌株抑制區(qū)直徑()最小抑制濃度.)慶大霉素慶大霉素大腸桿菌１８金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌董雪等(董雪等()對苦橙花揮發(fā)油化學成分分析發(fā)現其主要的化合物為醇類和萜烯類?葉一丹等()對苦橙葉揮發(fā)油化學成分研究發(fā)現其含酯類和醇類物質為主?它們與本研究結果一致?另外本研究發(fā)現苦橙幼果中萜烯類成分最多?這是有異于葉和花的地方?可能是植株在生長發(fā)育過程中的代謝產物轉化導致?藥用植物不同部位的生物學活性具有顯著性差異的現象已有前人的研究結果得到佐證:李慧敏等()研究發(fā)現北柴胡不同部位總黃酮根?查雨鋒等()研究表明三七根提取物對改善氧化損傷的作用優(yōu)于莖、葉、花提取物?此外也差異有助于明確物質在植株中轉運和積累機制?本研究結果表明苦橙不同部位揮發(fā)油對自由基和自由基均有較強的清除能力?幼果揮發(fā)油成分主要為萜烯類化合物?其抗氧化活性優(yōu)于葉和花?大部分蕓香科揮發(fā)油對葡萄球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌和枯草芽孢桿菌的生長均表現出不同程度的抑制活性(劉巧等?)?本研究中幼果揮發(fā)油表現出的抗菌活性優(yōu)于葉?可將幼果作為苦橙揮發(fā)油提取原料用于功效產品研可用葉、花作為苦橙揮發(fā)油提取原料以實現苦橙資源的綜合開發(fā)利用?參考文獻: : 科技大學學報(自然科學版)?(３):.][Ｄ].:及活性研究[Ｄ].廣州:華南理工大學:.]及活性研究[Ｄ].廣州:華南理工大學:.]