...v.藥物分析學(xué)是一門研究藥品及各種制劑的組成、理化性質(zhì)、真?zhèn)舞b別、純度檢查及其有效成分的含量測定等的一門學(xué)科。我們在進展藥物分析方面的復(fù)習(xí)時要注意以下幾點，略述一下。在藥物分析的根本知識方面的要求：對于藥物分析工作者來說，在熟練掌握藥物分析原理與操作技能的根底上，正確理解藥典和藥典中各項條文規(guī)定。例如藥典的內(nèi)容包括那些方面，各個條文的注意點，附錄中規(guī)定的片劑通那么中規(guī)定的重量差異是多少，對崩解時限有何規(guī)定，高效液相色譜中的用于反相層析的常用固定相，藥典中標準品，對照品與試藥的區(qū)別及選用原那么；正文局部的主要內(nèi)容，熟悉藥品質(zhì)量制定的原那么和內(nèi)容，凡例中內(nèi)容，例如藥典采用的計理單位，符號與專門術(shù)語，如溶解度中的一些概念，藥典中法定計量單位應(yīng)如何表示；黏度如何表示；壓力如何表示；什么是恒重；原料藥含量百分數(shù)如規(guī)定100%以上時，應(yīng)如何理解，等等都要熟練掌握，以及中國藥典和其他各國藥典的差異如美國藥典，美國國家處方集，英國藥典，日本藥局方等等以及有代表性的外國藥典的根本內(nèi)容和特點。熟悉誤差理論，掌握常用的統(tǒng)計學(xué)處理方法和分析效能的評價指標〔包括精細度、準確度、檢測限、定量限、選擇性、線性及范圍以及耐用性〕以及它們的意義。掌握藥品質(zhì)量標準的主要內(nèi)容和要求。雜質(zhì)是藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人們安康有害的物質(zhì)。雜質(zhì)按來源分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)。在藥物的一般雜質(zhì)工程包括氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、有機溶劑殘留量、枯燥失重等等，重點掌握砷鹽、重金屬檢查方法的內(nèi)容，操作過程中的注意點，枯燥失重測定法的熱分析法具體方法及應(yīng)用范圍。對一些公式的掌握，如比旋度的公式、標示量的公式、滴定度的公式等等。在藥物制劑分析方面，我們重點掌握片劑、注射劑、滴眼劑的穩(wěn)定性考察，以及它們的檢查工程。掌握藥物制劑分析的特點，掌握含量均勻度和溶出度檢查法，掌握apc復(fù)方制劑分析法和乳酸格林注射液的含量測定法。第二局部為各類藥物分析：熟悉中國藥典〔2000版〕收載的化學(xué)合成藥和構(gòu)造已經(jīng)明確的天然藥物，熟悉常用的鑒別反響和特殊雜質(zhì)的檢查方法；掌握主要含量測定方法。醇及其酯類中的雜質(zhì)較多，如山梨醇的重要雜質(zhì)是復(fù)原糖和總糖，苯甲醇的雜質(zhì)是苯甲醛，鹽酸苯海索的特殊雜質(zhì)是吡啶苯丙酮，掌握鹽酸苯海索片的所用的陰離子外表活性劑滴定法的原理，方法和條件。對巴比妥類藥物分析要掌握常用的鑒別反響，掌握酸量法、銀量法和紫外分光光度法等；對芳酸及其酯類藥物的分析，掌握藥物的鑒別法，阿司匹林、對氨基水楊酸鈉和氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)及其檢查方法，掌握酸堿滴定法、雙相滴定法。有機含氮類藥物的芳胺類藥物的鑒別特征試驗如重氮化——偶合反響，三氯化鐵，重金屬離子反響，雜環(huán)類藥物的分析如吡啶類藥物和生物堿類藥物的特征鑒別反響，掌握容量分析法，比色分析法。對“三素〞類藥物的分析：1.維生素類藥物va，ve，vb，vc的特征鑒別反響以及各類的定量方法；2.甾體激素類藥物：掌握本類藥物的分類及根本構(gòu)造以及可供分析的官能團，鑒別反響，掌握比色分析法〔四氮唑比色法，異煙肼法，ko-ber反響-鐵粉試劑法〕3.抗生素類藥物：掌握b-內(nèi)酰胺類抗生素的化學(xué)構(gòu)造特點與碘量法，酸堿滴定法和uv法，掌握四環(huán)素類藥物鑒別反響，掌握氨基糖苷類藥物的鑒別，并區(qū)別鏈霉素與慶大霉素鑒別法的異同點?？股氐男r測定方法有哪幾點。第三局部是各種分析方法：要掌握各類分析方法的根本理論和根本知識并掌握它們在各類藥品檢定中的應(yīng)用。如重量分析，容量分析：酸堿滴定法要求掌握酸堿的根本理論，酸堿的ph值的計算，酸堿滴定中常用的指示劑的名稱；沉淀滴定法要求掌握鉻酸鉀法，鐵銨礬法和吸附指示劑法的測定對象，測定條件及常用的指示劑；絡(luò)合滴定法要求掌握根本原理及其影響因素。氧瓶燃燒法，脂肪與脂肪油的檢驗方法，黏度測定法，折光率測定法，旋光度測定法，紫外-可見分光光度法，熒光分析法，紅外分光光度法，薄層色譜法，氣相色譜法，高效液相色譜法，電泳法，ph值測定法，電位法與永停滴定法，非水滴定法等等。吡啶類藥物異煙肼的鑒別試驗：復(fù)原反響。異煙肼的酰肼基有復(fù)原性，可復(fù)原硝酸銀中的Ag+成單質(zhì)銀，肼基那么被氧化生成氮氣。加氨制硝酸銀試液1ml，即產(chǎn)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。縮合反響。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑〔如芳醛〕發(fā)生縮合反響。異煙肼與香草醛反響，生成異煙腙，測定熔點供鑒別。沉淀反響。異煙肼分子中的吡啶環(huán)具有堿性，可以和重金屬鹽類〔如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀〕乙基苦味酸形成沉淀。異煙肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸銅-枸櫞酸試液反響，先產(chǎn)生綠色沉淀，加熱，沉淀變?yōu)榧t棕色。尼克剎米的鑒別：戊烯二醛反響。屬吡啶環(huán)的開環(huán)反響。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反響，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫氏堿。異煙肼也可發(fā)生戊烯二醛反響，但需先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用。與苯胺縮合形成黃色至棕黃色產(chǎn)物，與聯(lián)苯胺紫外分光光度法形成淡紅至紅色產(chǎn)物。水解反響。尼克剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺臭味逸出，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變成藍色。沉淀反響。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)也可以和重金屬離子反響。尼克剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀。異煙肼中游離肼的檢查：薄層色譜法。肼的檢測限為0.1μg，控制限量為0.02%.異煙肼的含量測定：異煙肼分子中的酰肼基具有復(fù)原性，可采用氧化復(fù)原滴定法測定其含量。溴酸鉀法。甲基橙作指示劑，溴酸鉀滴定止粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液〔0.1667mol/l〕相當于3.429mg的C6H7N3O。異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測定含量。還可使用溴量法、剩余碘量法測定含量，也可用非水溶液滴定法。尼克剎米含量測定：非水溶液滴定法。溶劑：冰醋酸，指示劑：結(jié)晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液藍綠色。每1ml高氯酸滴定液〔0.1mol/l〕相當于17.82mg的C10H14N2O。紫外分光光度法。測定尼克剎米注射劑含量。注射劑的溶劑對非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。非水滴定法：在非水溶劑〔有機溶劑與不含水的無機溶劑〕中進展滴定分析的方法。非水滴定法包括非水堿量法和非水酸量法。在非水溶劑中滴定，不僅能增大有機藥物的溶解度，還能改變藥物的化學(xué)性質(zhì)〔如藥物的酸堿性及其強度〕，使原來在水中不能進展完全的滴定反響能夠順利進展，從而擴大了酸堿滴定分析的應(yīng)用范圍。非水滴定法一、堿的滴定〔一〕溶劑：酸性溶劑，冰醋酸〔二〕標準溶液：基準物質(zhì)HClO4冰醋酸溶液，鄰苯二甲酸氫鉀〔三〕指示劑：結(jié)晶紫、喹哪啶紅、a－萘酚苯甲醇、電位法〔四〕測定藥物：堿性基團藥物、胺類、氨基酸類、含氮雜環(huán)、有機堿鹽弱酸鹽有機弱堿：胺類、生物堿類咖啡因有機酸堿金屬鹽：枸櫞酸鉀有機堿的氫鹵酸鹽：鹽酸麻黃堿有機堿的有機酸鹽：撲爾敏二、酸的滴定〔一〕溶劑：1、弱酸、極弱酸乙二胺、DMF2、不太弱羧酸醇類，乙醇3、混合酸甲基異丁酮，區(qū)分性溶劑甲醇－苯混合溶劑〔二〕滴定劑〔甲醇鈉；胺基乙醇鈉；氫氧化四丁基胺〕、基準物質(zhì)：苯甲酸〔三〕指示劑：溴酚藍：黃藍〔堿〕偶氮紫：紅藍〔堿〕百里酚藍：黃藍〔堿〕〔四〕測定的藥物：酸性基團的藥物羧酸類：苯甲酸酚類：苯酚磺酰胺類：磺胺嘧啶旋光度測定法的應(yīng)用主要包括以下幾個方面：1．藥物鑒別具有旋光性的藥物，在“性狀〞項下，一般都收載有“比旋度〞的檢驗工程。測定比旋度值可用來鑒別藥物或判斷藥物的純雜程度。?中國藥典?要求測定比旋度的藥物很多，如腎上腺素、硫酸奎寧、葡萄糖、丁溴東莨菪堿、頭孢噻吩鈉等。2．雜質(zhì)檢查具有光學(xué)異構(gòu)體的藥物，一般具有一樣的理化性質(zhì)，但其旋光性能不同，一般有左旋體、右旋體和消旋體之分，通過測定藥物中雜質(zhì)的旋光度，可以對藥物的純度進展檢查。3．含量測定具有旋光性的藥物，特別是在無其他更好的方法測定其含量時，可采用旋光度法測定。?中國藥典?采用旋光度法測定含量的藥物有葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液、右旋糖酐氯化鈉注射液、右旋糖酐葡萄糖注射液等。分析方法的驗證1.精細度：至少9次測定結(jié)果進展評價，用相對標準偏差〔RSD〕和可信限報告。2.準確度：由回收率表達，至少9次測定結(jié)果進展評價，可制備3個不同濃度樣品，各測3次。3.專屬性：一種方法僅對一種分析成分產(chǎn)生唯一信號鑒別反響、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性，如方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用多個方法補充。4.檢測限〔%、ppm或ppb〕：試樣中被測物能被測出的最低量，不必定量測定，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。常用方法：①目視法；②信噪比法〔3：1〕；③附上測試圖譜5.定量限：樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具一定準確度和精細度。進展雜質(zhì)和降解產(chǎn)物定量測定方法研究時，應(yīng)確定定量限。常以信噪比為10：1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量來確定。6.線性：實驗結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。要求列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。7.范圍：能到達一定精細度、準確度和線性的條件下，實驗方法適用的上下限濃度區(qū)間。8.耐用性：在條件稍有變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。變動因素：溶液的穩(wěn)定性、提取次數(shù)、時間酸堿滴定法在藥品檢驗中的應(yīng)用十分廣泛。常用的滴定方式有直接滴定法、間接滴定法等。1.直接滴定法C?Ka≥10-8的酸都可用堿滴定液滴定；C?Kb≥10-8的堿都可用酸滴定液滴定。如阿司匹林原料藥的含量測定方法。2.間接滴定法假設(shè)藥物難溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法時，可采用間接法測定。間接滴定法有剩余滴定法、置換滴定法等。如阿司匹林片的含量測定。沉淀法的根本原理主要內(nèi)容包括以下幾點：沉淀法是利用沉淀反響，將被測組分轉(zhuǎn)化為難溶物，以沉淀形式從溶液中別離出來，并轉(zhuǎn)化為稱量形式，最后稱定其重量進展測定的方法。沉淀法是重量分析法中最常用的一種分析方法。沉淀法的操作步驟是：取樣一溶解一加沉淀劑使其沉淀一過濾一洗滌一枯燥至恒重一稱量一計算。為了確保分析結(jié)果的準確，沉淀法對沉淀形式和稱量形式都有一定的要求。在試液中參加適當?shù)某恋韯贡粶y組分沉淀出來，這樣獲得的沉淀稱為沉淀形式。當沉淀形式經(jīng)過濾、洗滌、烘干或灼燒后所得的物質(zhì)形態(tài)，是最后供稱量時物質(zhì)的化學(xué)組成，故稱為稱量形式。沉淀形式與稱量形式可以一樣，也可以不同。1．對沉淀形式的要求〔1〕沉淀的溶解度要小，以保證被測組分能沉淀完全?！?〕沉淀要純潔，不應(yīng)帶入沉淀劑和其他雜質(zhì)。〔3〕沉淀易于過濾和洗滌，以便于操作和提高沉淀的純度。〔4〕沉淀易于轉(zhuǎn)化為稱量形式。2．對稱量形式的要求〔1〕稱量形式應(yīng)具有確定的化學(xué)組成，否那么無法計算分析結(jié)果?！?〕稱量形式應(yīng)具有足夠的化學(xué)穩(wěn)定性?！?〕稱量形式的分子量應(yīng)盡可能大，這樣可使稱量的物質(zhì)質(zhì)量較大，從而減小稱量誤差，提高方法的準確度。氧化復(fù)原滴定法是以氧化復(fù)原反響為根底的一類滴定方法。氧化復(fù)原反響的實質(zhì)是電子得失，物質(zhì)得失電子的能力與其氧化復(fù)原電對的電位上下有關(guān)，電位越高，其氧化態(tài)越易得到電子，是較強的氧化劑；電位越低，那么其復(fù)原態(tài)越易失去電子，是較強的復(fù)原劑。氧化復(fù)原滴定法在藥物分析中應(yīng)用廣泛，既可直接測定許多具有氧化性或復(fù)原性的物質(zhì)，又可間接測定一些不具有氧化復(fù)原性的物質(zhì)。亞硝酸鈉滴定法是利用亞硝酸鈉滴定液在鹽酸溶液中與芳伯氨基化合物發(fā)生重氮化反響，定量生成重氮鹽，來測定藥物含量的方法。其滴定反響如下：Ar-NH2+NaN02+2HCl→Ar-N2+C1-+NaCI+2H20本法易受滴定條件的影響，主要影響因素有：〔1〕酸的種類與濃度重氮化反響的速度與酸的種類及濃度有關(guān)，在HBr中最快，HCl中次之，H2S04或HN03中最慢。因HBr較貴，所以多用鹽酸。參加過量的鹽酸可加快反響的速度，使重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定，同時可防止重氮氨基化合物的形成。但酸度也不宜過高，否那么阻礙芳伯氨基的游離，反而影響重氮化反響速度?！?〕反響溫度與滴定速度重氮化反響速度隨溫度升高而加快；但溫度太高會使亞硝酸揮發(fā)和分解；溫度過低，反響的速度太慢。?中國藥典?規(guī)定在室溫〔10℃-30℃〕條件下快速滴定。即在滴定時將滴定管尖端插入液面下約2/3處，一次將大局部亞硝酸鈉滴定液在攪拌下迅速參加。在近終點時，將滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，繼續(xù)緩緩滴定至終點。將滴定管尖端插入液面下滴定可防止HN03的逸失。近終點時，藥物濃度極稀，滴定反響速度變慢，所以應(yīng)緩緩滴定。這樣既可縮短滴定時間，又可得到滿意結(jié)果。〔3〕參加溴化鉀的作用由于重氮化反響為分子反響，速度較慢。假設(shè)在滴定時向供試溶液中參加適量溴化鉀〔?中國藥典?規(guī)定參加2g〕，可加快重氮化反響的速度。〔4〕指示終點的方法?中國藥典?采用永停滴定法指示終點。永停滴定法裝置如圖4-4所示。永停滴定法采用兩支一樣的鉑電極，當在兩電極間加一低電壓〔如50mV〕時，電極在溶液中極化，在滴定終點前，僅有很小或無電流通過；但當?shù)竭_終點時，微過量的滴定液生成的亞硝酸〔HN02〕及其分解產(chǎn)物〔NO〕為可逆電對，在電極上可發(fā)生氧化復(fù)原反響，使電極去極化，溶液中即有電流通過，電流計指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，而指示終點、此外，還可以使用外指示劑法指示終點，如碘化鉀-淀粉糊劑或試紙。使用時將糊劑在白瓷板上鋪為薄層，用細玻璃棒蘸取少許測定液劃過，假設(shè)已到終點，溶液中應(yīng)有亞硝酸存在，亞硝酸可氧化I-成I2，I2與淀粉作用顯藍色，即為終點。非水堿量法通常是以冰醋酸為溶劑，高氯酸為滴定液。測定弱堿性藥物及其鹽類的分析方法，在藥物含量測定中應(yīng)用廣泛。1.溶劑堿的滴定宜選擇酸性溶劑，酸性溶劑是指給出質(zhì)子能力較強的溶劑，它能使弱堿的強度調(diào)平到溶劑陰離子水平，增強弱堿的表觀堿強度，從而使滴定突躍范圍增大。冰醋酸是滴定弱堿性物質(zhì)最常用的酸性溶劑。市售的冰醋酸中含有水分，而水分的存在可影響滴定突躍，所以一般按計算量參加醋酐，以除去水分。2.滴定液非水堿量法通常使用高氯酸的冰醋酸溶液作滴定液，這是因為高氯酸在冰醋酸中有較強的酸性，且絕大多數(shù)有機堿的高氯酸鹽易溶于有機溶劑，有利于滴定的進展。3.指示劑非水堿量法可用指示劑或電位法指示終點。常用的指示劑是結(jié)晶紫，結(jié)晶紫分子中的氮原子能結(jié)合多個質(zhì)子而表現(xiàn)為多元堿。在滴定中，隨著溶液酸度的增加，結(jié)晶紫由紫色〔堿式色〕變至藍紫、藍、藍綠、綠、黃綠，最后轉(zhuǎn)為黃色〔酸式色〕。在滴定不同強度的堿時，終點顏色不同，滴定較強堿時，終點為藍色或藍綠色；滴定極弱堿時，終點為藍綠色或綠色。除結(jié)晶紫外，有時也使用α-萘酚苯甲醇、喹哪啶紅等指示劑。強酸滴定弱堿，此類滴定與強堿滴定弱酸相似?！?〕滴定曲線與強堿滴定弱酸相似，但pH值變化方向相反。〔2〕突躍范圍pH值為6.24～4.30，在酸性區(qū)域范圍內(nèi)?！?〕計量點的pH值為5.27。〔4〕指示劑只能選甲基紅或溴甲酚綠等.不能選酚酞?！?〕突躍范圍取決于弱堿強度Kb和濃度C，只有C?Kb＞10-8才能準確滴定。光線自一種透明介質(zhì)進入另一種透明介質(zhì)時，由于兩種介質(zhì)的密度不同，光的進展速度發(fā)生變化，從而使光的傳播方向發(fā)生改變，并遵從折射定律。根據(jù)折射定律，折光率是光線入射角的正弦與光線折射角的正弦的比值。在一定的條件〔介質(zhì)、溫度、光的波長〕下，折光率為一常數(shù)。藥品檢驗中測定的折光率系指光線從空氣進入供試品的折光率。物質(zhì)的折光率因溫度或光線波長的不同而改變。透光物質(zhì)的溫度升高，折光率變??；光線的波長越短，折光率就越大。?中國藥典?規(guī)定，采用鈉光譜的D線〔589.3nm〕測定供試品相對于空氣的折光率，除另有規(guī)定外，供試品的溫度應(yīng)為20℃，在此條件下測得的折光率以表示。折光率是液體藥物的物理常數(shù)。測定折光率可以區(qū)別不同的藥物，也可以檢查某些藥物的純雜程度或測定其含量。折光率測定法的測定方法主要內(nèi)容如下：測定折光率使用折光計，常用阿培折光計。由于折光率與溫度有關(guān)，故阿培折光計還裝有保溫層，可通入一定溫度的水以保持溫度恒定。阿培折光計的讀數(shù)范圍為1.3～1.7，能讀數(shù)至0.0001。測定前，折光計讀數(shù)應(yīng)用校正用棱鏡或水進展校正，水的折光率20℃時為1.3330，25℃時為1.3325，40℃時1.3305。除另有規(guī)定外，應(yīng)調(diào)節(jié)溫度至20℃±0.5℃。測定時，應(yīng)重復(fù)讀數(shù)三次，三次讀數(shù)的平均值即為供試品的折光率。旋光度測定法的應(yīng)用主要包括以下幾個方面：1．藥物鑒別具有旋光性的藥物，在“性狀〞項下，一般都收載有“比旋度〞的檢驗工程。測定比旋度值可用來鑒別藥物或判斷藥物的純雜程度。?中國藥典?要求測定比旋度的藥物很多，如腎上腺素、硫酸奎寧、葡萄糖、丁溴東莨菪堿、頭孢噻吩鈉等。2．雜質(zhì)檢查具有光學(xué)異構(gòu)體的藥物，一般具有一樣的理化性質(zhì)，但其旋光性能不同，一般有左旋體、右旋體和消旋體之分，通過測定藥物中雜質(zhì)的旋光度，可以對藥物的純度進展檢查。3．含量測定具有旋光性的藥物，特別是在無其他更好的方法測定其含量時，可采用旋光度法測定。?中國藥典?采用旋光度法測定含量的藥物有葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液、右旋糖酐氯化鈉注射液、右旋糖酐葡萄糖注射液等。pH值是溶液中氫離子活度的負對數(shù)，用來表示溶液的酸度。用于pH值測定的裝置稱為pH計或酸度計。酸度計由pH測量電池和pH指示器兩局部組成。pH測量電池是由玻璃電極和飽和甘汞電極〔saturatedcalomelelectrode，SCE〕與被測溶液組成的原電池。玻璃電極為指示電極，指示電極系指其電極電位能隨溶液中待測離子活度的變化而變化。甘汞電極為參比電極，參比電極的電極電位不受溶液組成變化的影響，電極電位比擬穩(wěn)定，用以作為指示電極電位的參比基準。pH指示器那么是一個具有高輸入阻抗的電子電位計。中國藥典?規(guī)定，測定pH值應(yīng)使用酸度計，酸度計應(yīng)定期進展計量檢定，并符合國家有關(guān)規(guī)定。pH值的測定方法如下：1．pH-mV選擇將pH-mV選擇置于pH檔，可將測得的電動勢直接轉(zhuǎn)換成pH讀數(shù)。2．溫度補償酸度計上每一pH示值間隔相當于2.303RT／F伏，此值隨測量電池中溶液的溫度變化而變動。因此，pH計上都裝有溫度補償旋鈕，用以調(diào)節(jié)指針偏轉(zhuǎn)一個pH單位所相當?shù)暮练鼣?shù)。例如，25％時每改變一個pH單位，相當于電動勢要改變59mV；如果溶液為15℃,測量前將溫度旋鈕轉(zhuǎn)至15℃位置，這時pH計的每一pH讀數(shù)間隔相當于57mV。3．定位使用酸度計時，須預(yù)先用標準緩沖液對儀器進展校正〔定位〕，用定位調(diào)節(jié)鈕調(diào)節(jié)，使pH示值與標準緩沖液的pH值一致。4．測定經(jīng)過溫度補償調(diào)節(jié)和定位調(diào)節(jié)后，換上待測溶液進展測定，pH計就可準確指示出供試液的pH值。由于pH標準緩沖液是pH測定的基準，所以其配制方法及其pH值確實定均須符合規(guī)定。?中國藥典?2005年版附錄“pH值測定法〞項下，規(guī)定了五種不同pH值的標準緩沖液，用來對pH計進展校正〔定位〕。它們分別是：草酸鹽標準緩沖液、苯二甲酸鹽標準緩沖液、磷酸鹽標準緩沖液、硼砂標準緩沖液及氫氧化鈣標準緩沖液，在25℃時它們的pH值分別為l.68，4.01，6.86，9.18，12.45。?中國藥典?列出了以上五種標準緩沖液在0℃～60％范圍內(nèi)〔間隔5℃〕的pH值，作為pH測定的統(tǒng)一標準。測定pH值時，應(yīng)嚴格按儀器的使用說明書操作，并注意以下事項：1．測定前，按各品種項下的規(guī)定，選擇兩種pH值約相差3個pH單位的標準緩沖液，并使供試液的pH值處于二者之間。2．取與供試液pH值較接近的第一種標準緩沖液對儀器進展校正〔定位〕，使儀器數(shù)值與標準緩沖液的數(shù)值一致。3．儀器定位后，再用第二種標準緩沖液核對儀器示值，誤差應(yīng)不大于±0.02pH單位。假設(shè)大于此偏差，那么應(yīng)小心調(diào)節(jié)斜率，使示值與第二標準緩沖液的數(shù)值相符。重復(fù)上述定位與斜率調(diào)節(jié)至符合要求。否那么，需檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。4．每次更換標準緩沖液或供試液前，應(yīng)用水充分洗滌電極，然后將水吸盡，也可用所換的標準緩沖液或供試液洗滌。5．在測定高pH值的供試品時，應(yīng)注意堿誤差的影響。堿誤差是由于普通玻璃電極對Na+也有響應(yīng)。使測得的H+活度高于真實值，即pH讀數(shù)低于真實值，產(chǎn)生負誤差。假設(shè)使用鋰玻璃電極，可克制堿誤差的影響。6．對弱緩沖液〔如水〕的pH值測定，先用苯二甲酸氫鉀標準緩沖液校正儀器后測定供試液，并重取供試液再測，直至pH值的讀數(shù)在1分鐘內(nèi)改變不超過±0.05單位為止；然后再用硼砂標準緩沖液校正儀器，再如上法測定；二次pH值的讀數(shù)相差不應(yīng)超過0.1，取二次讀數(shù)的平均值為其pH值。7．配制標準緩沖液與溶解供試品的水，應(yīng)是新沸過的冷水，其pH值應(yīng)為5.5～7.0。8．標準緩沖液一般可保持2～3個月，假設(shè)發(fā)現(xiàn)有渾濁、發(fā)霉或沉淀等現(xiàn)象時，那么不能繼續(xù)使用。在單位時間內(nèi)有兩條波長不同的光束λ1和λ2交替照射同一個溶液，由檢測器測出的吸收度是這兩個波長下吸收度的差值△A。△A與被測定物質(zhì)的濃度成正比，這個方法稱雙波長分光光度法。雙波長分光光度法的關(guān)鍵是正確選擇兩波長λ1、λ2，要求被測組分D在兩波長處的△A足夠大，而干擾組分G和背景在兩波長應(yīng)有一樣的吸光度(△A=0)。為滿足上述要求，一般是將λ2選在待測組分的最大吸收波長，λ1是選在干擾組分等吸收波長?？蓽y定渾濁樣品，也可測定吸收光譜相互重疊的混合物樣品，也是當雜質(zhì)使主峰產(chǎn)生肩峰時測定主峰物質(zhì)的較好定量方法。紫外-可見吸收光譜法是定量分析最有用的工具之一，由于一般具有紫外-可見光譜的化合物值ε都很高，并且測定重復(fù)性常常也較好，因此用作定量分析要比紅外光譜法靈敏和準確。它的理論根據(jù)就是比耳定律：A=εbc摩爾光系數(shù)ε是物質(zhì)的特征系數(shù)之一，同一物質(zhì)的ε當然一樣，因此在一樣光徑的吸收池中，A與c成正比。將一純物質(zhì)的一系列不同濃度的樣品，放在一樣光徑的吸收池中，測得其吸光度后，用吸光度對濃度作圖，就可以得到一條通過原點的直線，這就是標準曲線或分析曲線。將同類的待測物質(zhì)放在相同光徑的池中，在一樣儀器下測得吸光度A,就可從標準曲線上查得它的濃度，這就是化學(xué)分析中最常用的標準曲線法。如果對樣品中的單組分〔樣品中只有一種吸收物質(zhì)〕或互相不干擾的吸收組分進展定量測定，就可以采用這種標準曲線法。但要注意如下幾點：⑴進展定量測定用的波長最好在待測樣品的吸收峰處。⑵制作一條標準曲線至少要5至7個點并且最好要做復(fù)份或三份。⑶標準曲線所用的濃度范圍要包括待樣品的吸光度。如超出濃度范圍，應(yīng)稀釋待測樣品。⑷標準樣品和待測樣品必須使用一樣的溶劑系統(tǒng)和反響系統(tǒng)。⑸標準樣品和待測樣品必須使用一樣的儀器條件測定。吸收池光徑要一樣,并進展匹配校正。⑹如儀器進展維修，更換元件，或重新校正波長時，必須重新制作標準曲線待用。內(nèi)標法與外標法一、內(nèi)標法什么叫內(nèi)標法?怎樣選擇內(nèi)標物?內(nèi)標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，參加一種內(nèi)標物質(zhì)以校誰和消除出于操作條件的波動而對分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準確度。內(nèi)標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標法時，在樣品中參加一定量的標準物質(zhì)，它可被色譜拄所別離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標物和待測組分的峰面積與相對響應(yīng)值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標法定量時，內(nèi)標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標物應(yīng)當是一個能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準確、的量加到樣品中去，它應(yīng)當和被分析的樣品組分有根本一樣或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)構(gòu)造、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。當然，在色譜分析條什下，內(nèi)標物必須能與樣品中各組分充分別離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比擬關(guān)心化臺物在一個復(fù)雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化臺物作內(nèi)標，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原那么。在使用內(nèi)標法定量時，有哪些因素會影響內(nèi)標和被測組分的峰高或峰面積的比值?影響內(nèi)標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時出現(xiàn)?；瘜W(xué)方面的因素包括：1、內(nèi)標物在樣品里混合不好；2、內(nèi)標物和樣品組分之間發(fā)生反響，3、內(nèi)標物純度可變等。對于一個比擬成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題(如滲漏)對絕對面積的影響比擬大，對面積比的影響那么要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比方進樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標濃度之間有很大的差異，檢測器非線性等。進樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比擬可靠，而色譜固看來也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生疑心的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定，在制作內(nèi)標標準曲線時應(yīng)注意什么?在用內(nèi)標法做色話定量分析時，先配制一定重量比的被測組分和內(nèi)標樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標準曲線。在實際樣品分析時所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標準曲線時所用的條件一致，因此，在制作標準曲線時，不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等)，還應(yīng)注明進樣體積和內(nèi)標物濃度。在制作內(nèi)標標準曲線時，各點并不完全落在直線上，此時應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標準偏差，在使用過程中應(yīng)定期進展單點校正，假設(shè)所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用，假設(shè)大于2，那么應(yīng)重作曲線，如果曲線在鉸短時期內(nèi)即產(chǎn)生變動，那么不宜使用內(nèi)標法定量。二、外標法用待測組分的純品作對照物質(zhì)，以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比擬進展定量的方法稱為外標法。此法可分為工作曲線法及外標一點法等。工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全一樣的條件下，準確進樣與對照品溶液一樣體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標準曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算，工作曲線法也可以用外標二點法代替。通常截距應(yīng)為零，假設(shè)不等于零說明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時，可用外標一點法(直接比擬法)定量。外標一點法是用一種濃度的對照品溶液比照測定樣品溶液中i組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在一樣條件下屢次進樣，測得峰面積的平均值，用下式計算樣品中i組分的量：W＝A(W)／(A)式中W與A分別代表在樣品溶液進樣體積中所含i組分的重量及相應(yīng)的峰面積。(W)及(A)分別代表在對照品溶液進樣體積中含純品i組分的重量及相應(yīng)峰面積。外標法方法簡便，不需用校正因子，不管樣品中其他組分是否出峰，均可對待測組分定量。但此法的準確性受進樣重復(fù)性和實驗條件穩(wěn)定性的影響。此外，為了降低外標一點法的實驗誤差，應(yīng)盡量使配制的對照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。外標法externalstandardmethod色譜分析中的一種定量方法，它不是把標準物質(zhì)參加到被測樣品中，而是在與被測樣品一樣的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進展比擬求得被測組分的含量。外標物與被測組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時外標物的濃度應(yīng)與被測物濃度相接近，以利于定量分析的準確性。三、定量分析中怎樣選擇內(nèi)標法或外標法(來源：藥物分析網(wǎng)〕選一與欲測組分相近但能完全別離的組分做內(nèi)標物〔當然是樣品中沒有的組分〕，然后配制欲測組分和內(nèi)標物的混合標準溶液，進樣得相對校正因子。再將內(nèi)標物參加欲測組分的樣品中，進樣后測得欲測組分和內(nèi)標物的定量參數(shù)。用內(nèi)標法公式計算即可。內(nèi)標法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標物，參加到準確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計算被測組分的含量。選擇內(nèi)標物有4個要求：1.內(nèi)標物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全別離；3.參加內(nèi)標物的量應(yīng)接近于被測組分；4.色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。內(nèi)標法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準確，由于通過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進展計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標物和試樣都要準確稱量，有時尋找適宜的內(nèi)標物也有困難。外標法簡便，但進樣量要求十分準確，要嚴格控制在與標準物一樣的操作條件下進展，否那么造成分析誤差，得不到準確的測量結(jié)果。復(fù)習(xí)總結(jié)：生物堿類藥物〔重點在鑒別，N的位置，有哪些電效應(yīng)〕苯烴胺類〔鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿〕氮原子在側(cè)鏈上，堿性較一般生物堿強，易與酸成鹽。[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理發(fā)布]托烷類〔硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿〕阿托品和山莨菪堿是由托烷衍生的醇〔莨菪醇〕和莨菪酸縮合而成，具有酯構(gòu)造。分子構(gòu)造中，氮原子位于五元酯環(huán)上，故堿性也較強，易與酸成鹽。喹啉類〔硫酸奎寧和硫酸奎尼丁〕奎寧和奎尼丁為喹啉衍生物，其構(gòu)造分為喹啉環(huán)和喹啉堿兩個局部，各含一個氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹啉堿微脂環(huán)氮，堿性強醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理。異喹啉類〔鹽酸嗎啡和磷酸可待因〕嗎啡分子中含有酚羥基和叔胺基團，故屬兩性化合物，但堿性略強；可待因分子中無酚羥基，僅存在叔胺基團，堿性較嗎啡強。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理吲哚類〔硝酸士的寧和利血平〕士的寧和利血平分子中含有兩個堿性強弱不同的氮原子，N1處于脂肪族碳鏈上，堿性較N2強，故士的寧堿基與一分子硝酸成鹽。黃嘌呤類〔咖啡因和茶堿〕咖啡因和茶堿分子構(gòu)造中含有四和氮原子，但受鄰位羰基吸電子的影響，堿性弱，不易與酸結(jié)合成鹽，其游離堿即供藥用。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理鑒別試驗：特征鑒別反響。1.雙縮脲反響系芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇構(gòu)造的特征反響。鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反響，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，參加乙醚后，無水銅配位化合物及其有2個結(jié)晶水的銅配位化合物進入醚層，呈紫紅色，具有4個結(jié)晶水的銅配位化合物那么溶于水層呈藍色。2.Vitali反響系托烷生物堿的特征反響。硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿等托烷類藥物均顯莨菪酸構(gòu)造反響，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基〔或二硝基〕衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。3.綠奎寧反響系含氧喹啉〔喹啉環(huán)上含氧〕衍生物的特征反響硫酸奎寧和硫酸奎尼丁都顯綠奎寧反響，在藥物微酸性水溶液中，滴加微過量的溴水或氯水，再參加過量的氨水溶液，即顯翠綠色。4.Marquis反響系嗎啡生物堿的特征反響。取得鹽酸嗎啡，加甲醛試液，即顯紫堇色。靈敏度為0.05μg。5.Frohde反響系嗎啡生物堿的特征反響。鹽酸嗎啡加鉬硫酸試液0.5ml,即顯紫色,繼變?yōu)樗{色,最后變?yōu)樽鼐G色.靈敏度為0.05μg。6.官能團反響系吲哚生物堿的特征反響。利血平構(gòu)造中吲哚環(huán)上的β位氫原子較活潑，能與芳醛縮合顯色。與香草醛反響。利血平與香草醛試液反響，顯玫瑰紅色。與對-二甲氨基苯甲醛反響。利血平加對-二氨基苯甲醛，冰醋酸與硫酸，顯綠色，再加冰醋酸，轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。7.紫脲酸反響系黃嘌呤類生物堿的特征反響。咖啡因和茶堿中加鹽酸與氯酸鉀，在水浴上蒸干，遇氨氣即生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉試液，紫色即消失。8.復(fù)原反響系鹽酸嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反響。嗎啡具弱復(fù)原性。本品水溶液加稀鐵氰化鉀試液，嗎啡被氧化生成偽嗎啡，而鐵氰化鉀被復(fù)原為亞鐵氰化鉀，再與試液中的三氯化鐵反響生成普魯士藍?？纱驘o復(fù)原性，不能復(fù)原鐵氰化鉀，故此反響為嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反響。特殊雜質(zhì)檢查：利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異。硫酸奎寧中“氯仿-乙醇中不溶物〞的檢查鹽酸嗎啡中“其它生物堿〞的檢查旋光性的差異：用于硫酸阿托品中“莨菪堿〞的檢查對光選擇性吸收的差異：利血平生產(chǎn)或儲存過程中，光照和有氧存在下均易氧化變質(zhì)，氧化產(chǎn)物發(fā)出熒光。因此規(guī)定：供試品置紫外光燈〔365nm〕下檢視，不得顯明顯熒光。吸附性質(zhì)的差異：硫酸奎寧制備過程中可能存在“其它金雞納堿〞。利用吸附性質(zhì)的差異，采用硅膠G薄層進展檢查。規(guī)定限度為0.5%。利用藥物和雜質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)上的差異。與一定試劑反響產(chǎn)生沉淀硫酸阿托品制備過程中可能帶入〔如莨菪堿、顛茄堿〕雜質(zhì)，因此需要檢查“其它生物堿〞。利用其它生物堿堿性弱于阿托品的性質(zhì)，取供試品的鹽酸水溶液，參加氨試液，立即游離，發(fā)生渾濁。規(guī)定0.25g藥物中不得發(fā)生渾濁。與一定試劑產(chǎn)生顏色反響①鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查②鹽酸嗎啡中罌粟堿的檢查③磷酸可待因中嗎啡的檢查④硝酸士的寧中馬錢子堿的檢查含量測定非水溶液滴定法：生物堿類藥物一般具有弱堿性，通?？稍诒姿峄虼佐人嵝匀芤褐?，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示劑或電位法確定終點。⑴氫鹵酸鹽的滴定在滴定生物堿的氫鹵酸鹽時，一般均預(yù)先在冰醋酸中參加醋酸汞的冰醋酸溶液，使氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對滴定反響的不良影響。參加的醋酸汞量缺乏時，可影響滴定終點而使結(jié)果偏低，過量的醋酸汞〔理論量的1～3倍〕并不影響測定的結(jié)果。⑵硫酸鹽的測定硫酸為二元酸，在水溶液中能完成二級電離，生成SO42-，但在冰醋酸介質(zhì)中，只能離解為HSO4-，不再發(fā)生二級離解。因此，生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸的介質(zhì)中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。硫酸阿托品的含量測定。溶劑：冰醋酸和醋酐，指示劑：結(jié)晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液顯純藍色。硫酸奎寧的含量測定。1摩爾的硫酸奎寧可消耗3摩爾的高氯酸。硫酸奎寧片的含量測定。硫酸奎寧經(jīng)強堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，在與高氯酸反響，因此1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸。⑶硝酸鹽的測定：硝酸在冰醋酸介質(zhì)中雖為弱酸，但是他具有氧化性，可以使指示劑變色，所有采用非水溶液滴定法測定生物堿硝酸鹽時，一般不用指示劑而用電位法指示終點。如硝酸士的寧。⑷磷酸鹽的測定：磷酸在冰醋酸介質(zhì)中的酸性極弱，不影響滴定反響的定量完成，可按常法測定。磷酸可待因。提取中和法提取中和法是根據(jù)生物堿鹽類能溶于水而生物堿不溶于水的特性，可以采用有機溶劑提取后測定。堿化、提取、滴定。按以下任何一種方法處理后測定：①將有機溶劑蒸干，于殘渣中加定量過量的酸滴定液使溶解，再用堿滴定液回滴剩余的酸；假設(shè)生物堿易揮發(fā)或分解，應(yīng)在蒸至近干時，先參加酸滴定液“固定〞生物堿，再繼續(xù)加熱除去剩余的有機溶劑，放冷后完成滴定。②將有機溶劑蒸干，于殘渣中加少量中性乙醇使溶解，任何用酸滴定液直接滴定。③不蒸去有機溶劑，而直接于其中加定量過量的酸滴定液，振搖，將生物堿轉(zhuǎn)提入酸液中，分出酸液置另一錐形瓶中，有機溶劑層再用水分次振搖提取，合并水提取液和酸液，最后用堿滴定液回滴定。測定條件的選擇能使生物堿游離的堿化試劑有氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和氧化鎂等。但強堿不適用于以下生物堿類藥物的游離：①含酯構(gòu)造的藥物，如阿托品和利血平等，與強堿接觸，易引起分解。②含酚構(gòu)造的藥物，如嗎啡，可與強堿形成酚鹽而溶于水，難以被有機溶劑提取。③含脂肪性共存物的藥物，當有脂肪性物質(zhì)與生物堿共存時，堿化后易發(fā)生乳化，使提取不完全。因此氨水為最常用的堿化試劑。提取溶劑應(yīng)具備以下條件：①與水不相混溶，沸點低，對生物堿的溶解度大，而對其它物質(zhì)的溶解度應(yīng)盡可能最小。②與生物堿或堿化試劑不起任何反響。常用者為乙醚和氯仿，其中氯仿應(yīng)用更為廣泛。提取溶劑的用量通常應(yīng)提取4次，第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半，以后幾次所用溶劑的體積應(yīng)各為第一次的一半。如果水液體積很小時，第一次提取溶劑的用量那么應(yīng)與水液相等。提取終點確實定取最后一次的提取液約0.5ml，置小試管中，加鹽酸或硫酸〔0.1mol/L〕1ml，放水浴上將有機溶劑蒸去，放冷，滴加生物堿沉淀劑〔如碘化鉍鉀試液等〕1滴，無沉淀產(chǎn)生，即為提取已完全。指示劑的選擇磷酸可待因片劑分析：酸性染料比色法原理：在適當?shù)膒H介質(zhì)中，生物堿類藥物〔B〕可與氫離子結(jié)合成鹽〔BH+〕，一些酸性染料〔如磺酸酞類的指示劑：溴麝香草酚藍、溴甲酚綠等〕在此介質(zhì)中能解離為陰離子〔In-〕，同時，陽離子和陰離子又能定量地結(jié)合成有色的離子對化合物，即離子對。離子對被適宜的有機溶劑提取后，形成有色溶液，可供比色測定。影響定量分析的因素1.水相的最適pH值2.酸性染料的影響提取完全是提取常數(shù)和酸性染料陰離子的濃度密切相關(guān)的，而提取常數(shù)的大小由是與B-的種類和有機溶劑的選擇密切相關(guān)的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚藍〔BTB〕和溴甲酚綠等。3.有機溶劑的影響離子對提取常數(shù)的大小還與有機溶劑的性質(zhì)有關(guān)。通常有機溶劑與離子對形成氫鍵的能力強，那么提取效率高，如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的選擇性也較好，為最常用的有機溶劑。4.水分的影響有有機溶劑提取有色的離子對時，應(yīng)嚴防水分的混入。5.共存物的影響：一般賦形劑，重型、酸性乙基弱堿性的物質(zhì)均不干擾測定，強酸可改變?nèi)玖先芤夯蚓彌_液的pH，因而對測定有干擾。以上五種影響因素中，水相的最適pH和有機溶劑對離子對的提取完全是酸性染料比色法的試驗關(guān)鍵。應(yīng)用與實例硫酸阿托品片劑紫外分光光度法利血平含量測定，注意避光操作。糖類和苷類藥物單糖和雙糖分子中有不對稱碳原子，均具有一定的比旋度。鑒別試驗1.灼燒試驗：糖類用直火加熱，先熔融膨脹，后燃燒并發(fā)生焦糖臭，遺留多量的炭。蔗糖的鑒別可應(yīng)用本試驗。2.Fehling反響單糖或含有半縮醛基的雙糖分子構(gòu)造中，均有醛基或酮基，都具有復(fù)原性。Fehling反響是在堿性酒石酸銅試液〔Fehling試液〕中，糖將銅離子復(fù)原，生成紅色的氧化亞銅沉淀。葡萄糖的鑒別可用此反響〔無水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液和莪術(shù)油葡萄糖均用Fehling反響〕蔗糖的鑒別：加硫酸煮沸，用氫氧化鈉中和，再加堿性酒石酸銅試液，加熱，生成氧化亞銅的紅色沉淀。葡萄糖和乳糖的雜質(zhì)檢查葡萄糖的一般檢查工程：酸度、氯化物和硫酸鹽；溶液的澄清度與顏色；乙醇溶液的澄清度；亞硫酸鹽與可溶性淀粉。葡萄糖注射液中5-羥基糠醛的測定：紫外分光光度法。乳糖的雜質(zhì)檢查：利用蛋白質(zhì)類雜質(zhì)遇硝酸汞試液產(chǎn)生的白色絮狀沉淀，進展特殊雜質(zhì)“蛋白質(zhì)〞的檢查。原料藥的含量測定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不規(guī)定含量測定，規(guī)定比旋度的范圍。制劑：葡萄糖注射液的含量測定：旋光度法。測定中參加氨試液的作用：由于藥用葡萄糖是D-葡萄糖，而D-葡萄糖有α和β兩種互變異構(gòu)體，因而藥用葡萄糖是他們的混合物，比旋度相差甚遠，而在水溶液中逐漸平衡，稱作變旋。加熱、加酸或加弱堿可加速平衡。計算因素1.0426的由來：換算為含稅葡萄糖濃度〔c’〕時，那么應(yīng)為：葡萄糖氯化鈉注射液含量測定：硝酸銀滴定法，每1ml硝酸銀滴定液〔0.1mol/L〕相當于5.844mg的NaCl。加糊精溶液以形成保護，使氯化銀沉淀呈膠體狀態(tài)，那么具有較大的外表，有利于對指示劑的吸附，有利于滴定終點的觀察。加硼砂溶液是為了增加pH值，因為本品pH值過低，而pH值低于3.5時，那么五沉淀出現(xiàn)。參加2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值為7,可促使熒光黃電離，以增大熒光黃陰離子的有效濃度，使重點變化敏銳。苷類藥物苷類為糖的衍生物〔如氨基糖、糖醛酸等〕與另一非糖有機化合物通過糖的端基碳原子連接而成的化合物。鑒別試驗：1.Keller-Kiliani反響α-去氧甲基五碳糖的反響α-去氧糖類，如洋地黃毒糖和磁麻糖，是由糖類分子中與羰基相鄰近的“CHOH〞基失去氧，轉(zhuǎn)變?yōu)椤癈H2〞后的構(gòu)造。具有較大的活潑性，由α-去氧糖與苷元結(jié)合的生成物〔即苷類〕容易水解。將甾體強心苷溶于含有微量FeCl3〔1滴9%FeCl3〕的冰醋酸1～2ml中，沿管壁緩緩參加濃硫酸1～2ml，使成兩液層。兩液層交界面處顯棕色〔甲地高辛顯紫色〕；醋酸層顯藍色或藍綠色，放置1h后顯靛藍色。2.Kedde反響苷元的不飽和內(nèi)酯側(cè)鏈反響。甾體強心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不飽和內(nèi)酯，即丁烯內(nèi)酯，在堿性水溶液中易與芳香硝基化合物形成有色的絡(luò)合陰離子。Kedde反響用于去乙酰毛花苷的鑒別。加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液各10滴，搖勻后，溶液即顯紅紫色。3.色譜法①紙色譜法：用于地高辛的鑒別②薄層色譜法：用于去乙酰毛花苷及其注射液的鑒別，采用硅藻土G薄層板.③高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的鑒別特殊雜質(zhì)的檢查藥物特殊雜質(zhì)允許限量檢查方法洋地黃毒苷洋地黃皂苷本品10mg溶于2ml乙醇后，加膽甾醇的醇溶液，10min內(nèi)，不得發(fā)生沉淀地高辛洋地黃毒苷6%紙色譜法甲地高辛有關(guān)物質(zhì)5%高效液相色譜法去乙酰毛花苷有關(guān)物質(zhì)10%薄層色譜法含量測定1.比色法：甾體強心苷元C17上的丁烯內(nèi)酯局部是非?；顫姷?，很容易和芳香硝基化合物〔如堿性三硝基苯酚試液〕形成絡(luò)合陰離子。所得絡(luò)合物在可見光去具有特征的最大吸收峰〔λmax為485～495nm〕。本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量測定2.熒光法：利用L-抗壞血酸與過氧化氫等實際可使地高辛或洋地黃毒苷產(chǎn)生熒光的原理，提高了定量分析的靈敏度，從而可用于每片含主藥量分別僅為0.25mg和0.1mg的片劑的含量測定。地高辛片含量，含量均勻度〔限度為20%〕，溶出度〔限度為65%，轉(zhuǎn)籃，100r/min,60min〕甲地高辛溶出度測定與地高辛一樣，限度規(guī)定一樣。3.色譜法：①柱色譜法：用于洋地黃毒苷原料藥測定的純化處理②高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的含量測定，內(nèi)標：洋地黃毒苷。。復(fù)習(xí)總結(jié)：維生素A醋酸酯等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3,使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。維生素A醇。③雜質(zhì)吸收：對維生素A的測定有影響的雜質(zhì)主要有：醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物〔環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸〕；維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇；維生素A的異構(gòu)體；合成時產(chǎn)生的中間體。④測定方法：第一法〔使用于維生素A醋酸酯〕取維生素A醋酸酯，精細稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含9～15單位的溶液醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。然后在300、316、328、340、360nm五個波長處分別測定吸收值，確定最大吸收波長〔應(yīng)為328nm〕。計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值。計算：a.求吸收系數(shù)，吸收系數(shù)＝A/cl。b.求效價〔U/g〕，U/g＝吸收系數(shù)×1900資料來源:醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)1900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中測定的換算因數(shù)。3.求維生素A醋酸酯膠丸為標示量的百分含量。標示量%＝〔A×D×1900×W〕/〔W×100×l×標示量〕1U=0.344μg維生素A醋酸酯資料來源:醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)1U=0.300μg維生素A醇4.A值的選擇法第二法〔適用于維生素A醇〕說明：⑴維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程法〔即代數(shù)法〕推導(dǎo)出來的；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法〔幾何法或成6/7定位法〕推倒出來。⑵在應(yīng)用三點校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側(cè)上升或下降陡部的波長處進展測定。維生素E維生素E〔消旋-α-生育酚醋酸酯〕有天然片和合成品之分，天然品為右旋體〔d-α〕；合成品為消旋體〔dl-α〕。構(gòu)造：維生素E為苯丙二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上又一個乙?；姆恿u基，故又稱生育酚。他主要有α、β、γ、δ四種異構(gòu)體，其中以α異構(gòu)體的生理作用最強。性質(zhì)：溶解性：微黃色或黃色透明的粘稠液體，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。具有紫外吸收。在無氧或其它氧化劑存在時，在酸性或堿性溶液中，加熱可水解生成游離生育酚；在有氧或其它氧化劑存在時，那么進一步氧化生成醌型化合物。在堿性條件下加熱，這種氧化作用更易發(fā)生。鑒別試驗：⑴硝酸反響：取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱約15min，溶液應(yīng)顯橙紅色。⑵水解后氧化反響：取本品約10mg，加醇制氫氧化鉀試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖、靜置使分層，取乙醚液2ml，加2,2’-聯(lián)吡啶的乙醇溶液〔0.5→100〕數(shù)滴和三氯化鐵的乙醇溶液〔0.2→100〕數(shù)滴，應(yīng)顯血紅色。⑶紫外光譜法。⑷薄層色譜法。特殊雜質(zhì)：游離維生素E。利用游離維生素E的復(fù)原性，用硫酸鈰滴定液〔0.01mol/L〕滴定，以二苯胺為指示劑，限量為2.15%。含量測定：⑴氣相色譜法：載氣：氮氣；固定相：硅酮〔OV-17〕，涂布于經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子小球上；檢測器：氫火焰離子化檢測器；理論板數(shù)：按維生素E峰計算應(yīng)不低于500；維生素E與內(nèi)標物質(zhì)的別離度應(yīng)大于2。內(nèi)標：正三十二烷。⑵高效液相色譜法：C18柱；流動相為甲醇：水〔49：1〕；紫外檢測器；波長292nm。維生素B1構(gòu)造：維生素B1〔鹽酸硫胺〕是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過央甲基連接而成的季銨化合物，噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個堿性基團，可與酸成鹽。性質(zhì)：溶解性：本品在水中易溶，水溶液顯酸性反響。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。具有紫外吸收。在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化為具有熒光的硫色素，后者溶液正丁醇中呈藍色熒光。分子中含有兩個雜環(huán)，故可與某些生物堿沉淀試劑反響生成組成恒定的沉淀。鑒別試驗⑴硫色素反響方法：取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光。加酸使成酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。原理：維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇〔或異丁醇等〕中，顯藍色熒光。⑵沉淀反響維生素B1與碘化汞生成淡黃色沉淀維生素B1與碘生成紅色沉淀維生素B1與硅鎢酸生成白色沉淀含量測定方法有：硅鎢酸重量法、硫色素?zé)晒夥?、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。中國藥典收載紫外分光光度法維生素C構(gòu)造：維生素C分子構(gòu)造中具有二烯醇構(gòu)造和內(nèi)酯環(huán)，且有二個手性碳原子〔C4、C5〕，因此不僅使維生素C性質(zhì)極為活潑，且具旋光性。性質(zhì)：溶解性：維生素C在水中易溶，水溶液呈酸性，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。構(gòu)造遇糖類相似，也具糖的性質(zhì)。分子中二烯醇基具極強的復(fù)原性，易被氧化為二酮基而成為去氫抗維生素C,加氫又可復(fù)原為維生素C.在堿性溶液或強酸性溶液中能進一步水解為二酮古羅糖酸。C3-OH由于受共軛效應(yīng)的影響，酸性較強；C2-OH的酸性極弱，故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。分子中有兩個手性碳原子，故有四個光學(xué)異構(gòu)體，其中L〔+〕-維生素C活性最強。維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽，不致發(fā)生水解，因雙鍵使內(nèi)酯環(huán)變得較穩(wěn)定；但在強堿中，內(nèi)酯環(huán)可水解，生成酮酸鹽。維生素C有共軛雙鍵，在稀礦酸溶液中，在245nm波長處有最大吸收；假設(shè)在中性或堿性條件下，那么紅移至265nm處。鑒別試驗：⑴與硝酸反響方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加硝酸銀試液0.5ml，即生成銀的黑色沉淀。原理：維生素C分子中有二烯醇基，具強復(fù)原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時可產(chǎn)生黑色銀沉淀。⑵與2,6-二氯靛酚反響方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加2,6-二氯靛酚試液1～2滴，試液的顏色即消失。原理：2.6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色，堿性介質(zhì)中微藍色。與抗壞血酸作用后生成復(fù)原型的物色的酚亞胺。⑶與其它氧化劑反響維生素C還可被亞甲藍、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C,同時，維生素C可使這些試劑褪色，產(chǎn)生沉淀或顯色。⑷利用維生素C具糖類性質(zhì)的反響維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧，生成戊糖，再失水，轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡?，參加吡咯，加熱?0℃產(chǎn)生藍色。⑸紫外分光光度法維生素C在0.01mol/L鹽酸液中，在243nm波長處有唯一的最大吸收，利用此特征進展鑒別。含量測定：碘量法：溶劑：水和稀醋酸，指示劑：淀粉。操作中參加稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進展。在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢，但樣品溶于稀酸后仍需立即進展滴定。加新沸過的冷水液是為了減少水中溶解氧對測定的影響。如片劑，溶解后應(yīng)濾過，取續(xù)濾液測定；注射液測定時要加2ml丙酮，以消除注射液內(nèi)含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對測定的影響?？股仡愃幬铴?內(nèi)酰胺類抗生素本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，他們的分子構(gòu)造中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。根本構(gòu)造：分子中都有一個游離羧基和酰胺側(cè)鏈。青霉素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)頭孢菌素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)性質(zhì)：溶解度：青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當強的酸性，能與無機堿或某些有機堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑。旋光性：青霉素族分子中含有三個手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個手性碳原子，都具有旋光性。紫外吸收特性青霉素分子中的母核局部無紫外吸收，但出側(cè)鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng)，那么有紫外吸收特性。頭孢菌素由于母核局部具有O-C=N-C=C構(gòu)造，故有紫外吸收。β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族構(gòu)造最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子〔銅、鉛、汞和銀〕等作用時，易發(fā)生水解和分子重排，導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。鑒別試驗：⑴鉀、鈉鹽的火焰反響⑵呈色反響①羥肟酸鐵反響：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。②硫酸—硝酸呈色反響：頭孢菌素能與硫酸—硝酸反響后成色。頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。③茚三酮反響：某些具有α-氨基的本類藥物〔如氨芐西林〕遇茚三酮即顯藍紫色。④與斐林試劑反響：本類藥物具有類似肽鍵構(gòu)造，可產(chǎn)生雙縮脲反響。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽復(fù)原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。⑤變色酸—硫酸呈色反響：阿莫西林加變色酸-硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。⑥與重氮苯磺酸呈色反響：頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反響，顯橙黃色。⑦與銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。⑶沉淀反響①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。②有機胺鹽的特殊反響重氮化-偶合反響：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反響，生成偶氮染料紅色沉淀。與三硝基苯酚的反響：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。⑷光譜法①紫外分光光度法最大吸收波長鑒定法水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測定⑴碘量法〔芐星青霉素〕青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。反響分兩步進展：第一步反響是按化學(xué)計算量進展；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反響受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關(guān)系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，那么可抵消上述可變因素的影響。碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現(xiàn)藍色，說明真正的終點尚未到達。⑵汞量法〔青霉素鈉、青霉素鉀〕青霉素分子不與汞鹽反響，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反響，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。每1ml的硝酸汞滴定液〔0.02mol/L〕相當于7.128mg的總青霉素?？偳嗝顾氐陌俜趾颗c降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比擬，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。⑶酸堿滴定法〔苯唑西林鈉〕⑷紫外-可見分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素雜環(huán)藥物吡啶類藥物異煙肼的鑒別試驗：復(fù)原反響。異煙肼的酰肼基有復(fù)原性，可復(fù)原硝酸銀中的Ag+成單質(zhì)銀，肼基那么被氧化生成氮氣。加氨制硝酸銀試液1ml，即產(chǎn)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。縮合反響。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑〔如芳醛〕發(fā)生縮合反響。異煙肼與香草醛反響，生成異煙腙，測定熔點供鑒別。沉淀反響。異煙肼分子中的吡啶環(huán)具有堿性，可以和重金屬鹽類〔如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀〕乙基苦味酸形成沉淀。異煙肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸銅-枸櫞酸試液反響，先產(chǎn)生綠色沉淀，加熱，沉淀變?yōu)榧t棕色。尼克剎米的鑒別：戊烯二醛反響。屬吡啶環(huán)的開環(huán)反響。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反響，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫氏堿。異煙肼也可發(fā)生戊烯二醛反響，但需先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用。與苯胺縮合形成黃色至棕黃色產(chǎn)物，與聯(lián)苯胺紫外分光光度法形成淡紅至紅色產(chǎn)物。水解反響。尼克剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺臭味逸出，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變成藍色。沉淀反響。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)也可以和重金屬離子反響。尼克剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀。異煙肼中游離肼的檢查：薄層色譜法。肼的檢測限為0.1μg，控制限量為0.02%。異煙肼的含量測定：異煙肼分子中的酰肼基具有復(fù)原性，可采用氧化復(fù)原滴定法測定其含量。溴酸鉀法。甲基橙作指示劑，溴酸鉀滴定止粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液〔0.1667mol/L〕相當于3.429mg的C6H7N3O。異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測定含量。還可使用溴量法、剩余碘量法測定含量，也可用非水溶液滴定法。尼克剎米含量測定：非水溶液滴定法。溶劑：冰醋酸，指示劑：結(jié)晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液藍綠色。每1ml高氯酸滴定液〔0.1mol/L〕相當于17.82mg的C10H14N2O。紫外分光光度法。測定尼克剎米注射劑含量。注射劑的溶劑對非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。甾體激素類藥物根本構(gòu)造：均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。分類：1.腎上腺皮質(zhì)激素：皮質(zhì)酮衍生物，如可的松、潑尼松、地塞米松等。本類藥物多為C21-羥基所形成的酯類。構(gòu)造特點是具有21個C原子：A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多數(shù)有α-羥基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羥基或酮基；其它：有些皮質(zhì)激素具有Δ1,6α、9α鹵素，16α羥基，6α、12α、16α、16β甲基等。2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等；蛋白同化激素有苯丙酸諾龍。構(gòu)造特點：雄性激素具有19個C原子；蛋白同化激素具有18個C原子〔C10上無角甲基〕；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：無側(cè)鏈，多數(shù)是一個β-羥基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。3.孕激素：也稱為黃體酮激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。中國藥典收載有：黃體酮、醋酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑；醋酸氯地孕酮原料等。構(gòu)造特點：具有21個C原子；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羥基，與醋酸、已酸等形成酯〔如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等〕；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。4.雌激素：又稱卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制劑等。構(gòu)造特點：具有18個C原子；A環(huán)：為苯環(huán)，C3上具有酚羥基且有些形成了酯或醚；C10：無角甲基；C17：具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基?？诜茉兴帲喝仓Z酮、炔諾孕酮、炔孕酮。多數(shù)在A環(huán)上具有Δ4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致；有的在C17上具有β-羥基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上無角甲基，與雌激素一樣。鑒別試驗：呈色反響1.與強酸的呈色反響：許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中與與硫酸的呈色反響應(yīng)用較廣。藥品名稱顏色熒光加水稀釋后的變化醋酸可的松黃或微帶橙無顏色消失溶液澄清氫化可的松棕黃至紅綠色黃至橙黃微帶綠色熒光，少量絮狀沉淀潑尼松橙無黃至藍綠潑尼松龍深紅無紅色消失，灰色絮狀沉淀炔雌醇深紅黃綠地塞米松磷酸鈉黃或紅棕?zé)o某些甾體激素藥物與硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睪酮：取本品數(shù)毫克，加硫酸-乙醇〔2：1〕1ml使溶解，即顯黃色并帶有黃綠色熒光。2.官能團的呈色反響：①C17-α-醇酮基的呈色反響：皮質(zhì)激素類藥物分子構(gòu)造中C17位上的α-醇酮基具有復(fù)原性，能與氧化劑四氮唑鹽反響而呈色。如醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反響生成紅色。②酮基的呈色反響：甾體激素分子構(gòu)造中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基,均能與2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。例如，醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱即顯黃色。③甲酮基的呈色反響：甾體激素分子構(gòu)造中含有甲酮基乙基活潑亞甲基時，能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反響呈色。其中亞硝基鐵氰化鈉反響可認為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別方法，在一定的條件下，黃體酮顯藍紫色，其他常用甾體激素均不顯藍紫色，而呈現(xiàn)淡橙色或不顯色。④有機氟的呈色反響：一些含氟的甾體激素藥物〔如醋酸氟輕松、醋酸地塞米松等〕，經(jīng)氧瓶燃燒法后生成無機氟化物，在12%醋酸鈉的稀醋酸中與茜素氟藍及硝基亞鈰起反響，即顯藍紫色。⑤酚羥基的呈色反響：C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反響生成紅色偶氮染料。如JP(13)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進展鑒別。沉淀反響1.與斐林試劑的沉淀反響皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具強復(fù)原作用，與斐林試劑反響生成橙紅色氧化亞銅沉淀。2.與氨制硝酸銀的沉淀反響皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具強復(fù)原性，與氨制硝酸銀反響，生成黑色金屬銀沉淀。3.與硝酸銀的沉淀反響含炔基的甾體激素，如炔雌醇、炔諾酮，遇硝酸銀獎試液，即生成白色的炔雌醇銀鹽沉淀及白色炔諾酮銀沉淀。4.與硝酸—硝酸銀的沉淀反響甾體激素〔如丙酸氯貝他索、丙酸貝氯米松〕中有機結(jié)合的氯，經(jīng)加熱或進展有機破壞生成無機氯化物，再在硝酸酸性條件下與硝酸銀作用，生成氯化銀的白色沉淀。制備衍生物測定其熔點利用甾醇、甾酮類藥物與一些試劑反響生成酯、肟、縮氨脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)的母體，然后測定其熔點進展鑒別。1.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。2.酮肟的生成：如黃體酮與鹽酸羥