BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號.工程信息工程名稱檢測目的檢測方法工程原理檢測原理反 第一步應 其次步過第三步程第四步第五步

胃蛋白酶原II〔PGII〕檢測標準操作程序PepsinogenII，英文英文縮寫：PGII中文 胃蛋白酶原IIII〔PGII〕檢測試劑盒承受酶聯(lián)免疫法〔ELISA〕，定量PGII酶聯(lián)免疫法〔Elisa〕Biohit的PGII〔ELISA〕檢測試劑盒承受雙抗體〔吸附于微孔板上的PGII特異性捕獲抗體和辣根過氧化物酶〔HRP〕標記的抗體〕夾心法的酶學免疫分析技術(shù)PGII特異性的單克隆抗體，與樣本中的PGII分子結(jié)合。洗板，除去殘留樣本。HRPPGII〔抗原抗體結(jié)合物〕結(jié)合。TMB底物溶液，被酶氧化后顯藍色。參加終止液終止酶反響后顯黃色。其顏色的深度與PGII濃度呈正相關(guān)。樣本采集與處理病人預備事項預備事項禁食/特種飲食病人的預備事項樣本采集特別要求樣本類型及處理方法推舉類型

具體內(nèi)容測試前飲食清淡10小時應保持空腹。避開溶血。待測血液必需完全凝固后再分別血清，杜絕混入紅細胞，纖維蛋白等，以防止堵塞儀器管道。血清類型樣本量收集容器運輸容器運輸要求

可承受類型最正確量最少量

血漿〔EDTA〕1.0ml0.5ml含促凝膠試管、一般試管〔不含其它物質(zhì)〕或相應抗凝管帶塑膠蓋試管在室溫條件下運送，可承受冷凍及冷藏取樣。穩(wěn)定性及貯存要求時間要求

室溫〔18-28?C〕冷藏溫度〔2-8?C〕冷凍溫度〔-20?C〕無

8小時7天個月LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號樣本拒收及實行措施影響／干擾因素其它條件

拒收嚴峻溶血及被微生物污染的標本纖維蛋白、嚴峻溶血、脂濁及其它顆粒性物質(zhì)應避開反復凍融標本試劑盒組成、試劑的預備及所供給物質(zhì)的穩(wěn)定性全部試劑用量足夠于96次測試。不同批號試劑盒中的試劑不行混合使用。微孔板組成：12×8條，共96PGIIIgG1。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定，板條使用后應廢棄。濃縮洗滌液〔10倍〕組成：120ml〔10倍稀釋后使用〕20和0.1%ProCline300為防腐劑。預備：用蒸餾水將洗滌液稀釋10倍〔如100ml洗滌液＋900ml蒸餾水〕后混勻使用。穩(wěn)定性：稀釋后在〔2～8℃〕2周。稀釋液組成：100ml磷酸鹽緩沖液，含有酪蛋白、吐溫20、0.1%ProCline300為防腐劑和紅色染劑。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定?？瞻滓航M成：1.5ml人類血清基質(zhì)的磷酸鹽緩沖液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。標準液組成：3瓶1.5ml人類血清基質(zhì)的標準液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。每批試劑盒中PGII標準液的濃度約為6.3μg/l、12.5μg/l、50μg/l，其具體濃度值見瓶簽。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。比照液組成：1.5ml人類血清基質(zhì)的PGII比照液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。PGII期望值見瓶簽。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。酶標液組成：15ml辣根過氧化物〔HRP〕標記單克隆抗人類PGII抗體，保存在穩(wěn)定劑及0.1%ProCline300預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。底物液組成：15ml四甲基聯(lián)苯胺〔TMB〕溶液，含有防腐劑。預備：直接使用。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定，避開陽光直射。終止液組成：15ml硫酸溶液〔0.1mol/l〕。預備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。封孔膜3張孵育用塑料封孔膜。使用說明書需要的儀器設(shè)備及其他試驗用品·蒸餾水或去離子水·20～1000μl移液器及一次性吸頭·1～10ml移液器·可吸取100μl的8通道移液器·1000ml量筒·稀釋樣本用渦流混勻器·稀釋樣本用試管·洗板機·紙巾或吸水紙·計時器·恒溫箱，37℃·酶標儀，測定波長450nm·采集血漿或血清的塑料管·盛冰用容器試驗操作流程試驗前預備將全部試劑和微孔板恢復至室溫〔20-25℃〕，平衡30min10倍稀釋〔100ml濃縮洗滌液+900ml蒸餾水〕，冰凍樣本快速溶解于室溫水槽中搖勻讓其溶解，試驗前應認真閱讀說明書，推舉全部空白，標準液、比照液和樣品均做復孔測試。每次試驗均應設(shè)置空白液、標準液及比照液孔。測試前所有的試劑盒樣本應充分混勻試驗步驟全自動酶標儀具體操作參見例如：BIOBASE2023全自動酶免工作站標準操作文件。手工操作流程如下：第一步樣本稀釋5〔孔外稀釋：100ul+400ul20ul+80ul液〕，充分混勻。其次步標本充分混勻試劑及已稀釋好的樣本，向反響孔中分別參加100ul空白液、標準液、比照液和樣本，封孔膜封板3760加樣例如圖示見說明書LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號第三步洗滌350ul〔400ul45〕10置微孔板于干凈的吸水紙上叩擊數(shù)次。洗板機洗板流程：預洗——選擇對應的洗板程序〔3×350μl〕——運行——完畢后吸水紙上叩擊1-2次即可洗板機留意事項：a.請依據(jù)試驗室規(guī)程定期對洗板機進展校準;b.洗板機清洗程序設(shè)置請參閱設(shè)備商供給的洗板機標準操作sop文件；c.微孔板置于洗板機板槽時確保放置穩(wěn)當；建議第四步、第六步、第七步操作使用8通道移液器。第四步酶標液100ul已混勻的酶標液，用封孔膜封上微孔板，在室溫3730分鐘。第五步洗滌參照第三步。第六步底物液100ul〔20-25℃〕30封孔膜。第七步終止反響100ul第八步酶標儀測定30450nmsop酶標儀測定流程：啟動酶標儀——翻開相應的軟件——放置微孔板——選擇450nm波長讀數(shù)，選擇相應曲線——導出數(shù)據(jù)；留意事項：a.加完終止液不要馬上讀數(shù)，一分鐘前方可；b.微孔板放置正確，否則讀數(shù)有誤；c.測定完畢后，微孔板臨時備份，以免數(shù)據(jù)有誤，需重測定。注：酶標儀測定數(shù)值后推舉使用e-LisaXL〔2〕對結(jié)果進展計算。結(jié)果計算A)B)自動計算，將吸光度轉(zhuǎn)換為PGII濃度。由於標準液是直接使用，毋須使用稀釋因子培增病人樣本的結(jié)果。手工計算計算空白液、標準液、比照液和樣本各復孔測試的平均吸光度，各測試均值減去空白液的平均吸光度值。0點為起點，標準液的平均吸光度值為YX軸,繪出最正確擬合曲線作為標準曲線。依據(jù)樣本及比照液的平均吸光度值，在曲線上查出對應的PGII濃度值。建議使用模板，請查閱模板附件1。自動計算有多種計算機程序用于自動計算。在標準液最高濃度范圍內(nèi)，運用簡潔二項式計算未知濃度；當樣本的吸光度值超過最高濃度標準液的吸光度值時，建議使用更為簡單的外推計算法。建議使用模板，請查閱附件2。標2。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號結(jié)果報告及復查標準結(jié)果審核結(jié)果推斷 當PGI與PGII的比值<3.0時說明患者的胃體有嚴峻萎縮，且胃癌發(fā)生率將增高。所定的臨界值僅供參考。同一樣本的結(jié)果與承受不同廠家的試劑盒檢測所得的結(jié)果可能有差異,由于不同廠家對PGII產(chǎn)品檢測承受的標準化、試劑規(guī)定和分析方法有差異,所以不同廠家的檢測結(jié)果不具有可比性。使用單位生物參考區(qū)間

ug/l3-15臨床背景PGII是由胃竇部的幽門腺和十二指腸近端的Brunner氏腺黏膜的主細胞和頸細胞分泌。正常時，血清或I〔PGI〕II〔PGII〕4：1。PGIPGII的比值隨著胃體萎縮性胃炎的嚴峻程度增加呈直線下降。中、重度萎縮性胃炎時，其比值為<2.5。PGI與PGII的比值較低時，胃癌的發(fā)生率增加5倍。PGII的測試用于關(guān)心胃體萎縮性胃炎的診斷，以及評估癌變的發(fā)生率。PGII測試需和PGIPGIPGII的比值。診斷程序的限制同其他診斷手段，Biohit的PGII檢測試劑盒的測試結(jié)果，必需綜合病人的臨床病癥和其他信息進展分析。留意事項試驗前請檢查全部儀器〔移液槍、洗板機、酶標儀〕，確保儀器的正常使用，并定期對儀器進展校準；試驗時必需戴手套；4℃保存，枯燥劑置于板底；樣品處理及保存請遵從試劑盒說明書；試驗前全部試劑盒成分肯定要室溫下平衡30分鐘左右；試劑盒試劑室溫平衡后要混勻充分，建議使用渦旋振蕩器；微孔板拆封使用前對光觀看孔底是否干凈，正常狀況下孔底透亮無污漬，否則棄用；LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱編寫人 批準人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測日期 文件號出；除加樣外，其他步驟請盡量使用8通道移液器；酶標液孵育完畢后微孔板肯定要清洗干凈，否則對試驗結(jié)果影響較大；底物液肯定要避光處理；底物液孵育完加終止液時避開液體濺出；終止液加完30分鐘內(nèi)酶標儀測定結(jié)果，測定前確保混勻，一般酶標儀會有振蕩功能；試驗完畢測定后，微孔板臨時保存，勿丟棄。試驗前請做好加樣圖譜；CV%大小〔CV%≤10%〕確保試驗的準確性；建議有自己的中控樣品*，從而能推斷每次試驗的準確性；450nm；空白比照的吸光度≤0.3，否則試驗不行靠；試驗完畢后請遵循試驗室規(guī)定對廢棄物進展處理。*中