金魚?；钸\輸技術(shù)研究進展

金魚，又名橢圓形發(fā)育魚(。近年來，研究學(xué)者開展了金鯧魚的冷凍與保鮮研究，但對其?；钛芯可跎伲缃瘀K魚采用pH為5.6的二氧化碳麻醉液麻醉后離水?；?，其存活時間僅為144min。金鯧魚幼魚在丁香酚濃度為7mg/L的條件下麻醉，低溫密閉充氧保活運輸8h內(nèi)，為降低魚體運輸應(yīng)激與化學(xué)麻醉劑使用，采用梯度降溫后低溫休眠?；?，延長其存活時間。金鯧魚主要由于是一種暖水性海水魚類，最適水溫在20～34℃，捕撈后應(yīng)激反應(yīng)強烈，在低溫（<13℃）下易死亡，使?；钸\輸困難魚類?；钸\輸可分為有水保活運輸和無水保活運輸，在保活運輸中會使用暫養(yǎng)、低溫休眠、人工麻醉、運輸裝備、無水包裝、環(huán)境控制、運輸監(jiān)控、喚醒等多種關(guān)鍵技術(shù)1材料和方法1.1蛋白質(zhì)濃度、氨氮含量檢測試劑盒金鯧魚（谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartateaminotransferase，AST）、葡萄糖（Glucose，GLU）、尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、乳酸脫氫酶（Lactatedehydrogenase，LDH）、總膽固醇（Totalcholesterol，T-CHO）、糖原（Glycogen，GLY）、乳酸（Lacticacid，LD）等檢測試劑盒，南京建成生物科技有限公司；蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒，上海生工生物工程有限公司；皮質(zhì)醇（Cortisol）檢測試劑盒，上海酶聯(lián)生物科技有限公司；水質(zhì)總氨氮含量測定儀，解析科技（深圳）有限公司；生理鹽水等。1.2儀器、試藥與儀器SG68便攜式pH/離子/溶氧多參數(shù)測試儀，梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司；MD5-100-G低溫恒溫循環(huán)槽，蘇州吉米諾儀器有限公司；PR-100SA數(shù)顯折射計（鹽度計），廣州市愛宕科學(xué)儀器有限公司；BJPX-150微生物恒溫培養(yǎng)箱，山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；YC109便攜式氨氮測定儀，解析科技（深圳）有限公司；Varioskan全自動酶標儀，美國ThermoFisher公司；UV-2550紫外可見分光光度計，日本島津公司；JIDI-20R高速冷凍離心機，廣州吉迪儀器有限公司。1.3實驗方法1.3.1溫度對金魚的影響將經(jīng)過暫養(yǎng)6h的金鯧魚取出6條，分別放進盛有海水透明玻璃缸中，每個玻璃缸中1條，用低溫恒溫循環(huán)槽作為降溫的冷源。當水溫高于20℃時，以3℃/h的速率逐漸降溫，當水溫在16-20℃時，以2℃/h的速率逐漸降溫。水溫低于16℃時，以1℃/h的速率逐漸降溫，觀察和記錄金鯧魚在不同溫度下的活動現(xiàn)象和呼吸頻率，魚鰓一張一合記呼吸頻率1次，以金鯧魚從呼吸規(guī)律到不規(guī)律甚至其呼吸極其微弱（但魚體尚未死亡）時的溫度作為金鯧魚的臨界溫度。通過刺激魚體觀察是否有反應(yīng)或者將魚體放入其正常生活水中一段時間然后觀察魚鰓是否振動呼吸來判斷魚體的死活。1.3.2水溫下降的速率將暫養(yǎng)池中暫養(yǎng)6h的金鯧魚轉(zhuǎn)移到同等水溫的新鮮海水進行梯度降溫，用低溫恒溫循環(huán)槽作為降溫冷源。當水溫高于20℃時，以3℃/h的速率逐漸降溫，當水溫在16-20℃時，以2℃/h的速率逐漸降溫，水溫低于16℃時，以1℃/h的速率逐漸降溫。降溫過程中持續(xù)供氧和水循環(huán)，保證氧氣充足與水質(zhì)適宜，觀察金鯧魚在逐漸降溫過程中的活動現(xiàn)象，以呼吸速率較弱、活動能力弱、魚體平躺作為適合?；畹淖罴褷顟B(tài)。1.3.3?；顣r間測定根據(jù)金鯧魚的臨界溫度，在臨界溫度附近選取4個溫度，在魚水比為1:10的情況下記錄相應(yīng)溫度下金鯧魚的?；顣r間。每個溫度下平行測試3次，每組實驗8條魚，計算24條魚的平均存活時間作為相應(yīng)溫度下金鯧魚的?；顣r間和每個溫度條件下的存活率。1.3.4聚乙烯離心管密封金鯧魚?；钸^程中每隔8h取海水，將海水置于50mL的聚乙烯離心管中，并加蓋密封。用F2手持pH計測海水pH值，用YC109便攜式氨氮測定儀測海水中總氨氮含量，用SG68便攜式離子/溶氧多參數(shù)測試儀測海水中的溶解氧。1.3.5血清中ast、ldh、皮質(zhì)醇的檢測以未經(jīng)梯度降溫的活金鯧魚為對照組，實驗組分為保活0h、保活24h、?；?8h、復(fù)蘇組。將保活過程中的金鯧魚迅速從保活箱中撈出，放到150mg/L的MS-222麻醉液中快速麻醉。用10mL的注射器從金鯧魚的尾靜脈抽血，去掉針頭將血液注入10mL的離心管中，全血不加抗凝劑，在4℃放置2h，待血液明顯分層后以5000r/min離心20min，收集魚的血清，置于-80℃的冰箱保存。分別用微板法、比色法、酶聯(lián)免疫法測定AST、LDH、皮質(zhì)醇；分別用葡萄糖氧化酶法、脲酶法、分光光度法測定GLU、BUN、TC。1.3.6糖原和乳酸測定取魚體的背部肌肉，用生理鹽水漂洗后，再用濾紙吸干后冷凍保存，用試劑盒測定糖原和乳酸的含量。肌肉pH值的測定：稱取經(jīng)絞碎和混合均勻的2.00g魚肉，加水均質(zhì)2min，定容至50mL，轉(zhuǎn)入離心管中，5000r/min離心10min，過濾，取上清液測定pH值。1.3.7處理數(shù)據(jù)試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，用JMP10.0軟件進行單因素方差分析和TurkeyHSD多重比較，2結(jié)果與分析2.1金魚的呼吸行為從表1可以看出，當海水溫度在23~26℃時，金鯧魚呼吸和活動狀態(tài)正常；當海水溫度下降到18~20℃時，金鯧魚的呼吸頻率降低，活動以底部游動為主；當海水溫度降至15~16℃時，金鯧魚的呼吸頻率進一步降低，魚體開始出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，游動遲緩，魚體傾斜；當海水溫度下降到15℃時，金鯧魚呼吸微弱，魚體不在游動，出現(xiàn)側(cè)翻和瞳孔渙散；當海水溫度下降到14℃時，金鯧魚呼吸微弱，魚體靜止不動，對外界刺激無反應(yīng)；當海水溫度下降到13℃時，金鯧魚幾乎不呼吸，嘴咧開，偶爾出現(xiàn)鰓動；當海水溫度繼續(xù)下降至12℃時，魚體半僵硬，鰓基本不動。從觀察結(jié)果來看，隨著海水溫度降低，金鯧魚的呼吸頻率逐漸減弱，魚體活動能力逐漸下降。當海水溫度為13℃時，金鯧魚呼吸微弱，魚體保持靜止不動，但仍能保持活的狀態(tài)，此時將魚體轉(zhuǎn)移到正常水溫中，大約5min后魚體可恢復(fù)至正常狀態(tài)。當海水溫度降到12℃，魚體半僵硬，基本不呼吸，此時將魚體轉(zhuǎn)移到正常水溫中，魚體死亡。因此，金鯧魚生態(tài)冰溫區(qū)的臨界溫度在12~13℃，低溫休眠溫度可設(shè)為13~14℃。2.2溫度下進行?；顚⒔瘀K魚進行梯度降溫至休眠狀態(tài)，然后在不同溫度下進行?；睢膱D1可以看出，在15℃和17℃保活，金鯧魚的存活時間分別達48h和45h，兩者之間無顯著差異（范秀萍等2.3?；顣r間對海水總氨氮含量的影響保活使用海水是經(jīng)過充分曝氣的新鮮海水，海水溫度為15℃，新鮮海水的總氨氮含量為零。從圖2可以看出，隨著?；顣r間的延長，海水中的總氨氮含量呈上升趨勢（海水中溶解氧的含量對于魚體的生存至關(guān)重要，尤其海水魚類，若溶解氧不足會導(dǎo)致魚體死亡。當溶解氧低于3～4mg/L時，很多魚類都難以生存2.4影響臟器代謝的因素魚的血清中皮質(zhì)醇含量是反映魚體受應(yīng)激的指標。正常狀態(tài)下，魚的血清中皮質(zhì)醇含量比較穩(wěn)定，當受到環(huán)境變化或者環(huán)境脅迫時，皮質(zhì)醇的含量會迅速上升血糖含量反映魚體糖代謝的同時也反映魚體應(yīng)激。魚體內(nèi)的血糖含量除受胰島素和腎上腺素的雙重控制，其它因素也會影響機體的血糖含量的升降，因此正常情況下，機體的血糖含量是處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)，但在脅迫下也會容易發(fā)生變化尿素含量的變化直接反應(yīng)腎臟的代謝情況，同時尿素也相應(yīng)的維持血液滲透壓，同時也是蛋白質(zhì)代謝的產(chǎn)物，當腎臟發(fā)生障礙時，尿素含量會升高總膽固醇含量是反應(yīng)機體脂質(zhì)代謝的狀況，在魚體正常供食情況下，總膽固醇含量處于一個穩(wěn)定狀態(tài)。從表3可以看出，隨著保活時間延長，總膽固醇含量呈增加趨勢（2.5谷草芽孢桿菌的活性乳酸脫氫酶能催化丙酮酸向乳酸轉(zhuǎn)化，是糖代謝酵解途徑的關(guān)鍵酶之一，當魚體受到損傷與外界環(huán)境脅迫或者進行無氧酵解時會引起乳酸脫氫酶的活性升高谷草轉(zhuǎn)氨酶是肝臟中重要的一種酶，它具有將糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)連接起來的作用，正常情況下魚體血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性相對較低且穩(wěn)定，當肝臟或心肌受到損傷時，血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性會顯著升高2.6基于脂肪和糖原的能量肌肉pH值、糖原、乳酸具有密不可分的關(guān)系，大多數(shù)魚類在饑餓時，主要通過消耗體內(nèi)儲存的脂肪和糖原獲得能量，以維持機體在饑餓脅迫下的正常生理代謝。饑餓時魚類對蛋白質(zhì)的利用較少從表4可以看出，在金鯧魚?；钸^程中肌肉pH值、糖原、乳酸均顯著變化（3?；钸^程中金魚的代謝及?；钏俾恃芯苛撕Ｋ疁囟葘瘀K魚有水保活過程中應(yīng)激和代謝的影響，結(jié)論如下：金鯧魚生態(tài)冰溫區(qū)的臨界溫度為12~13℃，適宜的休眠溫度為13~14℃，適宜的?；顪囟葹?5~17℃；金鯧魚?；钸^程中，魚體代謝會使水體中氨氮總含量和pH值上升，低溫脅迫會使魚體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，血清的皮質(zhì)醇含量上升，血糖含量下降，尿