花生殼提取液對亞硝酸鹽清除作用的研究

花生又名長果，在我國廣泛種植，產(chǎn)量高。每年都會(huì)產(chǎn)生大量的次生生物花生殼。此外,生姜、陳皮、薄荷等提取液均有清除亞硝酸鹽和抑制亞硝胺合成的作用1材料和方法1.1材料和試劑花生殼(魯花18);亞硝酸鈉、對氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、無水乙醇、鹽酸等其他常規(guī)化學(xué)試劑均為分析純。1.2實(shí)驗(yàn)儀器和儀器UV–2000型可見分光光度計(jì):尤尼柯(上海)儀器有限公司;XMTD–8222電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海精宏實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;KS–300EI超聲波清洗器:寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司;DFY–250搖擺式高速萬能粉碎機(jī):浙江溫嶺市林大機(jī)械有限公司;FA1004B電子分析天平:上海越平科學(xué)儀器有限公司;TDL–40B型高速離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠。1.3測試方法1.3.1超聲波法醇提離心吸光度的測定花生殼預(yù)處理→花生殼粉→過100目篩→超聲波法醇提→離心→吸取上清液于25mL具塞試管,加入檢測所需試劑→搖勻,定容,靜置15min→比色法測吸光值1.3.2亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:稱取0.0050g亞硝酸鈉于錐形瓶中,以少量蒸餾水溶解后移入1000mL容量瓶中定容至1000mL,得到5.0μg/mL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。0.4%對氨基苯磺酸溶液:稱取0.4g對氨基苯磺酸溶解于20%的鹽酸中,定容至100mL容量瓶中,混勻,避光保存。0.2%鹽酸萘乙二胺溶液:稱取0.2g鹽酸萘乙二胺溶解于蒸餾水中,定容至100mL容量瓶中,混勻,避光保存。1.3.3計(jì)算結(jié)果亞硝酸鹽和對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)生成的重氮鹽,可與α–萘胺偶聯(lián)生成紅色偶聯(lián)化合物準(zhǔn)確量取兩份5.0μg/mLNaNO式中:A1.3.4試驗(yàn)計(jì)劃方法1.3.4.乙醇中亞硝酸鹽清除率的測定取5個(gè)250mL錐形瓶,均加入2g花生殼粉末,分別加入20%、40%、60%、70%、80%的乙醇各40mL,在超聲波清洗機(jī)中于60℃提取10min后,于4000r/min離心10min,按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.乙醇對亞硝酸鹽清除率的影響試驗(yàn)根據(jù)1.3.4.1,分別加入60%的乙醇20、40、60、80、100mL后,進(jìn)行試驗(yàn),按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.亞硝酸鹽清除率的測定根據(jù)1.3.4.1,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機(jī)中于25、40、55、70、80℃提取10min后,進(jìn)行試驗(yàn),按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.亞硝酸鹽清除率的測定,乙醇超聲波萃取法提取亞硝酸鹽,提高乙醇提取物的質(zhì)量,乙醇超聲波預(yù)根據(jù)1.3.4.1,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機(jī)中于60℃分別提取5、10、15、20、25min后,進(jìn)行試驗(yàn),按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.乙醇的提取取5個(gè)250mL錐形瓶,均加入2g花生殼粉末,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機(jī)中于60℃提取10min后,于4000r/min離心10min,取5只25mL具塞試管,均加入1mL5.0μg/mLNaNO1.3.4.6-反應(yīng)時(shí)間對亞硝酸鹽濃度的影響根據(jù)1.3.4.5,加入2mL花生殼浸提液,分別反應(yīng)5、10、15、20、25min,進(jìn)行試驗(yàn),然后按照式1–1計(jì)算清除率。1.3.4.7正交試驗(yàn)以花生殼提取液與亞硝酸鹽的反應(yīng)時(shí)間、提取液用量以及提取溫度在單因素試驗(yàn)中確定的適宜范圍為依據(jù),進(jìn)行L1.3.4.8試驗(yàn)利用正交試驗(yàn)篩選出各因素水平的最佳配比,根據(jù)最佳組合做驗(yàn)證試驗(yàn),平行試驗(yàn)3次,取平均值。2結(jié)果與討論2.1吸收最大波長的確定吸取5.0μg/mLNaNO由上圖可知,在550nm處得到最大吸光值,因此最大吸收波長采用550nm。2.2單因素試驗(yàn)的結(jié)果和分析2.2.1乙醇濃度對亞硝酸鹽清除率的影響由圖2分析可知:乙醇濃度在20%~70%時(shí)清除率增加;乙醇濃度超過70%時(shí),清除率開始隨著乙醇濃度的增加而降低,可能由于乙醇濃度過高,抑制或降低了花生殼有效成分的活性,從而使其對亞硝酸鹽的清除率降低。因此,乙醇濃度為70%時(shí),清除率最大。2.2.2料液比對亞硝酸鹽清除率的影響由圖3可知料液比為1∶10~1∶20(g/mL)時(shí),清除率隨著料液比的增加而增加,料液比大于1∶20(g/mL)時(shí),清除率開始隨著料液比的增加而減少。當(dāng)料液比不斷增加時(shí),花生殼有效成分濃度降低,對亞硝酸鹽的作用隨之降低。因此,在料液比為1∶20(g/mL)時(shí)清除率最大。2.2.3溫度對有效成分的影響由圖4可知,清除率在25~40℃隨著溫度的增加而增加,在40℃之后,清除率便隨著溫度的增加而下降。在溫度升高過程中,有效成分不斷溶解于液體中,當(dāng)溫度超過其最大耐受溫度時(shí),其活性會(huì)受影響。本次試驗(yàn)提取溫度為40℃時(shí)清除率最大。2.2.4提取時(shí)間和時(shí)間由圖5可知,在5~10min時(shí),清除率隨著時(shí)間的增加而增加,10min之后,清除率隨著時(shí)間的增加而下降,且下降趨勢隨著時(shí)間的增加而增大,所以提取時(shí)間為10min時(shí)清除率最大。提取時(shí)間過長,可能會(huì)造成有效成分的揮發(fā)損失,從而影響清除率。2.2.5提取液用量在8由圖6可知,提取液用量在2~8mL清除率整體為上升趨勢,但是在8~10mL時(shí)清除率下降,提取液用量為8mL清除率最大。當(dāng)?shù)孜餄舛纫欢〞r(shí),提取液用量不斷增加至飽和,從而抑制其作用。2.2.6反應(yīng)時(shí)間和時(shí)間由圖7可知,反應(yīng)時(shí)間在5~10min時(shí),清除率隨時(shí)間增加而增加,在10~15min時(shí)保持平穩(wěn)趨勢,15min之后,清除率隨著時(shí)間的增加而下降,所以反應(yīng)時(shí)間為10min時(shí)清除率最大。隨著反應(yīng)時(shí)間增長,花生殼提取液濃度不斷降低,其作用效果逐漸變差。2.3正交試驗(yàn)結(jié)果通過對表2的分析統(tǒng)計(jì),得R根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果以各因素水平為橫坐標(biāo),k值為縱坐標(biāo)作極差直觀分析圖,結(jié)果見圖8。由圖8知,花生殼提取液清除亞硝酸鹽的最佳組合為A2.4正交試驗(yàn)結(jié)果由表3知,最優(yōu)條件下花生殼提取液對亞硝酸鹽的清除率為78.12%,正交試驗(yàn)結(jié)論可靠。因此,花生殼提取液對亞硝酸鹽清除作用的最佳組合為提取溫度25℃、提取液用量10mL、反應(yīng)時(shí)間10min。3最佳清除亞硝酸鹽的確定花生殼提取液對亞硝酸鹽有較強(qiáng)的清除能力。