臨床微生物學(xué)

尿培養(yǎng)操作規(guī)范

尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合征。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（如腎盂腎炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時(shí)感染也很常見(jiàn)。尿路感染是人類(lèi)最常見(jiàn)的感染之一，可發(fā)生于各個(gè)年齡段的人群，好發(fā)于女性，男:女之比為1:10。典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者年齡和健康狀況不同而異。新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模湖的，可表現(xiàn)有厭食，嘔吐，倦怠，無(wú)發(fā)熱的菌血癥等；嬰兒期直到2歲，常有高熱；2歲以后的尿路感染才會(huì)有典型的臨床表現(xiàn)；老年患者的尿路感染，常缺乏明顯的癥狀，更易造成菌血癥和急性腎功能衰竭，應(yīng)引起重視。

診斷尿路感染最常用的方法是進(jìn)行尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同（表1）。表１尿路感染的原因及常見(jiàn)病原菌

感染原因 主要致病菌 感染特點(diǎn)上行感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌主要為腸道菌群或會(huì)陰部細(xì)菌逆行感染，多見(jiàn)于女性，多為單一細(xì)菌感染，以大腸埃希菌感染最常見(jiàn)泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、腸桿菌、普羅威登菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、腸球菌多見(jiàn)于留置導(dǎo)尿管、腎盂造瘺術(shù)、尿路結(jié)石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受損的患者，容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認(rèn)為標(biāo)本污染發(fā)生于菌血癥的患者，血液中的細(xì)菌通過(guò)血流進(jìn)入腎臟引起感染，比較少見(jiàn)血行感染葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌、沙門(mén)菌直接感染大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌外傷或腎周?chē)鞴侔l(fā)生感染時(shí)，細(xì)菌直接侵入腎臟引起感染，非常少見(jiàn)

一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送１．采集指征：有典型的尿路感染癥狀；肉眼膿尿或血尿；尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性；不明原因發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；膀胱排空功能受損；泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前２．采集方法：

標(biāo)本采集應(yīng)力爭(zhēng)在未使用抗生素之前，注意避免消毒劑污染標(biāo)本，方法有：

（１）清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后用肥皂水清洗會(huì)陰部，女性應(yīng)用手分開(kāi)大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清沖洗尿道口周?chē)?；開(kāi)始排尿，將前段尿排去，中段尿約10～20ml直接排入專(zhuān)用的無(wú)菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡(jiǎn)單易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法，但很容易受到會(huì)陰部細(xì)菌污染，應(yīng)由醫(yī)務(wù)人員采集或在醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。

（２）恥骨上膀胱穿刺：使用無(wú)菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，但有一定的痛苦，患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。

（３）直接導(dǎo)尿：按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。

（４）留置導(dǎo)尿管收集尿液：利用留置導(dǎo)尿管采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部，按無(wú)菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液，操作時(shí)應(yīng)防止混入消毒劑，注意不能從尿液收集袋中采集尿液。３．采集容器：應(yīng)由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成；潔凈、無(wú)菌、加蓋、密封、防滲漏；不含防腐劑和抑菌劑；廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)大于50ml、盒蓋易于開(kāi)啟。４．標(biāo)本運(yùn)送：

標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得超過(guò)2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），4°C冷藏保存時(shí)間不得超過(guò)8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。二、標(biāo)本驗(yàn)收１．申請(qǐng)單驗(yàn)收：要求尿培養(yǎng)申請(qǐng)單除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時(shí)間、收集方式、是否已使用過(guò)抗生素等，驗(yàn)收時(shí)應(yīng)檢查申請(qǐng)單是否填寫(xiě)完整。２．標(biāo)本驗(yàn)收：（１）檢查標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請(qǐng)單相符；（２）檢查標(biāo)本容器有無(wú)溢漏、滲出，是否加蓋；（３）檢查送檢時(shí)間是否超過(guò)標(biāo)本保存時(shí)間。３．不合格標(biāo)本處理：（１）對(duì)申請(qǐng)單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)生取得聯(lián)系；（２）對(duì)標(biāo)識(shí)不符、送檢容器不合格、送檢時(shí)間超過(guò)規(guī)定時(shí)間的標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。三、實(shí)驗(yàn)室檢查１．涂片檢查：尿路感染標(biāo)本可直接做細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)需常規(guī)進(jìn)行涂片檢查。對(duì)于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本可用無(wú)菌吸管吸取尿液5～10ml置無(wú)菌試管中，3000～4000r/min離心30min，傾去上清液，取沉渣涂片，行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。

２．細(xì)菌培養(yǎng)：（１）普通培養(yǎng)：將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)分別取尿液1ul涂抹接種血平板和麥康凱平板（或中國(guó)藍(lán)平板），35～37°C培養(yǎng)18～24h，觀(guān)察結(jié)果。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)10ul接種量。（２）特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶?biāo)本，加種一塊巧克力平板，置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)無(wú)需做定量培養(yǎng)，可將標(biāo)本離心后取尿沉渣進(jìn)行培養(yǎng)，以提高陽(yáng)性率。（３）普通培養(yǎng)18～24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。四、結(jié)果觀(guān)察和報(bào)告

１．結(jié)果觀(guān)察和評(píng)價(jià)：

（１）菌落計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，采用1ul接種量者，將菌落數(shù)乘以103；采10ul接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。如菌落生長(zhǎng)過(guò)多無(wú)法精確計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告＞105CFU/ml。

（２）結(jié)果評(píng)價(jià)：正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無(wú)菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受