概述定義：免疫學(xué)技術(shù)是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合原理建立的各種檢測(cè)、分析技術(shù)的總稱分類：體外免疫檢測(cè)技術(shù)：常以免疫血清作為抗體的來源，故又稱為血清學(xué)試驗(yàn)細(xì)胞免疫技術(shù)：用于檢測(cè)和研究集體的細(xì)胞免疫功能與狀態(tài)免疫制備技術(shù)：如抗體制備、純化、標(biāo)記技術(shù)等概述定義：免疫學(xué)技術(shù)是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合原理建立的各種檢1血清學(xué)試驗(yàn)類型凝聚性試驗(yàn)：凝集試驗(yàn)，沉淀試驗(yàn)標(biāo)記抗體技術(shù)：熒光、酶、放射性同位素標(biāo)記技術(shù)等有補(bǔ)體參與的試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等中和試驗(yàn)：病毒中和試驗(yàn)等免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)免疫傳感器技術(shù)血清學(xué)試驗(yàn)類型凝聚性試驗(yàn)：凝集試驗(yàn)，沉淀試驗(yàn)2血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性與交叉性:抗原抗體結(jié)合的特異性是抗原分析和疾病診斷的基礎(chǔ)；但不同微生物的部分共同抗原或不同抗原的相同表位可出現(xiàn)交叉反應(yīng)，后者是區(qū)分血清型或亞型重要依據(jù)結(jié)合比例:抗原抗體結(jié)合在比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)明顯可見反應(yīng),抗原或抗體過多可抑制可見反應(yīng),稱為帶現(xiàn)象可逆性:抗原抗體結(jié)合力與非共價(jià)鍵性質(zhì)、數(shù)量和距離有關(guān),形成的復(fù)合物可以解離,離解常數(shù)(K)反映抗體與抗原之間的親合力,高親合力結(jié)合不易解離反應(yīng)的階段性:特異結(jié)合迅速(幾秒-幾分鐘),可見反應(yīng)階段較長(zhǎng)在凝集試驗(yàn)（顆粒性抗原）中，常因抗體過剩出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，故需固定抗原稀釋抗體；而在沉淀試驗(yàn)（可溶性抗原）中，可因抗原過剩出現(xiàn)后帶現(xiàn)象，故需稀釋抗原血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性與交叉性:抗原抗體結(jié)合的特異性是抗3影響血清學(xué)反應(yīng)的因素抗體:包括抗體動(dòng)物來源、濃度(效價(jià))、親和性等抗原:包括理化特性(可溶性，顆粒性)和抗原表位數(shù)目及種類電解質(zhì):無電解質(zhì)存在不出現(xiàn)可見反應(yīng)(沉淀或凝集),一般用生理鹽水作為抗體和抗原稀釋液,有時(shí)需特殊電解質(zhì),但鹽濃度過高會(huì)出現(xiàn)非特異性蛋白沉淀(鹽析)酸堿度:反應(yīng)一般在pH6-9范圍內(nèi)進(jìn)行溫度:一般在37℃或室溫進(jìn)行,較低溫度(如4℃)出現(xiàn)可見反應(yīng)慢,但特異性強(qiáng),溫度過高會(huì)使已結(jié)合復(fù)合物解離時(shí)間:出現(xiàn)可見反應(yīng)需要一定時(shí)間,應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果或終止反應(yīng)影響血清學(xué)反應(yīng)的因素抗體:包括抗體動(dòng)物來源、濃度(效價(jià))、親4血清學(xué)試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)，敏感性高檢測(cè)樣品用量少，預(yù)處理較簡(jiǎn)單試驗(yàn)方法多，可擇優(yōu)選用方法簡(jiǎn)易、快速可用于抗原或抗體的定性、定量、定位檢測(cè)血清學(xué)試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)，敏感性高5血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用抗原抗體定性檢測(cè):疾病診斷血型鑒定病原微生物分型鑒定抗原抗體的定量檢測(cè):抗原或抗體效價(jià)測(cè)定免疫效果跟蹤檢測(cè)流行病學(xué)調(diào)查其它生物活性物質(zhì)定量分析抗原定位檢測(cè):借助光學(xué)和電子顯微鏡,在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平研究病原微生物及其表達(dá)產(chǎn)物與宿主細(xì)胞的關(guān)系血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用抗原抗體定性檢測(cè):6凝聚性試驗(yàn)定義：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在電解質(zhì)存在下相互凝聚成肉眼可見的凝聚物或沉淀物分類凝集試驗(yàn)：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原或與顆粒性載體（紅細(xì)胞、乳膠等）結(jié)合的可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下形成肉眼可見的沉淀物凝聚性試驗(yàn)定義：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在電解質(zhì)存在下7凝集試驗(yàn)分類凝集性試驗(yàn)直接凝集性試驗(yàn)間接凝集性試驗(yàn)玻片凝集性試驗(yàn)試管凝集性試驗(yàn)生長(zhǎng)凝集性試驗(yàn)正向間接凝集性試驗(yàn)反向間接凝集性試驗(yàn)協(xié)同凝集性試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)直接法間接法凝集試驗(yàn)分類凝集性試驗(yàn)直接凝集性試驗(yàn)間接凝集性試驗(yàn)玻片凝集性8玻片凝集試驗(yàn)屬于直接凝集和定性試驗(yàn)可用于未知(待測(cè))抗原或抗體檢測(cè)快速簡(jiǎn)便，1-3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒為陽性反應(yīng)主要用于細(xì)菌分型鑒定、疾病診斷（如布氏桿菌和雞白痢檢疫)和血型鑒定已知抗原陽性抗體對(duì)照陰性抗體對(duì)照待測(cè)抗體(陽性)待測(cè)抗體(陰性)玻片凝集試驗(yàn)屬于直接凝集和定性試驗(yàn)已知抗原陽性抗體對(duì)照陰性抗9試管凝集試驗(yàn)多用已知抗原進(jìn)行血清抗體的定性和定量（效價(jià)或滴度）檢測(cè)，可用于疾病診斷和流行病學(xué)調(diào)查常用生理鹽水將待測(cè)血清作倍比稀釋，與等量抗原混合，反應(yīng)溫度和時(shí)間視抗原種類決定判斷標(biāo)準(zhǔn):++++(100%凝集),+++(75%凝集),++(50%凝集),+(25%凝集),-(不凝集),出現(xiàn)50%以上凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的凝集價(jià)(滴度)注意陽性和陰性對(duì)照,適當(dāng)稀釋待檢血清以避免前帶現(xiàn)象，有些細(xì)菌（如R型細(xì)菌）懸液不穩(wěn)定，易出現(xiàn)自凝現(xiàn)象根據(jù)凝集反應(yīng)原理可制備單因子血清試管凝集試驗(yàn)多用已知抗原進(jìn)行血清抗體的定性和定量（效價(jià)或滴度10間接凝集試驗(yàn)定義：將可溶性抗原或抗體吸附在免疫無關(guān)的顆粒載體上，然后與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行的凝集反應(yīng)常用載體：紅血球(間接血凝試驗(yàn))和乳膠(乳膠凝集試驗(yàn))等，將可溶性抗原吸附在顆粒載體表面的過程稱為致敏分類：正向間接凝集試驗(yàn)：將抗原吸附載體檢測(cè)抗體反向間接凝集試驗(yàn)：將抗體吸附載體檢測(cè)抗原一般在微量反應(yīng)板上進(jìn)行可用于抗原或抗體的效價(jià)測(cè)定，具有簡(jiǎn)單、方便和較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)間接凝集試驗(yàn)定義：將可溶性抗原或抗體吸附在免疫無關(guān)的顆粒載體11協(xié)同凝集試驗(yàn)葡萄球菌A蛋白(SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的一種蛋白質(zhì)SPA能與人和動(dòng)物(豬、犬、兔、猴、豚鼠)IgGFc片段非特異結(jié)合與抗體結(jié)合的SPA菌體稱為致敏菌體,可與抗原(細(xì)菌、病毒、毒素等)發(fā)生快速凝集,稱為協(xié)同凝集試驗(yàn)主要用于傳染病的快速診斷,SPA菌體還可用于IgG純化葡萄球菌抗體抗原協(xié)同凝集試驗(yàn)葡萄球菌A蛋白(SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌細(xì)12抗球蛋白(Coombs)試驗(yàn)本質(zhì)：間接凝集試驗(yàn)原理：不完全抗體(單價(jià)抗體)與顆粒抗原結(jié)合不出現(xiàn)可見凝集反應(yīng)，用單價(jià)抗體免疫動(dòng)物,將獲得的抗抗體與結(jié)合有單價(jià)抗體的顆粒載體混合，出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)應(yīng)用：初生動(dòng)物自身免疫溶血性貧血診斷，布氏桿菌病的不完全抗體檢測(cè)，抗組織細(xì)胞不完全抗體的檢測(cè)YYYYY不完全Ab顆粒性抗原如：RBCs+=Step1+=YYYYYYYYYYYYYYYYYYYAnti-AbFcStep2抗球蛋白(Coombs)試驗(yàn)本質(zhì)：間接凝集試驗(yàn)YYYYY不完13沉淀試驗(yàn)分類絮狀沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)免疫濁度測(cè)定免疫擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳對(duì)流免疫電泳火箭免疫電泳液體沉淀試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)?zāi)z內(nèi)沉淀試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)分類絮狀沉淀試驗(yàn)免疫擴(kuò)散試驗(yàn)液體沉淀試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)?zāi)z14環(huán)狀沉淀試驗(yàn)在小口徑玻璃管內(nèi)進(jìn)行主要用于抗原的定性檢測(cè)(如診斷炭疽病的Ascoli試驗(yàn)、鏈球菌的血清型鑒定、血跡鑒定和沉淀素的效價(jià)滴定出現(xiàn)白色沉淀環(huán)的抗原最高稀釋倍數(shù)為該血清的沉淀價(jià)已知血清待測(cè)抗原沉淀環(huán)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)在小口徑玻璃管內(nèi)進(jìn)行已知血清待測(cè)抗原沉淀環(huán)15免疫濁度測(cè)定原理：抗原抗體復(fù)合物在特定的稀釋液中容易析出,從而發(fā)生濁度變化，當(dāng)抗體濃度固定時(shí),在一定范圍內(nèi)抗原和抗體混合物的濁度與抗原的量呈正比儀器及要求：需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)多與光學(xué)儀器和自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)向結(jié)合應(yīng)用：可檢測(cè)微量的抗原或抗體免疫濁度測(cè)定原理：抗原抗體復(fù)合物在特定的稀釋液中容易析出,從16單向單擴(kuò)散試驗(yàn)抗原在含陽性血清凝膠中單方向擴(kuò)散形成沉淀線,隨擴(kuò)散的進(jìn)行,已形成沉淀線不斷溶解并形成新的沉淀線,導(dǎo)致沉淀線不斷前移,最終形成穩(wěn)定沉淀線沉淀線距離與抗原量呈正比主要用于抗原的定量測(cè)定含已知抗體凝膠待檢抗原沉淀線單向單擴(kuò)散試驗(yàn)抗原在含陽性血清凝膠中單方向擴(kuò)散形成沉淀線,隨17瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)定義：將可溶性抗原和抗體在半固體瓊脂凝膠中擴(kuò)散，當(dāng)兩者相遇并達(dá)到比例適當(dāng)時(shí)出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線分類：?jiǎn)蜗騿螖U(kuò)散單向雙擴(kuò)散雙向單擴(kuò)散雙向雙擴(kuò)散（免疫擴(kuò)散試驗(yàn)）瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)定義：將可溶性抗原和抗體在半固體瓊脂凝膠中擴(kuò)18雙向單擴(kuò)散試驗(yàn)基本原理診斷雞馬立克氏病的羽囊瓊擴(kuò)試驗(yàn)病雞羽毛根雙向單擴(kuò)散試驗(yàn)基本原理診斷雞馬立克氏病的羽囊瓊擴(kuò)試驗(yàn)病雞羽毛19免疫擴(kuò)散試驗(yàn)原理:不同孔中的抗原、抗體在凝膠中自由擴(kuò)散,由近及遠(yuǎn)形成濃度梯度,當(dāng)兩者相遇且比例適合時(shí)形成復(fù)合物(沉淀線)用途:主要用于復(fù)雜抗原分析免疫擴(kuò)散試驗(yàn)原理:不同孔中的抗原、抗體在凝膠中自由擴(kuò)散,由20免疫電泳本質(zhì)：電泳與雙向免疫擴(kuò)散相結(jié)合原理：瓊脂的SO4--使溶液因靜電感應(yīng)產(chǎn)生正電荷,形成向負(fù)極的推力(電滲力),帶正電的分子在電滲力作用下加速向負(fù)極泳動(dòng),帶負(fù)電分子克服電滲力向正極泳動(dòng)用途：血清蛋白的分析及疾病診斷免疫電泳本質(zhì)：電泳與雙向免疫擴(kuò)散相結(jié)合21對(duì)流電泳本質(zhì)：用電泳加速抗原抗體定向擴(kuò)散原理：大部分抗原帶較強(qiáng)負(fù)電荷,能克服電滲力向陽極泳動(dòng),IgG帶弱負(fù)電荷，不能克服電滲力而向陰極移動(dòng)，兩者相遇時(shí)形成沉淀線應(yīng)用：主要用于快速診斷對(duì)流電泳本質(zhì)：用電泳加速抗原抗體定向擴(kuò)散22火箭電泳原理：在含抗血清的瓊脂凝膠(pH8.2)中，加在陰極孔中的抗原在電泳力作用下向陽極泳動(dòng),形成濃度梯度,在與抗體比例適合處形成沉淀峰,峰的高度與抗原含量呈正比應(yīng)用：主要用于抗原定量分析火箭電泳原理：在含抗血清的瓊脂凝膠(pH8.2)中，加在陰極23免疫標(biāo)記技術(shù)用酶或熒光素等示蹤物標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng),借助光學(xué)或酶學(xué)儀器對(duì)結(jié)果進(jìn)行直接觀察或自動(dòng)化測(cè)定,在細(xì)胞及亞細(xì)胞水平上對(duì)抗原進(jìn)行定性和定位分析免疫標(biāo)記技術(shù)用酶或熒光素等示蹤物標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng),借24免疫熒光技術(shù)原理：用熒光素標(biāo)記的抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),然后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果,進(jìn)行抗原(如病毒感染細(xì)胞)的定性、定位研究分類：直接法：標(biāo)記第一抗體，特異性高，操作簡(jiǎn)便，較快速，但一種標(biāo)記抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差間接法：標(biāo)記抗抗體，既能檢查抗原，也能檢查抗體，一種標(biāo)記抗抗體能與同種所有動(dòng)物的抗體結(jié)合，敏感性高，但參與加因素較多，判定結(jié)果有時(shí)較難，操作繁瑣常用的熒光素：異硫氰酸熒光素(FITC)等免疫熒光技術(shù)原理：用熒光素標(biāo)記的抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),然后在25免疫酶技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的催化高效性相結(jié)合的一類技術(shù)可用于抗原和抗體的定性、定位或定量研究主要包括免疫酶組化染色技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedimmunosorbantassay,ELISA)免疫酶技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的催化高效性相結(jié)合的一類26免疫酶組化染色技術(shù)原理與免疫熒光相似,主要在病例切片或培養(yǎng)細(xì)胞上進(jìn)行常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP)分為直接法(標(biāo)記第一抗體)、標(biāo)記抗抗體)、抗抗體搭橋法和雜交抗體法免疫酶組化染色技術(shù)原理與免疫熒光相似,主要在病例切片或培養(yǎng)細(xì)27酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)將抗原或抗體吸附于固相載體(如聚苯乙烯微孔板)上,然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng),酶底物顯色后用肉眼或酶聯(lián)免疫測(cè)定儀進(jìn)行定性觀察或定量測(cè)定主要有間接法、競(jìng)爭(zhēng)法和雙抗體夾心法應(yīng)用:用于抗原或抗體的測(cè)定,進(jìn)行傳染病的診斷及流行病學(xué)調(diào)查;用于抗原或抗體的含量或效價(jià)測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)將抗原或抗體吸附于固相載體(如聚苯乙烯微孔板28ELISA的結(jié)果判定肉眼:根據(jù)反應(yīng)孔內(nèi)液體的顏色進(jìn)行定性觀察儀器:P/N值判定法:被檢樣本(P)OD值與陰性樣本(N)OD值的比值(P/N)1.5為陽性樣本的平均OD值大于陰性樣本OD平均值+兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差+0.2-0.4為陽性ELISA的結(jié)果判定肉眼:根據(jù)反應(yīng)孔內(nèi)液體的顏色進(jìn)行定性觀察29放射免疫技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的特異性與放射免疫測(cè)定的高度敏感性相結(jié)合主要有液相放射免疫測(cè)定法和固相競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法主要用于微量抗原的定性和定量分析放射免疫技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的特異性與放射免疫測(cè)定的高度敏感性30補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)包括反應(yīng)系統(tǒng)(抗原和抗體)、補(bǔ)體和指示系統(tǒng)(被溶血素致敏的紅血球)特別煩瑣,影響因素多,現(xiàn)很少用CCC反應(yīng)系統(tǒng)指示系統(tǒng)溶血反應(yīng)結(jié)果判定抗體抗原補(bǔ)體溶血素+紅細(xì)胞補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)包括反應(yīng)系統(tǒng)(抗原和抗體)、補(bǔ)體和指示系統(tǒng)(被溶31免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)以標(biāo)記抗體為探針的蛋白轉(zhuǎn)印雜交基本過程包括待測(cè)蛋白樣品的電泳分離、蛋白向雜交膜(硝酸纖維素膜)的轉(zhuǎn)移、雜交膜的封閉、用標(biāo)記抗體進(jìn)行的雜交、洗滌和信號(hào)顯示免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)以標(biāo)記抗