萃取-紫外分光光度法測定微晶蠟中的微量3,4-苯并

1933年，科克等人通過了3、4-苯并，許多科學家進行了致癌性厚環(huán)芳烴的分離和分析研究。1異辛烷的凈化1.1Lambda35紫外分光光度計,美國PerkinElmer公司生產;減壓蒸餾裝置,撫順石油化工研究院生產;分液漏斗.異辛烷,正十六烷,磷酸(分析純);二甲亞砜(光譜純);3,4-苯并芘(純度大于98%);所用水為去離子水.561.2在長約900mm、直徑50mm的玻璃色譜柱下端用潔凈的棉花堵塞,向色譜柱中裝入1kg左右的0.154~0.065mm細孔硅膠,然后加入異辛烷,異辛烷的處理量根據其中的雜質而定,一般情況下1kg的硅膠可凈化4~5L的異辛烷,先滴下來的200mL須倒回上端容器再處理一次,液體流速應控制在每分鐘4~5mL左右.正十六烷一般采用小色譜柱凈化,色譜柱的徑高比約為15~20,操作步驟與異辛烷的凈化步驟基本相同.1.33,4-稱取10mg的3,4-苯并芘,逐級定量加入凈化的異辛烷試劑,配制成相當于溶液含有50ng/mL、200ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、1800ng/mL、3000ng/mL的3,4-苯并芘標準溶液.1.4取25g熔化的微晶蠟樣品,倒入裝有一定量的二甲亞砜磷酸溶液的分液漏斗中,振蕩抽提,分離濾液,重復抽提和洗滌,濾液合并.將合并的濾液和蒸餾水混合,加入異辛烷反抽提,棄去水層,得到稠環(huán)芳烴異辛烷混合液.混合液中加入1mL正十六烷,在水浴氮氣吹蒸至殘液不大于1mL.殘液再加入異辛烷至總體積25mL,以空白試驗所得殘液作參比液,在一定波長下測定紫外吸光度,并與標準曲線進行比較,得出微晶蠟中的3,4-苯并芘的含量.每毫升異辛烷溶液中所含的3,4-苯并芘量即相當于每克微晶蠟中所含的3,4-苯并芘.2萃取時間和方法的選擇2.1選擇標準樣品溶液配制的介質,首先應考慮不影響3,4-苯并芘的測試結果,而且沸點和物性與微晶蠟較相近的物質2.2用600ng/mL、1800ng/mL和3000ng/mL的3,4-苯并芘標準溶液,按1.4節(jié)實驗方法測定,得到紫外吸收光譜圖,見圖1.由圖1可見,3,4-苯并芘異辛烷溶液在383nm處有最大吸收峰.因此,本實驗選擇383nm作為測定微晶蠟中3,4-苯并芘的波長.2.3溶劑萃取是利用溶劑對樣品中的組分具有選擇性溶解能力2.4選擇75號微晶蠟和80號微晶蠟進行萃取抽提試驗.每次取100mL二甲亞砜溶液與樣品按實驗方法進行分析,樣品吸光度與抽提次數的關系列于表1.由表1可見,吸光度隨抽提次數的增加而增大,但抽提三次后再增加抽提次數吸光度值基本保持不變,說明樣品經過三次抽提即能將可抽提的3,4-苯并芘類稠環(huán)芳烴完全萃取,因此,本實驗選擇的溶劑萃取次數為三次.2.5實驗得到3,4-苯并芘濃度在50~3000ng/g的范圍內呈良好線形關系,工作曲線回歸方程C=9242.4A–29.6,相關系數0.9995.檢出限為16ng/g.2.6在80號微晶蠟中加入不同量的3,4-苯并芘,進行了加標回收試驗,結果見表2.由表2可見,3,4-苯并芘的回收較高,回收率在97.0%~99.4%之間.2.7為考察方法的重復性,選取五個樣品分別進行了六次平行測定,3,4-苯并芘含量在50~3000ng/g的范圍內,相對標準偏差為6.2%.2.8按實驗方法要求,對國內六種石蠟和微晶蠟樣品進行了測定,結果見表3.由表3可見,加氫后753檢出限和檢出限(1)采用二甲亞砜萃取-紫外分光光度法能夠測定食品微晶蠟中ng/g級含量的3,4-苯并芘,其檢出限為16ng/g.(2)3,4-苯并芘含量在50~3000ng/g的