聾病的臨床基因診斷聾病的臨床基因診斷1概況每1000個兒童里1.3-2.3名兒童受耳聾困擾50%兒童感音神經性聾歸結于遺傳因素,20-25%歸結為環(huán)境因素，25-30%為散發(fā)性病例遺傳性感音性耳聾的相對增加促動醫(yī)生必須熟悉這一疾病75-80%遺傳性耳聾為常染色體隱性遺傳，18-20%為常染色體顯性遺傳，其余為線粒體、X-連鎖或染色體疾病概況每1000個兒童里1.3-2.3名兒童受耳聾困擾2在中國，每年有30000新生兒患重度或極重度耳聾。另有相當比例的嬰幼兒患遲發(fā)性聽力下降，每年新發(fā)耳聾患兒8萬名。兩千萬人患各種聽力疾病。在中國，每年有30000新生兒患重度或極重度耳聾。3隨著人類基因組計劃的實施和完成，耳聾的遺傳學研究是遺傳學中進步最大的一個分支，鮮有人類常見病能象耳聾那樣有大量的疾病相關基因被定位克隆。耳聾的臨床基因診斷應運而生。隨著人類基因組計劃的實施和完成，耳聾的遺傳學4怎樣去利用基因科學的巨大進步去造福于眾多的耳聾患者？第一步：耳聾的基因診斷（突破堅硬耳蝸外殼的限制）第二步：耳聾的預防和產前診斷第三步：耳聾的基因治療怎樣去利用基因科學的巨大進步去造福于眾多的耳聾患者？5耳聾基因診斷應達到的目的在分子水平明確病因（意義等同于發(fā)現肺炎的致病子）預防耳聾發(fā)生指導耳聾治療判斷預后進行耳聾遺傳咨詢進行產前診斷，迎接正常聽力新生兒耳聾基因診斷應達到的目的6耳聾基因診斷和咨詢課件7耳聾基因診斷和咨詢課件8耳聾基因診斷和咨詢課件9耳聾基因診斷和咨詢課件10耳聾基因診斷和咨詢課件11常染色體顯性遺傳常染色體顯性遺傳12常染色體隱性遺傳常染色體隱性遺傳13線粒體遺傳線粒體遺傳14常見的耳聾基因診斷常見的耳聾基因診斷15中重度先天性耳聾中GJB2基因突變的檢測和快速篩查中重度先天性耳聾中GJB2基因突變的檢測和快速篩查16解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心的數據：在500例各地的先天性耳聾患者20%具有GJB2235delC純合或雜合突變解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心的數據：17在針對100例先天性耳聾患者的GJB2基因全序列分析中發(fā)現：先天性耳聾患者中GJB2基因存在高突變率235delC是頻率最高的致病突變已發(fā)現一系列新突變，表明中國人有其獨特的突變熱點和頻率在針對100例先天性耳聾患者的GJB2基因全序列分析中發(fā)現：18限制性酶切檢測中國人常見GJB2235delC突變限制性酶切檢測中國人常見GJB2235delC突變19什么樣的病人應作GJB2基因突變檢測?廣義：不明原因的雙側中重度感音性耳聾強烈推薦：先天性雙側中重度感音性耳聾什么樣的病人應作GJB2基因突變檢測?20GJB2基因突變檢測的意義：明確耳聾的分子學病因，終止大范圍盲目的病因學檢查配合新生兒的聽力篩查手段，及早明確GJB2基因突變的耳聾診斷，進行早期聽力康復提示良好的電子耳蝸移植的治療效果適合于產前診斷和篩查雜合性GJB2基因突變仍強烈提示耳聾的遺傳因素GJB2基因突變檢測的意義：21病例：患兒語言發(fā)育不良，聽力檢查顯示重度感音性耳聾，2歲時于北京行電子耳蝸移植術，患兒父母及雙方家族內均無類似病例。病例：22測序證實純合性GJB2235delC，突變導致終止密碼子提前出現，使其蛋白產物大大短于正常產物。野生型GGGCCC純合235缺失C測序證實純合性GJB2235delC，突變導致終止密碼子23診斷結果提示：患兒的先天性耳聾是由于GJB2基因突變導致的。父母均為攜帶者，后代有25%的風險成為先天性耳聾患者。基因診斷結合產前診斷可以遴選出確定的耳聾胎兒以避免再次生育聾兒。診斷結果提示：24產前診斷：羊水檢測產前診斷：羊水檢測25產前診斷：羊絨毛膜檢測（CVS）產前診斷：羊絨毛膜檢測（CVS）26先天性或進行性耳聾中SLC26A4(PDS)基因突變的檢測和快速篩查先天性或進行性耳聾中SLC26A4(PDS)基因突變的檢測和27大前庭水管常合并耳蝸和（或）半規(guī)管畸形，如耳蝸

畸形、前庭池擴大、半規(guī)管壺腹擴大等。聽力下降呈進行性或波動性，與輕度的頭部外傷有密切的關系。大前庭水管常合并耳蝸和（或）半規(guī)管畸形，如耳蝸畸形、前庭池28PDS基因突變與散發(fā)性大前庭水管綜合征及先天性神經性耳聾聯系密切在東亞，5%的語前聾由PDS(SLC26A4)基因突變引起PDS基因突變與散發(fā)性大前庭水管綜合征及先天性神經性耳聾聯系29以下三張圖片來自一對同卵雙生姐妹，均患大前庭水管，具有中、重度聽力下降。以下三張圖片來自一對同卵雙生姐妹，均患大前庭水管，具有中、重30耳聾基因診斷和咨詢課件31耳聾基因診斷和咨詢課件32耳聾基因診斷和咨詢課件33基因診斷結果證實她們均具有PDSIVS7-2A-G突變，明確了其分子致病原因。野生型IVS7-2A突變型IVS7-2A-G基因診斷結果證實她們均具有PDSIVS7-234已完成的26例針對大前庭水管患者基因診斷在22例患者中發(fā)現PDS基因、純合突變、復合突變或雜合突變，提示這類患者中PDS可能的高突變率以及存在突變熱點。已完成的26例針對大前庭水管患者基因診斷在22例患者35PDS基因突變檢測的意義：配合或代替影象學（顳骨CT)明確耳聾的分子學病因或進行遠程診斷指導診斷明確患兒的日常行為及注意事項,提前注意甲狀腺異常情況適合于產前診斷和篩查PDS基因突變檢測的意義：36氨基糖甙抗生素致聾的線粒體基因突變的檢測和廣泛篩查氨基糖甙抗生素致聾的線粒體基因突變的檢測和廣泛篩查37氨基糖甙類抗生素種類（鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素及小諾霉素等）廣譜高效價格低廉應用廣泛嚴重的耳毒性副作用受損聽力難以逆轉解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心氨基糖甙類抗生素種類（鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素及38大部分氨基糖甙類抗生素致聾（AAID）家系為母系遺傳方式線粒體基因第1555位A→G均質性點突變與AAID關系密切單次劑量的氨基糖甙類藥物應用即可導致攜帶此突變個體的重度聽力損失（一針致聾！）解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心大部分氨基糖甙類抗生素致聾（AAID）家系為母系遺傳方式解放39我科收集的遺傳性耳聾家系中有40個母系遺傳耳聾家系攜帶mtDNAA1555G點突變解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心40據報道：上海地區(qū)的藥物性耳聾患者30%由A1555G突變引起美國：15%藥物性耳聾患者由A1555G突變引起陳觀明武漢（2000）：檢測66例藥物性耳聾患者中，14例有A1555G突變日本：估計3%門診耳聾患者攜帶A1555G突變據報道：上海地區(qū)的藥物性耳聾患者30%由A1555G突變引起41南京卜行寬教授報道一個特大母系遺傳家系：家系總人口507人耳聾患者136人31人輕度、18人中度、31人重度、56人極重度耳聾15人曾用過氨基糖甙類抗生素，均在3個月內發(fā)生極重度耳聾耳聾患者均攜帶A1555G和961insC突變南京卜行寬教授報道一個特大母系遺傳家系：42耳聾基因診斷和咨詢課件43mtDNA1555AtoG檢測試劑盒應用范圍：常規(guī)臨床檢測新生兒篩查孕期母親篩查耳聾患者群中的病因學檢查氨基糖甙類藥物應用前的預防性檢查耳聾基因診斷試劑盒解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心mtDNA1555AtoG檢測試劑盒應用范圍：耳聾基因44我們在500例耳聾患者中用此試劑盒進行了篩查，共發(fā)現60例患者攜帶mtDNAA1555G突變，患者多來自母系遺傳耳聾家系，其發(fā)病多與氨基糖甙類抗生素用藥史有關，提示這一篩查的預防性意義。我們在500例耳聾患者中用此試劑盒進行了篩查，共發(fā)現60例患45耳聾基因診斷和咨詢課件46遠程診斷：異地寄送DNA或外周血標本遠程診斷：異地寄送DNA或外周血標本47耳聾基因診斷和咨詢課件48外地病人自行送診程序電話電郵聯系當地醫(yī)院抽血診斷中心進行標本處理和分子診斷外地病人自行送診程序電話電郵聯系當地醫(yī)院抽血診斷中心進行標本49這一全新的診斷手段可以為聾啞兒童和家長明確病因、避免對所有可能病因的猜測和恐懼避免再次的傷害和有利于家庭成員的聽力保護可以進行有把握的再次生育指導治療和日常生活行為、預防并發(fā)癥對聾兒的下一代生育可以提前檢測和干預這一全新的診斷手段可以為聾啞兒童和家長50耳聾基因診斷對象：先天性耳聾雙側感音性耳聾大前庭水管綜合征患者有家族史的耳聾患者正常夫婦生育前預防性檢測耳聾基因診斷對象：51耳聾基因診斷程序：由醫(yī)生開耳聾基因診斷申請單（治療單、空白驗血單或心電圖申請單均可）由治療室護士記價，抽血送耳研所4層登記，標本處理第三天取常規(guī)檢測結果、一周取序列分析結果耳聾基因診斷程序：52GJB2235delC檢測（ApaI酶切法）GJB2235delC檢測（ApaI酶切法）53耳聾基因診斷和咨詢課件54耳聾基因診斷和咨詢課件55線粒體DNAA1555G突變采用試劑盒方法線粒體DNAA1555G突變采用試劑盒方法56導致大前庭水管的PDS突變檢測突變熱點區(qū)域測序：Exon7+8亞熱點區(qū)域測序：Exon19\15\10DHPLC全基因掃描導致大前庭水管的PDS突變檢測57如何閱讀理解診斷報告GJB2全基因序列分析：正常GJB2全基因序列分析未發(fā)現GJB2的突變和多態(tài)性。此結果基本排除了最常見的GJB2相關的先天性耳聾，但不能排除其它較為少見的遺傳性聾的可能如何閱讀理解診斷報告GJB2全基因序列分析：正常58如何閱讀理解診斷報告線粒體基因A1555G突變分析：陰性簡介此結果陰性排除了導致易感耳毒性耳聾個體的線粒體DNAA1555G突變，但不能排除導致易感耳毒性耳聾個體的線粒體DNA的其它較為罕見的突變，建議有明確耳毒性藥物使用史的耳聾患者、母系耳聾家系、有糖尿病病史的患者進一步行線粒體DNA其它位點的檢測。如何閱讀理解診斷報告線粒體基因A1555G突變分析：陰59PDS基因突變分析：未測簡介PDS基因突變與大前庭水管綜合征和耳蝸畸形有非常密切的關系，顳骨CT證實有上述情況者建議行此項檢測。如何閱讀理解診斷報告PDS基因突變分析：未測如何閱讀理解診斷報告60如何閱讀理解診斷報告GJB2235位點分析：純合性235delC簡介

純合性235delC提示其耳聾由GJB2基因突變導致，建議進一步進行GJB2基因測序以證實此結果，亦建議患者父母進行同樣檢測以確定傳遞模式并證實此項診斷。

如何閱讀理解診斷報告GJB2235位點分析：純合性23561如何閱讀理解診斷報告GJB2235位點分析：雜合性235delC簡介此結果在先天性耳聾患者強烈提示GJB2基因突變可能是耳聾的致病原因，建議進一步進行GJB2全基因測序以發(fā)現GJB2基因上其它可能導致耳聾的突變。如何閱讀理解診斷報告GJB2235位點分析：雜合性23562線粒體基因A1555G突變分析：陽性簡介此結果陽性顯示患者或個體攜帶有導致對耳毒性藥物敏感的線粒體DNAA1555G突變，本人及家族成員絕對禁止使用氨基糖甙類抗生素（鏈霉素Streptomycin、新霉素Neomycin、卡那霉素Kanamycin、慶大霉素Gentamycin、西索米星Sisomicin、奈替米星Netilmicin、阿米卡星Amikacin、核糖霉素landamycin、小諾米星Micronomicin等），建議進一步行測序檢測證實此項診斷，并建議家族成員進行相應檢測。如何閱讀理解診斷報告線粒體基因A1555G突變分析：陽性如何閱讀理解診斷報63如何閱讀理解診斷報告PDS基因突變分析：PDSIVS7-2A-G純合突變簡介PDS基因突變與大前庭水管綜合征和耳蝸畸形有非常密切的關系，PDSIVS7-2A-G純合突變是大前庭水管的致病原因。建議患者父母同時進行檢測并注意患者的甲狀腺功能情況。

如何閱讀理解診斷報告PDS基因突變分析：PDSIVS7-264基于基因診斷的遺傳咨詢家庭1：(散發(fā)性先天性耳聾）患兒胡**，2歲，先天性重度耳聾，基因檢測示純合GJB2299-300delAT突變。父母聽力正常，基因檢測均示雜合GJB2299-300delAT突變。咨詢要點：患者個體：明確診斷，指導治療父母：闡明遺傳模式和再生育風險整個家庭：所有成員可以受益于基因診斷和產前干預基于基因診斷的遺傳咨詢家庭1：(散發(fā)性先天性耳聾）咨詢要點：65家庭2：母系遺傳藥物性耳聾家系基因檢測結果示IV-5、IV-6及其母親攜帶mitoDNAA1555G突變，推算家系內存在21名攜帶者，除了三例死亡和五名發(fā)病者，其余13名應嚴格避免應用氨基糖甙類藥物。家庭2：母系遺傳藥物性耳聾家系66家庭3：大前庭水管綜合征患兒張*，波動性聽力下降，98年ABR閾值為R75、L65dB；2003年雙側均為100dB，父母聽力正常?；驒z測：患兒為IVS7-2A-G和IVS15+5G-A復合突變，父親為IVS15+5G-A突變攜帶者，母親為IVS7-2A-G突變攜帶者。咨詢要點：確定此病為遺傳性指導患兒治療和預防確定其再生育風險，告之可能由基因診斷獲得的益處和技術的限制家庭3：大前庭水管綜合征患兒張*，波動性聽力下降，98年A67家庭4：要求生育第二胎的聾兒家庭陳**：先天性耳聾，語言差，測聽示雙耳重度感音性聾。父母及雙方家庭無其他類似病例，母懷孕6個月?；驒z測：陳**、胎兒、父、母GJB2235delC和mitoDNAA1555G突變。GJB2全基因測序示陳**無任