小柴胡片質(zhì)量標準的薄層色譜定性鑒別

小柴胡湯是東漢張仲景的《傷寒論》。它由柴胡、黃甘草、黨參、甘草和半夏組成。用于外感病、邪犯少陽癥,癥見寒熱往來、胸脅苦滿、食欲不振、心煩喜嘔、口苦咽干等癥。目前,小柴胡片的質(zhì)量標準中有用薄層色譜法(TLC)鑒別黃芩和甘草。為了更好地控制小柴胡片的質(zhì)量,保證用藥安全有效,本試驗對方中的柴胡、黨參兩味中藥分別進行了薄層色譜定性鑒別,現(xiàn)報告如下。1材料和機器1.1試劑與儀器小柴胡片(廣東環(huán)球制藥有限公司,批號:110301);柴胡對照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號:0992-0301);黨參對照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號:121057-200303);乙醇(新鄉(xiāng)市三偉消毒試劑有限公司,分析純);乙酸乙酯(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司,分析純);丁酮(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司,分析純);甲酸(天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠,分析純);正丁醇(北京北化精細化學(xué)品有限責(zé)任公司,分析純);甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司,分析純);D101大孔吸附樹脂(上?？婆d商貿(mào)有限公司);聚酰胺(上海金瑞化工產(chǎn)品有限公司)。1.2儀器和檢測儀器HH-2電子恒溫水浴鍋(蘇州威爾實驗用品有限公司);CP114分析天平(奧豪斯儀器有限公司);硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠)。2方法和結(jié)果2.1柴胡tcl識別2.1.1對照藥材溶液取柴胡對照藥材1g,加水適量,煎煮1.5h,濾過,濾液濃縮至約10ml,加在聚酰胺柱(100~200目,4g,內(nèi)徑2cm,濕法裝柱)上,分別用水100ml和50%乙醇150ml洗脫,收集50%乙醇洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,作為對照藥材溶液。2.1.2供試品溶液的制備取小柴胡片2片,研細,加水20ml,攪拌使溶解,離心,取上清液,加在聚酰胺柱(100~200目,8g,內(nèi)徑2.5cm,濕法裝柱)上,分別用水、20%乙醇、50%乙醇各100ml洗脫,收集50%乙醇洗脫液,蒸干殘渣加甲醇1ml使溶解,作為供試品溶液。2.1.3缺乏正比溶液取自制缺柴胡的小柴胡片陰性樣品2片,研細,按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。2.1.4硫酸乙酯-甲醇法吸取供試品溶液、陰性對照溶液4μl與對照藥材溶液2μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(12∶2∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點(圖1),陰性對照液色譜相應(yīng)的位置無此斑點。2.2小柴胡圖像的tcl識別2.2.1對照藥材溶液的制備取黨參對照藥材粉末1g,加甲醇25ml,超聲處理30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水15ml使溶解,通過D101型大孔吸附樹脂(內(nèi)徑為2.5cm,柱高為10cm),用水50ml洗脫,棄去水液,再用50%乙醇50ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,制成對照藥材溶液。2.2.2試驗溶液2.2.3缺乏基本評價溶液取自制缺黨參的小柴胡片陰性樣品2片,研細,按“2.2.1”項下的制備方法制成陰性對照溶液。2.2.4硫酸乙酯-正丁醇法吸取供試品溶液、陰性對照溶液4μl與對照藥材溶液2μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-冰醋酸-乙酸乙酯-水(7∶1∶1∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在100℃加熱至斑點顯色清晰,置日光燈下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點或熒光斑點(圖2),陰性對照液無此斑點。3小柴胡片tlc鑒別在柴胡的TLC鑒別中,本試驗曾采用5%香草醛鹽酸溶液顯色,結(jié)果供試品溶液中斑點顯色不明顯。當改用5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液噴霧,熱風(fēng)吹至顯色時,供試品溶液中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色清晰斑點,效果較好。在黨參的TLC鑒別中,本文參照文獻方法分別以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)、甲苯-丙酮(9∶1)為展開劑,但展開效果均不理想。通過考察選擇正丁醇-冰醋酸-乙酸乙酯-水(7∶1∶1∶0.5)為展開劑,結(jié)果顯示,斑點均勻,展開分離效果較好。小柴胡片中的柴胡為方中君藥,柴胡性味苦,微寒,歸肝膽實經(jīng),有驅(qū)散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣之功效,用于治療取小柴胡片2片,研細,按2.2.1項下的制備方法制成供試品溶液。寒熱往來,胸滿肋痛,口苦耳聾,頭痛目眩、鎮(zhèn)