解讀《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》精選課件樣品的采集根據(jù)檢測項目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運輸?shù)臅r限和方法，按照臨床采血技術(shù)規(guī)范的要求操作，遵守生物安全要求。用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1-2h待血液凝固，血塊收縮后經(jīng)3000r/min離心15min，吸出血清備用。精選課件抗凝血的采集用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細胞備用。應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+/CD8+T淋巴細胞測定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉；HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用K3EDTA或枸櫞酸鈉。用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在4~8h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在24~48h內(nèi)分離血漿和血細胞。精選課件樣品保存用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2－8℃。用于抗原和核酸檢測的血漿和血細胞樣品應(yīng)凍存于-20℃以下，進行病毒RNA檢測的樣品如需保存3個月以上應(yīng)置于-80℃。用于CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過48h則不可檢測。艾滋病檢測篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送確證實驗室，篩查陰性樣品可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1~2個月。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。艾滋病檢測確證實驗室收到的篩查陽性樣品，無論確證結(jié)果任何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。精選課件篩查試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送

如需送上級實驗室進行復(fù)檢，需要核對身份，必須補充個人信息（姓名和身份證號碼）并同時填寫HIV抗體篩報告和復(fù)檢單送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室，或直接送確證實驗室復(fù)檢。（必要時采集第二份血樣）精選課件樣品的運送、運送條件用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送。用于CD4和CD8T淋巴細胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（18~25℃）或4℃（特殊要求時）運送。用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在-20℃以下運輸。

DBS樣品應(yīng)在室溫下（18~25℃）運送。每一件包裝的體積以不超過50ml為宜。嚴(yán)禁使用玻璃容器。運送血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。包裝采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)。精選課件HIV抗體檢測目的：監(jiān)測、診斷、及血液篩查的HIV抗體檢測要點：篩查試驗陽性不能出陽性報告；嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序；嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作；注意防止樣品間交叉污染。HIV抗體篩查試驗的方法

ELISA

快速檢測（RT）：明膠顆粒凝集試驗（PA）；斑點EIA或斑點ELISA（dot-EIA）；斑點免疫膠體金（膠體硒）快速試驗；艾滋病唾液檢測卡；其他。精選課件確證實驗檢測的流程方法：免疫印跡試驗（WB）條帶免疫試驗，放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）等。試劑選擇：使用HIV-1/2混合型試劑進行檢測。結(jié)果：陰性反應(yīng)，報告HIV抗體陰性（—）陽性反應(yīng)，報告HIV—1抗體陽性（+）不是陰性反應(yīng)，又不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告HIV抗體不確定（±）結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進展或呈陰性反應(yīng)，則報告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報告陽性；如隨訪期間帶型有進展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進展或稱陰性反應(yīng)則報告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。精選課件檢測信息的上報各級艾滋病檢測實驗室所在結(jié)構(gòu)每月應(yīng)填寫《HIV抗體檢測數(shù)及陽性人數(shù)統(tǒng)計報表》并于每月10日前完成網(wǎng)絡(luò)直報。未開展網(wǎng)絡(luò)直報的單位，由縣級疾病預(yù)防控制結(jié)構(gòu)收集信息后統(tǒng)一上報。精選課件質(zhì)量控制質(zhì)量控制具體內(nèi)容：指將質(zhì)控品和檢測標(biāo)本一起實驗操作，從質(zhì)控值了解分析實驗過程的質(zhì)量情況。為了便于觀測和概括，又使用了一些統(tǒng)計學(xué)方法進行歸納和分析。質(zhì)量控制貫穿實驗的整個過程實驗前的準(zhǔn)備實驗中的操作實驗后數(shù)據(jù)的整理精選課件內(nèi)部對照質(zhì)控血清指每個試劑盒內(nèi)廠方提供的一套陰性和陽性對照血清。外部對照質(zhì)控血清各級實驗室為了監(jiān)控每次檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及檢驗試劑盒批間差異而設(shè)置的一套陰性和陽性對照血清。精選課件質(zhì)控血清外部對照質(zhì)控血清的組成理想的外部對照應(yīng)該包括陽性對照、弱陽性對照、臨界值對照和陰性對照。但是目前各實驗室應(yīng)該在每次實驗時設(shè)置一個單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽性對照。這個弱陽性對照的值以設(shè)定在各試劑盒Cut-off值的2—3倍為宜。精選課件質(zhì)控血清外部對照質(zhì)控血清的來源和制備

—通過向有關(guān)機構(gòu)購買獲得

—通過實驗室制備獲得混合HIV抗體陽性或陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用0.2um生物濾膜過濾除菌后再進行56℃30分鐘加熱滅活處理.弱陽性對照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并經(jīng)標(biāo)定后得到.弱陽性對照的OD值以該試劑盒臨界值Cut-off的2~3倍為宜。精選課件外部對照質(zhì)控血清的保存

一次制備量應(yīng)該足夠本實驗室使用一年；均一、無菌；標(biāo)定后等量分裝，每份應(yīng)足夠一周實驗使用；分類作好標(biāo)記，使用不同顏色的標(biāo)簽；存放在—70℃，如無條件則存在非自動除霜的—20℃冰箱；一旦融解以后應(yīng)該存放在2-8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存。精選課件建立質(zhì)控圖質(zhì)控圖把檢驗性能數(shù)據(jù)與計算出的“控制線”進行比較的圖。質(zhì)控圖的構(gòu)成一中心橫線及其上、下各一或兩條平行的控制線，并有按時間順序填入的各質(zhì)控血清測定的數(shù)值。精選課件建立質(zhì)控圖參數(shù)算術(shù)平均值（X）代表一組S/CO值的平均值，為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著意義，應(yīng)該采用至少20次（天）所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計算出平均值。標(biāo)準(zhǔn)差（S）是描述樣本與均數(shù)之間離散程度的一個指標(biāo)，是與對照值的S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。變異系數(shù)（CV）是反映各次S/CO值相對于均值的離散程度的一個指標(biāo)，可以用于衡量被檢標(biāo)本檢測的重復(fù)性或精密度?？刂葡抻蓪嶒炇腋鶕?jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。精選課件建立質(zhì)量控制圖

關(guān)鍵是對控制限的選擇?！诔Ｒ?guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次或20次以上，獲得一組數(shù)據(jù)，求均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，20個數(shù)據(jù)中超出2S或3S的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除?！獙⒕岛蜆?biāo)準(zhǔn)差分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。每個質(zhì)控對照的OD值/Cut-off比值（S/CO，S為樣品A值，CO為Cut-off值）作縱座標(biāo)（Y軸），每一次（天）實驗作橫座標(biāo)（X軸）建立質(zhì)控圖

—從第21次起，每次檢測的質(zhì)控血清的結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。精選課件質(zhì)控圖的判定分析

質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率?？疾煸囼炏到y(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。要求：出現(xiàn)一次2S范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3S范圍的變化。連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2S范圍的變化。連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1S范圍的變化。連續(xù)10次結(jié)果都在1S范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點如果改用新批號試劑盒，必須重新制定質(zhì)控框架圖，并建議對新舊兩批試劑盒進行平行性試驗，平行性試驗包括外部對照質(zhì)控血清和前一批試劑盒中的內(nèi)部對照質(zhì)控血清。這種平行性試驗有利于質(zhì)量控制和分析。要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個數(shù)據(jù)，求均值和標(biāo)準(zhǔn)差，超出2S或3S的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。由專人負責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)量控制會，討論本月檢測的質(zhì)量控制情況，檢驗人員在每次檢驗之前，了解一個質(zhì)控圖的結(jié)果，做到心中有數(shù)。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。由于不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒所使用的HIV抗原的構(gòu)成以及使用比例不同，因此對同一標(biāo)本的反應(yīng)會有差異，表現(xiàn)在A值相差較大，對外部對照質(zhì)控血清結(jié)果的分析造成困難。使用新批號或使用不同廠家的試劑盒都必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。原則上，更換不同廠家生產(chǎn)的試劑盒后，結(jié)果偏離程度較大時，必須重新計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差并建立新的質(zhì)控圖。精選課件質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點發(fā)現(xiàn)全部對照值劇烈位移，立即報告室主管，分析原因是試劑盒質(zhì)量問題，立刻通知廠家。外部和內(nèi)部陰性對照質(zhì)控血清出現(xiàn)高值傾向，應(yīng)該注意試劑，技術(shù)或設(shè)備出現(xiàn)問題（如洗板機等）。實驗室配制新批次的外部對照質(zhì)控或變動外部對照質(zhì)控的值時，必須重新計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，建立新的質(zhì)控圖。操作者在測定質(zhì)控血清時，發(fā)現(xiàn)質(zhì)控血清數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫失控報告單，上交室負責(zé)人，由室負責(zé)人決定是否發(fā)出檢驗報告。精選課件變異系數(shù)（CV）分析變異系數(shù)（CV）反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度.在<20%區(qū)間可表示對照值處穩(wěn)定狀態(tài)，雖然對均值仍有一定的離散，但從標(biāo)準(zhǔn)差所規(guī)定的可信限而言，仍然可靠的。在不同的試劑盒對照之間持續(xù)出現(xiàn)高值CV（>20%），可以提示加樣量不一。校準(zhǔn)加樣器以及每次更換吸頭加樣可以減少CV值使對照值更趨一致。精選課件快速檢測質(zhì)控試劑內(nèi)對照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實驗操作全部完成并且實驗所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實驗完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗結(jié)果無效，樣品須重檢。外部質(zhì)控品對照可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗的外部質(zhì)控品。需做質(zhì)量控制的情況：更換試劑批號；更換檢測人員；更換包裝；每個檢測日；更換試劑廠家。精選課件提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視的情況：運輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊（產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄露或污染；不適宜的存放條件；保護包裝紙破損或污染；未達到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（陽性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）。建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于50份樣品，至少應(yīng)做2次質(zhì)控。精選課件生物危害人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL—2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行：

HIV抗體檢測（篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學(xué)檢測；

HIV核酸提取和檢測；

HIV陽性樣品的保存，包括全血、血清、血漿和其他組織（液）、核酸提取物。應(yīng)在符合Ⅲ級生物安全實驗室（BSL—3）要求的艾滋病檢測實驗室中進行：

HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其他需要應(yīng)用活病毒的研究工作；

HIV病毒株的保存。精選課件職業(yè)暴露原則及時處理原