血清CK及其同工酶測定

檢驗系生化血清CK及其同工酶測定

檢驗系生化1一、概述肌酸激酶（Creatinekinase，CK，EC2.7.3.2）全稱腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸轉(zhuǎn)移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之間磷酸轉(zhuǎn)移的可逆反應(yīng)。肌酸+ATP磷酸肌酸+ADP+H+CK一、概述肌酸激酶（Creatinekinase，CK，EC2偏堿pH有利于順向反應(yīng)進行，中性pH傾向逆向反應(yīng)，一般逆向反應(yīng)較順向反應(yīng)快2~6倍；Mg2+是CK的必需激活劑，但過量反而抑制；樣品宜用血清或肝素化血漿；標本應(yīng)避免嚴重溶血；血清中CK較不穩(wěn)定，室溫4h或4℃12h可使酶失活。偏堿pH有利于順向反應(yīng)進行，中性pH傾向逆向反應(yīng)，一般逆向反3二、CK測定方法比色法紫外分光光度法熒光法二、CK測定方法比色法4比色法利用順向反應(yīng)1、測磷法CrP在酸液中易水解成Cr及無機磷酸。（ATP與ADP在酸性條件下較穩(wěn)定）比色法利用順向反應(yīng)52、酶偶聯(lián)-丙酮酸測定法

肌酸+ATP磷酸肌酸+ADP

ADP+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸+ATP丙酮酸+2，4-二硝基苯肼丙酮酸-2，4-二硝基苯腙CK丙酮酸激酶2、酶偶聯(lián)-丙酮酸測定法CK丙酮酸激酶6☆順向反應(yīng)測定CK的底物較便宜；

☆測磷法的試劑較易得而穩(wěn)定；

☆丙酮酸激酶價格較貴，不易獲得；

☆順向反應(yīng)速度較慢，靈敏度較低。☆順向反應(yīng)測定CK的底物較便宜；

☆測磷法的試劑較易得而穩(wěn)定7利用逆向反應(yīng)CrP+ADPCr+ATPCr+雙乙酰+α-萘酚紅色化合物Mg2+作激活劑；半胱氨酸供給巰基；氫氧化鋇和硫酸鋅沉淀蛋白并終止反應(yīng)。CK利用逆向反應(yīng)CK8逆向反應(yīng)的速度較快，敏感性較高，成為目前國內(nèi)推薦的主要方法。必須用中性或偏堿的蛋白沉淀劑以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀劑中非酶性水解成Cr。逆向反應(yīng)的速度較快，敏感性較高，成為目前國內(nèi)推薦的主要方法。9紫外分光光度法多利用逆向反應(yīng)，是國際最常用方法CrP+ADPCr+ATPATP+GluADP+6-P-Glu6-P-Glu+NADP+6-P-GA+NADPH+H+

CK己糖激酶G-6-PD紫外分光光度法多利用逆向反應(yīng)，是國際最常用方法CK己糖激酶G10全部反應(yīng)最適pH為6.8~6.9；主要干擾因素①谷光甘肽還原酶②腺苷酸激酶全部反應(yīng)最適pH為6.8~6.9；11熒光法利用逆向反應(yīng)生成的Cr在強堿性溶液中與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生熒光復(fù)合物，測其熒光強度，經(jīng)與同樣處理的Cr標準管比較，可計算CK活力。優(yōu)點：快速、敏感，巰基化合物不產(chǎn)生干擾，試劑易得，操作條件易于掌握。缺點：需精密熒光分光光度計，不適宜基層單位使用。熒光法利用逆向反應(yīng)生成的Cr在強堿性溶液中與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生熒12酶偶聯(lián)-丙酮酸測定法步驟（順向反應(yīng)）空白標準測定H2O0.1血清0.1標準0.1酶試劑0.50.50.537℃，10minDNP0.50.50.537℃，15min0.4NNaOH444室溫5min，440nm比色酶偶聯(lián)-丙酮酸測定法步驟（順向反應(yīng)）空白標準測定H2O0.113