淺論妊娠高血壓綜合征患者血清中抗氧化物與胎盤(pán)Bax、Bcl【摘要】目的探討妊娠高血壓綜合征(PIH)患者外周血清中抗氧化物和胎盤(pán)組織細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平的關(guān)系。方法檢測(cè)68例PIH病人(PIH組)和25例正常孕婦(NLP組)血清中GSH-px、MDA、SOD活性,并用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)胎盤(pán)組織Bax、Bcl-2蛋白并進(jìn)行比較。結(jié)果PIH中、重度組血清GSH-px/MDA、SOD/MDA、Bcl-2/Bax比率明顯低于NLP組(P＜);PIH中、重度組胎盤(pán)組織細(xì)胞凋亡指數(shù)、Bax高于NLP組(P＜);各組P53蛋白均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。血清GSH-px/MDA、SOD/MDA與凋亡指數(shù)、Bcl-2/Bax呈正相關(guān)(P＜)。結(jié)論P(yáng)IH的發(fā)生與機(jī)體氧化和抗氧化平衡失調(diào)及與其引起的胎盤(pán)組織細(xì)胞凋亡增加有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】妊娠高血壓綜合征氧化和抗氧化平衡Bax蛋白P53蛋白

RelationshipBetweenSerumAntioxidantsandtheExpressionofBcl2、BaxApoptosisProteinofPlacentalTissueswith

PregnancyinducedHypertensionSyndrome

ofBasicMedicine,NingxiaMedicalCollege,Yinchuan750004;HealthCareHospitalforWomenandChildren,Yinchuan750001

Abstract:ObjectiveToexploretherelationshipbetweensuperoxidedismutase(SOD),glutathioneperoxidase(GSHpx)andmalondialdehyde(MDA)inperipheralvenousbloodofpatientsandtheexpressionofBcl2、Baxapoptosisproteinofplacentaltissueswithpregnancyinducedhypertensionsyndrome(PIH).MethodsTheactivityofSOD,GSHpxandcontentofMDAintheserumofperipheralbloodofnonpregnantwomen,normalpregnantwomenandPIHwomenweremeasuredandtheexpressionofBcl2,Baxwereassessedbyimmunolistochemicaldetection.ResultsTheratioofGSHpx/MDA、SOD/MDA、Bcl2/Baxinnormalpregnantwomenwassignificantlylowerthanthoseinnonpregnantwomen(P＜),apoptosisindex(AI)andtheexpressionofBaxinnormalpregnantwomenweresignificantlyhigherthanthoseinnonpregnantwomen(P＜)；thereweresignificantlypositivecorrelationintheratiobetweenGSHpx/MDA、SOD/MDAandBcl2/Bax、apoptosisindex().ConclusionThemechanismofPIHisassociatedwiththedisequilibriumofoxidation,antioxidationandapoptosisoverexpressionofplacentaltissuesinducedbyit.

Keywords:pregnancyinducedhypertension；disequilibriumofoxidationandantioxidation；Bax；P53

妊娠高血壓綜合征(pregnancy-inducedhypertension，PIH)是影響母兒圍生期發(fā)生率和死亡率的重要因素之一,其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。大量實(shí)驗(yàn)證明PIH患者胎盤(pán)組織凋亡增加［1］，細(xì)胞凋亡由一系列基因調(diào)控,其中促凋基因Bax和抑凋基因Bcl-2被認(rèn)為是非常重要的成員,Bcl-2/Bax的比率決定了細(xì)胞對(duì)刺激的敏感性。為此,本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PTH胎盤(pán)組織細(xì)胞的凋亡、凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2蛋白,以及PIH患者血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-px)活性及丙二醛(MDA)含量的變化,旨在探討SOD、GSH-px、MDA和Bax、Bcl-2的相關(guān)性及在PIH發(fā)病中的作用，為PIH的防治提供理論依據(jù)。

1對(duì)象與方法

研究對(duì)象

2003年11月至2005年4月銀川市婦幼保健院產(chǎn)科收治PIH患者68例，PIH診斷及分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)樂(lè)杰主編的《婦產(chǎn)科學(xué)》進(jìn)行［1］,按病情輕重分為輕、中、重PIH組，其中輕度28例，年齡(±)歲，平均孕周(±)周；中度20例，年齡(±)歲，平均孕周(±)周；重度20例，年齡(±)歲，平均孕周(±)周；隨機(jī)選取同期住院的血壓正常妊娠婦女25例作為對(duì)照組(NLP組)，年齡(±)歲。所有病例均無(wú)其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。兩組孕婦年齡、孕周及孕次、分娩方式比較,具有可比性。

方法

標(biāo)本采集：抽取被觀察者清晨空腹靜脈血6mL,妊娠高血壓綜合征組于治療前采血，肝素抗凝，離心,待測(cè)。胎盤(pán)娩出后,于胎盤(pán)母體面的四象限中心取1cm×1cm×1cm組織塊40g/L，生理鹽水漂洗,立即置于4%多聚甲醛(pH)中,固定24h(4℃)，常規(guī)石蠟包埋。

實(shí)驗(yàn)方法：①GSH-px活性測(cè)定采用酶偶聯(lián)法［2］;MDA含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法;SOD活性測(cè)定采用黃嘌呤氧化酶法,MDA和SOD試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

②Bcl-2、Bax的檢測(cè)以SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。蛋白表達(dá)指數(shù)［3］(proteinexpressionindex,PEI)=平均吸光度×陽(yáng)性細(xì)胞百分比×100。

③凋亡的胎盤(pán)組織半定量分析應(yīng)用改良的末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的帶熒光標(biāo)記法(TUNEL)測(cè)定［4］。凋亡細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)的比值×100即為凋亡指數(shù)(apoptosisindex,AI)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有測(cè)量數(shù)據(jù)采用prism進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，組間的兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)。

2結(jié)果

各組患者血清GSH-px、SOD活性和MDA含量測(cè)定結(jié)果

輕度PIH組與NLP組比較，GSH-px、SOD活性、MDA含量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞)，中、重度PIH組與NLP組比較各指標(biāo)間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜)，且與病情有關(guān),病情越重MDA水平增加越明顯，GSH-px、SOD下降越明顯,(P＜)，見(jiàn)表1。表1各組血清GSH-px、SOD活性和MDA水平測(cè)定結(jié)果的比較(略)

各組患者胎盤(pán)組織中Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)及細(xì)胞凋亡指數(shù)(表2)

輕度PIH組與NLP組比較Bcl-2、Bax、凋亡指數(shù)、Bcl-2/Bax指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞),而中、重度PIH組的Bcl-2的蛋白表達(dá)指數(shù)、Bax的蛋白表達(dá)指數(shù)、凋亡指數(shù)明顯高于NLP組(P＜)，Bcl-2/Bax明顯低于NLP組(P＜)。表2各組胎盤(pán)組織蛋白表達(dá)指數(shù)和Bcl-2與Bax比值的比較(略)

GSH-px、SOD、MDA與凋亡指數(shù)、Bcl-2/Bax的相關(guān)性分析

SOD/MDA及GSH-px/MDA與凋亡指數(shù)、Bcl-2/Bax存在著明顯的正相關(guān)關(guān)系(r=、；r=、,P＜)。

3討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,輕度PIH患者GSH-px、SOD活性增加，但和對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，主要是由于妊娠期間隨著新陳代謝的增強(qiáng),有氧代謝途徑產(chǎn)生的自由基增加;孕期胎盤(pán)的代謝功能旺盛,耗氧量增加,故有氧代謝產(chǎn)生的自由基增加，由此引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)也增強(qiáng),但人體存在著自由基產(chǎn)生與清除的酶系統(tǒng),二者處于平衡狀態(tài),故并未造成人體的嚴(yán)重?fù)p傷［5］。中、重度PIH患者血漿MDA水平明顯高于正常孕婦,而血漿SOD、GSH-px活性及SOD/MDA值明顯低于正常孕婦，表明中、重度PIH患者自由基的產(chǎn)生和清除處于不衡狀態(tài),氧化與抗氧化功能在更高水平上沒(méi)有達(dá)到平衡,機(jī)體明顯受到脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。推測(cè)PIH時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷可能是氧自由基所致。

已有研究表明［6］，生理狀態(tài)下細(xì)胞凋亡的主要基因分為兩大類(lèi):一類(lèi)為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因,如Bax;另一類(lèi)為抑制凋亡的基因,如Bcl-2、Bcl-2與Bax比值決定了細(xì)胞對(duì)凋亡刺激的敏感性和細(xì)胞生存與死亡的趨勢(shì)［7］。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和P53蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與NLP組比較,中度和重度PIH組胎盤(pán)組織的Bax蛋白表達(dá)明顯增加,而B(niǎo)cl-2蛋白表達(dá)變化不明顯,故Bcl-2與Bax比值下降，表明中、重度PIH患者胎盤(pán)組織細(xì)胞對(duì)凋亡刺激敏感。吳琦嫦等［8］對(duì)宮內(nèi)窘迫患者胎盤(pán)組織的研究表明，宮內(nèi)窘迫患者胎盤(pán)組織細(xì)胞凋亡可能是非p53依賴(lài)性的由Bax介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中，氧化應(yīng)激也可能是一個(gè)重要因素［9］。有研究表明ＳＯＤ、GSH-px水平的增高及自由基形成減少可延緩或抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，因而機(jī)體氧化能力下降,自由基的增多可增加凋亡的敏感性。本研究發(fā)現(xiàn)，GSH-px/MDA、SOD/MDA與凋亡指數(shù)、Bcl-2/Bax存在著明顯的正相關(guān)關(guān)系，表明PIH的形成可能與氧化應(yīng)激直接引起及調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2等有關(guān)。

綜上所述，PIH發(fā)生可能與氧化應(yīng)激有關(guān),機(jī)體過(guò)氧化引起機(jī)體自由基增加，自由基作為信號(hào)因子通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)啟動(dòng)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)加速了PIH的發(fā)生，但其確切機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。清除自由基及其產(chǎn)物,提高機(jī)體抗氧化能力，已成為預(yù)防和治療妊高征的新途徑。

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