生物化學：實驗七 牛乳中酪蛋白的制備_第1頁
生物化學：實驗七 牛乳中酪蛋白的制備_第2頁
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文檔簡介

實驗七牛乳中酪蛋白的制備目的要求：學習從牛乳中分離純化酪蛋白的原理和方法。實驗原理:牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白兩種蛋白質。其中酪蛋白占了牛乳蛋白質的80%。酪蛋白是白色、無味的物質。不溶于水、乙醇及有機溶劑，但溶于堿溶液。牛乳在pH4.7時酪蛋白等電聚沉后剩余的蛋白質統(tǒng)稱乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力強、分散性高，在乳中呈高分子狀態(tài)。本法利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH調至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質后便可得到純的酪蛋白。酪蛋白含量約為35g/L。試劑和器材一、試劑95%乙醇；無水乙醚；乙醇—乙醚混合液(V/V=1∶1)；冰乙酸。0.2mol/LpH4.7醋酸—醋酸鈉緩沖液3000mL：A液：稱取NaAc?3H2O54.44g，定容至2000mL。B液：稱取優(yōu)級純醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸鈉緩沖液3000mL。二、材料牛奶制品。三、器材低速離心機，精密pH試紙或酸度計，水浴鍋，燒杯，溫度計，天平。操作方法1．將25mL牛奶加熱至40℃。在攪拌下慢慢加入預熱至40將上述懸浮液冷卻至室溫。離心15min(3000r/min)。棄去清液，得酪蛋白粗制品。2．用等體積水洗沉淀三次，離心10min(3000r/min)，棄去上清液。3．在沉淀中加入約10mL乙醇，攪拌片刻，離心10min(3000r/min)棄上清。4．用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次；最后用乙醚洗沉淀2次，2mL/管。5．將沉淀從離心管轉移出來，攤開在表面皿上，風干；得酪蛋白純品。6．準確稱重，計算酪蛋白含量（g/100mL牛乳）,并和理論含量為3.5g

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