紫烏頭中二生物堿的分離

紫草素，又名紫草素和獨(dú)木，是毛科一年生植物，主要分布在云南北部和四川西南部，生長在海拔2400-2200米的山區(qū)。該植物常被誤定為馬爾山烏頭(A.delavayi)。從50年代起,朱任宏等便開始對(duì)大理產(chǎn)紫烏頭的化學(xué)成分進(jìn)行研究,從中分離和鑒定出delavaconitine和yunaconitine。前者的藥理研究表明,有明顯的局部麻醉作用和一定的鎮(zhèn)痛效果。楊崇仁等從鶴慶產(chǎn)紫烏頭中分離出一種新生物堿——scopaline。最近,王珂等用薄層分析紫烏頭的化學(xué)成分,除yunaconitine外,薄層還顯示有4個(gè)生物堿,但均未分離鑒定。值得指出的是,王鋒鵬等研究的“紫烏頭”,據(jù)楊親二考證,并非紫烏頭,而是蒼山烏頭(A,contortum)。本文報(bào)道的是從巧家產(chǎn)紫烏頭的全草中分離出5個(gè)二萜生物堿,通過光諧分析分別鑒定為;deacetylheterophylloidine(30mg/1kg),heterophylloidine(100mg/1kg),songorine,20mg/1kg),talatisamine,2.7g/1kg)和14-acetyltalatisamine150mg/1kg)。其中作為天然產(chǎn)物還未見報(bào)道,均為首次從該植物中分離得到,而上述文獻(xiàn)報(bào)道的化合物卻未發(fā)現(xiàn),說明不同產(chǎn)地的紫烏頭其化學(xué)成分差異甚大,在利用和開發(fā)這一藥用植物資源時(shí)應(yīng)考慮。為無色針狀結(jié)晶,mp.106—108℃,[α]-60°。其分子式由HRMS確定為C21H27NO3。IR有羥基(3300cm-1),羰基(1725cm-1)和雙鍵(3071,1648cm-1)吸收。1HNMR提示分子中存在一個(gè)角甲基(δ1.09,3H,S),一個(gè)氮甲基(δ2.47,3H,S)和一個(gè)環(huán)外雙鍵(δ4.78,4.96,各1H,br.S)。13CNMR說明有2個(gè)羰基(δ208.0,210.5)。因?yàn)榉肿佑?個(gè)不飽和度,而只有上述3個(gè)不飽和鍵,所以應(yīng)為六環(huán)化合物。根據(jù)光譜特征和生源關(guān)系,該化合物應(yīng)為海替定型C20-二萜生物堿。這類化合物的C(6)均為羰基,另一個(gè)羰基由CD譜在305nm處出現(xiàn)的強(qiáng)負(fù)Cotton效應(yīng)提示在C(13)位。從IR和分子式得知,分子中還有一個(gè)羰基,其偕氫1HNMR信號(hào)(δ3.95,m,,2-βH)提示,該羥基取代在C(2)位。上述分析得出,的結(jié)構(gòu)為deacetylheterophylloidine。13CNMR中的21條峰對(duì)應(yīng)于21個(gè)碳原子,其相應(yīng)化學(xué)位移與此結(jié)構(gòu)完全吻合(見表1)。該化合物曾由heterophylloidine水解得到,但沒有光譜數(shù)據(jù)的報(bào)道。的MS,1HNMR與heterophylloidine的文獻(xiàn)值相符。13CNMR中C(6)羰基峰移到δ185,且峰形變寬,這是由于部分成鹽為半縮酮式,它與羰基形式快速平衡的結(jié)果導(dǎo)致該信號(hào)向商場(chǎng)移動(dòng)。將其放置一月后再測(cè)13CNMR,該信號(hào)移動(dòng)到δ177,這是有更多的部分與溶劑中的微量酸成鹽的結(jié)果,同時(shí)也說明確有半縮酮式的存在。其它碳的化學(xué)位移與文獻(xiàn)比較,除C(19)等少數(shù)幾個(gè)碳的位移值由于部分成鹽的影響而稍有不同外其余的均相同,由此證明就是heterophylloidine。一、巧家縣藥山自然保護(hù)區(qū)紫草烏樣品于1989年10月采自云南省巧家縣藥山自然保護(hù)區(qū)。植物標(biāo)本由蘭州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系趙汝能教授和中國科學(xué)院昆明植物研究所楊親二博士鑒定。二、粗堿的提取取全草干重1kg粉碎,95%乙醇室溫浸提三次共35天,減壓回收乙醇后得浸膏110g。以2%H2SO4溶液溶解、過濾,濾液經(jīng)乙醚萃取脫脂后用濃氨水堿化至pH9,氯仿萃取得粗堿7g,含量0.7%。取粗堿7g,經(jīng)中性氧化鋁柱層析(乙醚和乙醚:甲醇梯度洗脫),氧化鋁H低壓柱層析(石油醚:丙酮梯度洗脫)和硅膠制備薄層層析(環(huán)已烷:丙酮:二乙胺——8:1:1展開)分離純化得堿0mg,堿100mg,堿20mg,堿2.7g和堿150mg。三、晶圓Deacetylheterophylloidine():白色針狀結(jié)晶,mp.106—108℃,(CHCl3)。C21H27NO3,HRMSm/z:341、2015(M+,計(jì)算值:341,1991)EIMS(%)m/z:341(M+,100),326(M++CH3,80),324(M+-OH,27).IR(涂膜)cm-1:3300(OH),3071,1648(C=CH2),1725(C=O),2931,1568,1462,1401,1358,1284,1209,1064。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ:1.09(3H,S,4-CH3),2.47(3H,S,NCH3),3.95(1H,m,Hz,2-βH),4.78,4.96(各1H,br.s,C=CH2)。13CNMR及DEPT見表1。Heterophylloidine():無定形,C23H29NO4,EIMS(%)m/z:3.83(M+,85),368(M+-CH3,75),355(20),340(M+-COCH3,25),324(M+-OCOCH3,100),294(25),282(15)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:1.50(3H,S,4-CH3),2.07(3H,S,COCH3),2.57(3H,S,NCH3)4.72,4.99(各1H,br.S,C=CH2),5.16(1H,m,Hz,2-βH).13CNMR及DEPT見表1。Songorine():微量,未結(jié)晶,C22H31NO3,EIMS(%)m/z:357(M+,100),340(M+-OH,30),328(25)。1HNMR(80MHz,CDCl3)δ:0.79(3H,S,4-CH3)1.16(3H)t,J=7Hz,NCH2C),3.82(1H,m,1-βH),4.35(1H,t,J=4Hz,15-αH),5.18,5.26(各1H,br.s,C=CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值相同。與標(biāo)樣作TLC對(duì)照,Rf值相同。Talatisamine():無色塊晶,mp.138—140℃,C2—H83NO5,EIMS(%)m/z:421(M+,5),406(M+-CH3,3),390(M+-OCH3,100),1HNMR(80MHz)δ:1.05(3H,t,J=7Hz,NCH2CH3),3.26,3.29,3.34(各3H,S,3×OCH3),4.15(1H,t,J=5Hz,14-βH),3.58(1H,S,OH),4.73(1H,d,J=5Hz,OH),上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)相符。與標(biāo)樣的混合熔點(diǎn)不下降,Rf值相同。14-Acetyltalaisamine():無定形,C26H41NO6,EIMS(%)m/z:463(M+,5),448(M+-CH3,7),432(M+-OCH3,100).1HNMR(80MHz,CDCl3)δ:0.98(3H,t,J=7Hz,NCH2CH3),1.96(3H,S,COCH3),3.14,3.18,3.21(各3H,S,3×OCH3),4.73(1H,t,J=5Hz,14-βH).13CNMR(20MHz,CDCl3)δ:1:85.8,2:26.3,3:32.8,4:38.6,5:45.5,6:25.0,7:46.3,8:73.7,9:46.1,10: