第五節(jié)核酸的某些理化性質(zhì)及

核酸研究常用技術(shù)一、核酸的紫外吸收（λmax=260nm）二、核酸的變性三、核酸的復(fù)性和分子雜交四、核酸的沉降性質(zhì)核酸具有酸性；粘度大；由于嘌呤堿和嘧啶堿有共軛雙鍵，能吸收紫外光，最大吸收峰為260nm。故常用紫外分光光度法測(cè)定核酸的含量。一、DNA的紫外吸收二、DNA的變性在理化因素作用下，DNA雙螺旋的兩條互補(bǔ)鏈松散而分開(kāi)成為單鏈，從而導(dǎo)致DNA的理化性質(zhì)及生物學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變，這種現(xiàn)象稱為DNA的變性(denaturation)。引起DNA變性的因素主要有：①高溫，②強(qiáng)酸強(qiáng)堿，③有機(jī)溶劑等。

DNA的變性過(guò)程加熱部分雙螺旋解開(kāi)無(wú)規(guī)則線團(tuán)鏈內(nèi)堿基配對(duì)①增色效應(yīng)(hyperchromiceffect)：指DNA變性后對(duì)260nm紫外光的光吸收度增加的現(xiàn)象；②粘度降低③生物學(xué)功能喪失或改變。DNA變性后的性質(zhì)改變DNA的紫外吸收光譜天然DNA變性DNA核苷酸總吸收值1232202402602800.10.20.30.4波長(zhǎng)（nm）光吸收123加熱DNA溶液，使其對(duì)260nm紫外光的吸收度突然增加，達(dá)到其最大值一半時(shí)的溫度，就是DNA的變性溫度（融解溫度，meltingtemperature,Tm）。DNA的變性溫度Tm的高低與DNA分子中G+C的含量有關(guān)，G+C的含量越高，則Tm越高。核酸的變性、復(fù)性和雜交變性（加熱）探針雜交（緩慢冷卻）復(fù)性（緩慢冷卻）

變性：在物理、化學(xué)因素影響下，DNA堿基對(duì)間的氫鍵斷裂，雙螺旋解開(kāi)，這是一個(gè)是躍變過(guò)程，伴有A260增加（增色效應(yīng)）,DNA的功能喪失。復(fù)性：在一定條件下，變性DNA單鏈間堿基重新配對(duì)恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)，伴有A260減?。p色效應(yīng)）,DNA的功能恢復(fù)。三、DNA的復(fù)性與分子雜交將熱變性后的DNA溶液緩慢冷卻，在低于變性溫度約25～30℃的條件下保溫一段時(shí)間（退火annealing），則變性的兩條單鏈DNA可以重新互補(bǔ)而形成原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu)并恢復(fù)原有的性質(zhì)。將變性DNA經(jīng)退火處理，使其重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過(guò)程，稱為DNA的復(fù)性。

兩條來(lái)源不同的單鏈核酸（DNA或RNA），只要它們有大致相同的互補(bǔ)堿基順序，經(jīng)退火處理即可復(fù)性，形成新的雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象稱為核酸的分子雜交(hybridization)。核酸雜交可以是DNA-DNA，也可以是DNA-RNA雜交。不同來(lái)源的，具有大致相同互補(bǔ)堿基順序的核酸片段稱為同源順序(homologoussequence)。DNA-DNA雜交雙鏈分子變性復(fù)性不同來(lái)源的DNA分子DNA-DNA雜交示意圖DNA-RNA雜交示意圖在核酸雜交分析過(guò)程中，常將已知順序的核酸片段用放射性同位素或生物素進(jìn)行標(biāo)記。帶有一定標(biāo)記的已知順序的核酸片段稱為探針（probe）。利用核酸的分子雜交，可以確定或?qū)ふ也煌锓N中具有同源順序的DNA或RNA片段。常用的核酸分子雜交技術(shù)有：原位雜交、斑點(diǎn)雜交、Southern雜交及Northern雜交等。Southern印跡法DNA分子限制片段限制性酶切割瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標(biāo)記DNA探針雜交放射自顯影帶有DNA片段的凝膠凝膠濾膜用緩沖液轉(zhuǎn)移DNA吸附有DNA片段的膜

四、

核酸的沉降性質(zhì)（sedimentationcoefficient）沉降系數(shù)：生物大分子在單位離心力場(chǎng)作用下的沉降速度。即沉降系數(shù)是微顆粒在離心力場(chǎng)的作用下，從靜止?fàn)顟B(tài)到達(dá)極限速度所需要的時(shí)間。

沉降系數(shù)