六月雪中的5-乙?；?6-羥基-2-異丙烯苯并呋喃

劉涌雪系白牙科植物分布在中國東南和中部省份。具有潤風健康和清熱解毒的功效，主要治療感冒、黃酮類肝炎、腎盂腎炎、關節(jié)炎、月經(jīng)中斷和白帶等癥狀。根據(jù)藥理學研究，6月份的雪水提取物對四氯化碳、硫代氨胺和洗熱痛產(chǎn)生的肝臟損傷具有顯著的保護作用。六月雪乙酸乙酯具有明顯的抑制作用，屬于低毒或無菌藥物。六月份的雪不同部位的提取溶液具有腫瘤作用。適用于補水和補水的輔助癥狀，以及由水和廢水引起的水分補充。濁證、關節(jié)疼痛、黃疸、腹瀉、帶下、傷口、濕疹、粘液、飲料等。目前對白馬骨屬植物化學成分的系統(tǒng)研究報道很少,據(jù)文獻報道僅有β-谷甾醇、齊墩果酸及其乙?；?而六月雪是從植物天然資源中開發(fā)出來的藥物,屬于天然藥物,是藥物的一個重要的組成部分.天然藥物之所以能防病治病,其物質基礎在于所含的有效成分.然而一種天然藥物往往含有結構性質不相同的多種成分.為了尋找六月雪實驗部分藥理的物質基礎,進一步開發(fā)利用該植物資源,本文對六月雪的化學成分進行了研究,從中分離得到5個化合物,分別鑒定為5-乙酰基-6-羥基-2-異丙烯苯并呋喃(5-Acetyl-6-hydroxy-2-isopropenylbenzofuran,1);5-乙?；?6-羥基-2-丙酮苯并呋喃(5-Acetyl-6-hydroxy-2-acetonepenylbenzofuran,2);鄰苯二甲酸二乙酯(DiethylPhthalate,3);β-谷甾醇(β-sitosterol,4);豆甾醇(Stigmasterol,5),其中化合物(1),(2)和(3)為首次從該植物中分得.1實驗部分1.1紅外光譜分析所用儀器:X-4型雙目鏡顯微熔點測定儀(溫度未校正);ThermoNicoletNEXUS470FT-IR型紅外光譜儀(KBr壓片);BRUKERAVANCE500型核磁共振波譜儀;SHIMADZUGCMS-QP5050A質譜儀.所用試劑均為分析純.柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)和薄層色譜硅膠(煙臺化工研究所),SephadexLH-20(Pharmacia公司).藥材采于廣西南寧市藥材市場,經(jīng)鑒定為六月雪.標本保存在本實驗室.1.2c組各部位浸膏的制備六月雪全株10kg粉碎后,用甲醇冷提3次,每次5d.濾出浸提液,減壓濃縮得到浸膏(412.5g).浸膏用1000mL熱水分散后依次用石油醚(1000mL×5),乙酸乙酯(1000mL×5),正丁醇(1000mL×5)萃取,再減壓濃縮分別得到石油醚部位浸膏(59g),乙酸乙酯部位浸膏(103g),正丁醇部位浸膏(35g)以及水部位浸膏(200g).石油醚部位用乙酸乙酯溶解,用200～300目的硅膠柱色譜分離,石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫,選擇梯度(石油醚%=總石油醚/總洗脫液)為100%,90%,80%,70%,60%,40%,20%,0%,分別等量500mL收集洗脫液,洗脫液經(jīng)減壓濃縮,TLC分析后合并.化合物1以石油醚%為90%的溶劑洗脫并反復重結晶得到的純品,然后再用300～400目硅膠柱進一步純化反復重結晶而得的純產(chǎn)物.化合物4以石油醚%為80%的溶劑洗脫并反復重結晶得到的純樣品.化合物5以石油醚%為70%的溶劑洗脫并合并,然后再用300～400目加壓硅膠柱層析進一步純化,以石油醚∶乙酸乙酯=3∶1的溶劑洗脫,再多次反復結晶所得.化合物2,3是乙酸乙酯部位浸膏經(jīng)過溶解后過200～300目硅膠柱并以洗脫剃度為石油醚∶氯仿=100∶0;5∶1;2∶1;1∶1;1∶2;1∶5;1∶20;0∶100;然后接著氯仿∶甲醇=50∶1;20∶1;10∶1;5∶1;2∶1;1;1;0∶1洗脫,其中化合物3是以石油醚∶氯仿=2∶1洗脫得到的粘稠淺黃色液體,這黃色液體再經(jīng)過多次薄層加壓硅膠柱層析后再經(jīng)過SephadexLH-2反復除雜質后所得.化合物2是以石油醚∶氯仿=1∶1的溶劑比例洗脫,多次重結晶所得.其中化合物1(500mg),4(150.6mg),5(15.6mg).乙酸乙酯部位分得化合物2(35.6mg),3(7.5mg).2化合物結構鑒定化合物1黃色針狀晶體,mp121～122℃(氯仿),m/z216,分子量為216,根據(jù)1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)可以推測其分子式為C13H12O3;IR(KBr):3444,1787,1652,1467,1374,1329,1288,1263,1141,890,832,795,659;1H-NMR(500MHz):2.19(3H,s,H-12),2.20(3H,s,H-14),5.77(1H,s,α-H-11),6.56(1H,s,β-H-11),6.99(1H,s,-OH),7.29(1H,s,H-3),7.91(1H,s,H-7),12.54(1H,s,H-4);13C-NMR(100Hz):19.156(C-12),26.715(C-14),99.427(C-3),102.371(C-7),113.68(C-11),116.861(C-9),121.887(C-5),123.450(C-4),132.139(C-10),157.918(C-2),159.568(C-6),161.598(C-8),203.848(C-13).化合物1波譜數(shù)據(jù)與文獻一致,故鑒定化合物1為5-乙?；?6-羥基-2-異丙烯苯并呋喃(5-Acetyl-6-hydroxy-2-isopropenylbenzofuran).結構如圖1所示.化合物2黃色晶體,mp144-145℃(氯仿),m/z218,分子量為218,根據(jù)1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)可以推測其分子式為C12H10O4,同時根據(jù)不飽和度公式可以得出有8個不飽和鍵,再結合1H-NMR(500MHz):2.57(3H,s,H-11),2.75(3H,s,H-13),4.70(1H,s,-OH),7.07(1H,s,H-7),7.75(1H,s,H-3),8.47(1H,s,H-4);13C-NMR(100Hz):28.842(C-11),29.55(C-13),102.88(C-3),118.28(C-7),122.42(C-9),123.78(C-4),131.86(C-5),157.28(C-8),163.91(C-6),167.01(C-2),192.26(C-10),208.64(C-12)數(shù)據(jù),并參考文獻可以推斷其結構是5-乙?；?6-羥基-2-丙酮苯并呋喃(5-Acetyl-6-hydroxy-2-acetonepenylbenzofuran).結構如圖2所示.化合物3無色液體,EIMSm/z:221,193,177,149,121,93,65,分子量為222,結合1HNMR,13CNMR可以推測其分子式是C12H14O4,(500MHz):1.335(6H,t,2CH3,J=7.2),4.336(4H,m,2CH2,J=7.23),7.594(2H,t,H-3,6,J=1.38,2.33,6.79).7.725(1H,d,H-4,5,J=1.64,2.89,6.69),13C-NMR(100Hz):12.998(2CH3),61.396(2CH2),128.46(C-3,6),130.91(C-1,2),132.18(C-4,5),167.82(2C=O),由以上數(shù)據(jù)可以推測這化合物是對稱結構且含一個苯環(huán)結構和兩個碳氧雙鍵結構,并參照相關文獻可以鑒定其為鄰苯二甲酸二乙酯.結構如圖3所示.化合物4無色針狀結晶(石油醚-丙酮):mp139～140℃,m/z414,熔點,Rf值和IR與β-谷甾醇一致,紅外光譜與β-谷甾醇標準譜圖一致,兩者混合熔點不下降,通過檢索NIST庫,參照文獻鑒別出為β-谷甾醇,故確證化合物IX為β-谷甾醇.化合物5白色針狀晶體,mp153～