物質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十八胰島素對(duì)血糖含量的影響實(shí)驗(yàn)十九鄰甲苯胺法測定血糖含量【實(shí)驗(yàn)原理】胰島素是調(diào)節(jié)血糖水平的重要激素，它能增加肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的通透性，促進(jìn)葡萄糖進(jìn)入這些細(xì)胞，加速葡萄糖的氧化分解，促進(jìn)糖原合成和轉(zhuǎn)變成其他物質(zhì)，從而使血糖水平下降。水浴加熱到100攝氏度左右時(shí)，葡萄糖在濃酸溶液中脫水生成羥甲基呋喃甲醛（羥甲基康醛），此生成物可以與鄰甲苯胺縮合成藍(lán)綠色化合物，根據(jù)其顏色深淺通過分光度比色法測定其含量。【實(shí)驗(yàn)步驟】取兔采血標(biāo)本分離血清 測定未注射胰島素時(shí)的血糖含量 注射胰島素 兩小時(shí)之后采血標(biāo)本，依照前述步驟測定注射胰島素之后的血糖含量[鄰甲苯胺法測定血糖含量]【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】試劑（ml）測定管測定管（加胰島素后）標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清0.10.1——糖標(biāo)準(zhǔn)——0.1—蒸餾水———0.1鄰甲苯胺試劑4.04.04.04.0OD1.1480.3460.6730.000血糖濃度（mmol/L）9.482.860.560.0加入試劑后，混勻，沸水浴加熱10min，取出立即置于冷水中冷卻。以空白管調(diào)零，在630nm波長處測各管吸光度值，并按照下式計(jì)算血糖濃度：測定管【結(jié)果分析】正常空腹血糖濃度為3.9-5.6mmol/L。此次試驗(yàn)存在較大誤差。加入胰島素后的測定管所得血糖濃度比未加入胰島素的測定管的血糖濃度低，說明胰島素是調(diào)節(jié)血糖水平的胰島β細(xì)胞分泌的一種蛋白類激素。它能增加肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞膜對(duì)葡萄糖的通透性，促進(jìn)葡萄糖進(jìn)入這些細(xì)胞，加速葡萄糖的氧化分解，促進(jìn)糖原合成和轉(zhuǎn)變成其他物質(zhì)，反映到血糖水平上是使血糖水平下降。加入胰島素后，胰島素促進(jìn)了細(xì)胞對(duì)葡萄糖的利用，加速了葡萄糖的氧化分解和轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，并且抑制了非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化為葡萄糖，從而降低了血糖的濃度，使家兔血糖水平下降。測定管中測得的血糖濃度高出正常值，可能原因有如下幾個(gè)方面：加入鄰苯甲胺試劑不足4.0ml，致使溶液體積減少，血漿濃度增大?；蛘咚∴彵郊装啡芤翰患儯芤罕旧頋舛绕?。取血漿體積偏大，使溶液混合后血漿濃度偏高。沸水浴加熱后，并沒有冷卻充分，使溶液溫度偏高，測得吸光度值偏大。進(jìn)行吸光度測量時(shí)，操作不當(dāng)，手指觸碰比色池使吸光物質(zhì)增多，吸光度增大。進(jìn)行吸光度測量時(shí)，由于配置溶液體積有限，對(duì)比色池潤洗不充分，使比色池吸光能力增大，使結(jié)果偏大。吸光度值超過1時(shí)，測得的吸光度不準(zhǔn)確，誤差較大。使用比色池過程中有溶液在壁上而未擦凈。實(shí)驗(yàn)過程中，移液管的量程選取不當(dāng)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在誤差。實(shí)驗(yàn)過程中，洗刷試管后倒立放置可能被污染，移液管倒置，使用吸耳球時(shí)出現(xiàn)部分蒸餾水吸進(jìn)吸耳球，也是實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)該注意和避免的。實(shí)驗(yàn)二十糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定【實(shí)驗(yàn)原理】將酵母液在一定介質(zhì)中（適宜的pH，必要的金屬離子等）進(jìn)行保溫，在酵母液中酶體系的作用下，糖進(jìn)行酵解反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到生成二分子磷酸丙糖時(shí)，加入一碘乙酸可使酶失去活性，酵解反應(yīng)就停在磷酸丙糖階段。然后加入硫酸肼保護(hù)磷酸丙糖，使磷酸丙糖積累，進(jìn)而與2，4-二硝基苯肼反應(yīng)生成苯腙，苯腙在堿性溶液中呈紫紅色。pH7.4磷酸鹽緩沖液可以為糖酵解提供適宜的pH值和金屬離子；一碘乙酸可以使3-磷酸甘油醛脫氫酶失活，酵解反應(yīng)停留在磷酸丙糖階段；硫酸肼為穩(wěn)定劑，使其不發(fā)生分解反應(yīng)；10%三氯乙酸溶液是強(qiáng)酸，可以使糖酵解過程中參與的所有酶都失活，使糖酵解過程停止。第一次加入的1mol/LNaOH溶液可以使磷酸丙糖去磷酸，生成的顏色比較穩(wěn)定?！緦?shí)驗(yàn)過程】酵母混懸液制備糖酵解反應(yīng)記錄結(jié)果【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】試劑（ml）管號(hào)123pH7.4磷酸鹽緩沖液2.02.02.0一碘乙酸0.50.5—硫酸肼0.50.5—10%CCl3COOH溶液1.0——酵母液4.04.04.0蒸餾水—1.02.0混勻，在37℃恒溫水浴中保溫30min一碘乙酸——0.5硫酸肼——0.510%CCl3COOH溶液—1.01.0蒸餾水2.01.0—混勻，靜置10分鐘，3000r/min，離心10min，再取試管，對(duì)號(hào)按下表操作123上清液0.50.50.51mol/LNaOH溶液0.50.50.5混勻，室溫放置10min2,4-二硝基苯肼0.50.50.51mol/LNaOH溶液3.53.53.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果反應(yīng)程度不反應(yīng)半反應(yīng)全反應(yīng)顏色深淺較淺最深最淺【結(jié)果分析】此次試驗(yàn)比較成功。1、結(jié)果分析①1號(hào)試管中，三氯乙酸使酵母液失活。但是失活過程需要一定時(shí)間，所以有一小部分葡萄糖進(jìn)行了糖酵解，生成少量磷酸丙糖，與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)顯色，顏色較淺。②2號(hào)試管中，最初未加入三氯乙酸，酵母液有活性，但是加入了一碘乙酸，使3-磷酸甘油醛脫氫酶失活，使糖酵解反應(yīng)停留在磷酸丙糖階段，并加入硫酸肼保護(hù)磷酸丙糖，所以磷酸丙糖大量積累，在加入2，4-二硝基苯肼后發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色最深。③3號(hào)試管中，一碘乙酸和三氯乙酸都未加入，糖酵解反應(yīng)順利進(jìn)行，溶液中幾乎不含磷酸丙糖，所以在加入2,4-二硝基苯肼后顯色反應(yīng)不明顯，顏色最淺。2、誤差分析①溶液震蕩混合不均勻，且進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室只取上層溶液，可能使測定結(jié)果偏低。②進(jìn)行離心操作時(shí)，操作不當(dāng)，使溶液濺出，配平時(shí)加入其他溶液，使溶液濃度降低，反應(yīng)結(jié)果偏低，整體顏色不深。③進(jìn)行離心前的配平過程中，四個(gè)試管質(zhì)量和重心可能有一定偏差，套管中有原本就有的固體和液體雜志，致使離心不充分。另外在離心過程中，多組同學(xué)共同進(jìn)行配平，可能導(dǎo)致離心出現(xiàn)問題。④在震蕩過程中可能存在震蕩不夠均勻以及溶液濺出或者混合的情況。實(shí)驗(yàn)二十二血清脂類含量測定【實(shí)驗(yàn)原理】膽固醇酯酶（CEH）可以把膽固醇酯水解為膽固醇和游離脂肪酸（FFA），膽固醇又在在膽固醇氧化酶（COD）的作用下氧化成Δ4-膽甾烯酮和H2O2。H2O2經(jīng)過氧化物酶（POD）催化氫與4-氨基安替比林和酚（4-AAP）反應(yīng)，生成紅色的醌亞胺，其顏色深淺與膽固醇的含量成正比，在500nm波長處測定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)管比較可計(jì)算出血清膽固醇的含量。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】加入物測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清（μl）10——膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液（μl）—10—蒸餾水（μl）——10酶應(yīng)用液（μl）100010001000吸光度0.3090.2830.000膽固醇濃度（mmol/L）5.645.170.00混勻后，37℃水浴保溫15min，在500nm波長處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。并按照下式計(jì)算結(jié)果（已知：膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液濃度為5.17mmol/L）。CHO【結(jié)果分析】血清中膽固醇的正常范圍是3.10-5.70mmol/L,測得結(jié)果為5.64mmol/L，在正常范圍之內(nèi)，試驗(yàn)較成功，誤差較小。測得的膽固醇含量在正常值的上界，可能出現(xiàn)誤差的原因：加入的酶應(yīng)用液較少，使血清濃度相對(duì)偏大，測得的結(jié)果稍大。吸光度值測量時(shí)，對(duì)比色池潤洗不充分，吸光度值稍大，結(jié)果稍大。分組測定吸光度，可能出現(xiàn)不同樣本的數(shù)據(jù)誤差。注射槍有損壞，導(dǎo)致可能溶液量取不準(zhǔn)。用注射槍注射血清時(shí)打到管壁上，可能導(dǎo)致血清的濃度偏低。下次應(yīng)注意直接打到管底。整體回顧與分析改進(jìn)部分相對(duì)于第一次實(shí)驗(yàn)，本組注重了同一試劑由單人負(fù)責(zé)滴加的