感咳雙清分散片的制備工藝研究

黃鼠尾是嘴唇科植物，是黃色虎杖類抗生疾病的干燥生根，苦，性寒，黃鼠尾甾醇是其有效成分之一。它與普通荷花和皇室植物（burm.f.）一起干燥，苦，性寒，荷葉蓮是其指標(biāo)素成分之一[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明,黃芩苷有清熱、抑菌、降壓、鎮(zhèn)靜、利尿、抗炎、抗變態(tài)等活性,臨床上常用于治療上呼吸道感染、肝炎等〔2〕;穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎、抗病毒、解熱、抗腫瘤、抗糖尿病、降血壓等作用,可用于治療上呼吸道感染、病毒性肺炎、支氣管炎、扁桃體炎等〔3〕。二者配伍制得的感咳雙清膠囊,具有清熱解毒、抗炎、抗病毒等功效。感咳雙清膠囊臨床治療效果良好,特別是在呼吸道感染方面,但依然存在以下問(wèn)題。膠囊用藥后起效較慢,生物利用度低,不能適應(yīng)急性感染病人希望藥物速效的要求;近年來(lái)人口老齡化趨勢(shì)加劇,老年人吞咽能力下降,膠囊劑口服順應(yīng)性差,在一定程度上限制了其應(yīng)用范圍。故需將感咳雙清膠囊制成易于服用、吸收和分布較快、百姓信賴的劑型。而分散片則能符合上述要求,藥效成分黃芩苷和穿心蓮內(nèi)酯均難溶于水的性質(zhì)也適合制成分散片,故將感咳雙清膠囊改劑型為分散片劑。1藥品、試劑與儀器DP30A單沖壓片機(jī)(北京國(guó)藥龍立科技有限公司);JJ200型精密電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠);PYS-20型片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器廠);DZF-6050型真空干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司);LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司);ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天大天發(fā)科技有限公司)。黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110716-200509);黃芩苷提取物(四川省玉鑫藥業(yè)有限公司,批號(hào):100102,黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)約80%);穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(四川省玉鑫藥業(yè)有限公司,批號(hào):120812);羧甲基淀粉鈉(CMS-Na,藥用級(jí),四川翰華藥用輔料有限公司,批號(hào):20081064);交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(PVPP,藥用級(jí),安徽山河藥用輔料股份有限公司,批號(hào):121009);微晶纖維素(MCC,藥用級(jí),成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20101027);低取代羥丙基纖維素(L-HPC,藥用級(jí),上海厚誠(chéng)精細(xì)化工有限公司);乳糖(成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20101012);淀粉(成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20100531);無(wú)水硫酸鈣(CaSO4,成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20100908);PVPK-30(成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20121213);無(wú)水乙醇(成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20120909);十二烷基硫酸鈉(SDS,成都市科龍化工試劑廠,批號(hào):20130915)。2方法和結(jié)果2.1在處方中，添加額外的添加劑和破解劑的方法2.1.1統(tǒng)計(jì)分散片劑中各種崩潰劑和填充劑的使用頻率2.1.2填充劑類型的選擇2.1.3類型選擇2.1.4微粉膠的應(yīng)用方法2.1.5選擇粘合劑的原因2.2混合材料的設(shè)計(jì)2.2.1確定因素的范圍2.2.2各因素從方差分析的結(jié)果中可看出,分散均勻度指標(biāo)的二次模型P值等于0.0001(P<0.01),說(shuō)明模型有顯著性差異。選擇3分量中心多項(xiàng)式回歸擬合崩解時(shí)間這一指標(biāo),Y=304.56X1+96.28X2+65.94X3-465.73X1X2-221.61X1X3-51.63X2X3-755.61X1X2X3。微粉硅膠X1、L-HPCX2與硫酸鈣X3交互作用對(duì)崩解時(shí)間影響的曲面圖與等值線圖見圖2。用軟件的最優(yōu)化功能(optimization),設(shè)定各組分的變化范圍,然后設(shè)定所期望的響應(yīng)值,軟件運(yùn)行后,從隨機(jī)組合開始進(jìn)行預(yù)測(cè),直到目標(biāo)響應(yīng)值。給出了1組達(dá)到或接近目標(biāo)響應(yīng)值的1個(gè)組合。最優(yōu)組合為微粉硅膠4.1%,L-HPC11.3%,硫酸鈣22.1%。按優(yōu)化后的配方進(jìn)行3批驗(yàn)證,崩解時(shí)間的均值為(48±1)s。2.3處方和規(guī)章制度的確定2.4重量測(cè)定2.4.1層析條件2.4.2對(duì)照溶液的制備2.4.3樣品溶液的制備2.4.4關(guān)于專業(yè)研究2.4.5精密度測(cè)試2.4.6關(guān)于線性關(guān)系的研究2.4.7測(cè)量值2.5溶解度測(cè)定3制劑處方的崩解規(guī)律及其用量急性呼吸道感染是臨床上最常見的疾病之一,其中90%由病毒感染引起,細(xì)菌感染多繼發(fā)于病毒感染之后,造成病情加重,病毒感染初期及時(shí)有效地抑制病毒復(fù)制與傳播,對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸具有重要意義?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),黃芩苷在體內(nèi)外均有明顯的抗病毒作用,可能與其抑制病毒復(fù)制和保護(hù)宿主細(xì)胞有關(guān);黃芩苷還可以通過(guò)干擾花生四烯酸的代謝通路、抑制核因子的活性以及細(xì)胞因子的分泌、釋放而發(fā)揮抗炎作用〔8〕。穿心蓮內(nèi)酯是NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路的部分抑制劑,上述通路均與炎癥反應(yīng)有關(guān)〔9〕。黃芩苷與穿心蓮內(nèi)酯相結(jié)合,不僅能抑制病毒復(fù)制,減慢病毒繁殖速度,而且能調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng),直接清除病毒。由溶出結(jié)果可知,該實(shí)驗(yàn)制得的感咳雙清分散片符合要求。在填充劑選擇上,乳糖雖壓縮成形性較好,但不利于崩解;MCC作填充劑,片劑極易受溫濕度的影響;以硫酸鈣為填充劑,各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求,且分散片容易制備,受環(huán)境影響小,故選硫酸鈣為填充劑。崩解劑L-HPC是一種多孔性的白色不規(guī)則顆粒或粉末,具有較大的表面積,吸水性優(yōu)良,遇水溶脹而不溶解,其毛糙的表面結(jié)構(gòu)與藥粉和顆粒之間有較大的鑲嵌作用,可提高片劑的硬度和光潔度〔10〕。分散片能否快速有效潤(rùn)濕是崩解劑發(fā)揮崩解作用的關(guān)鍵,針對(duì)本處方中難溶性的原料,結(jié)合制粒過(guò)程難易及粒子質(zhì)量,選擇2%PVP的60%乙醇溶液作黏合劑制粒,PVP具有親水性,壓片后水分易滲入,片劑易潤(rùn)濕而崩解,且有利于藥物的溶出。微粉硅膠用于研磨改性,可增大原料藥的比表面積與孔隙度,利于水分的浸潤(rùn)、吸收,從而加速分散片的崩解。黃芩苷是由黃芩素與一分子葡萄糖醛酸結(jié)合形成的苷類化合物,黃芩素的化學(xué)名稱為5,6,7-三羥基黃酮。黃酮類苷元分子中引入羥基,能增大在水中的溶解度;黃酮類化合物的羥基糖苷化后,水溶度相應(yīng)增大。穿心蓮內(nèi)酯是一種二萜內(nèi)酯類化合物,二萜化合物的骨架由4個(gè)異戊二烯單位構(gòu)成,該結(jié)構(gòu)平面性強(qiáng),分子與分子間排列緊密,分子間引力較大,故難溶于水。由上述分析可知,黃芩苷在水中具有一定的溶解性,而穿心蓮內(nèi)酯幾乎不溶。因此,黃芩苷在SDS溶出介質(zhì)中易溶出,穿心蓮內(nèi)酯則較慢,該結(jié)果與溶出曲線相符。課題組前期通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)公開文獻(xiàn)的查詢,收集了28個(gè)分散片的制劑處方,并對(duì)其輔料應(yīng)用規(guī)律進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。各種崩解劑、填充劑的使用頻率見圖1。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知,最常用的填充劑有MCC、乳糖、硫酸鈣;PVPP、L-HPC、CMS-Na在崩解劑中使用頻率較高。參照感咳雙清膠囊的制劑處方(黃芩苷50%、穿心蓮內(nèi)酯12.5%),分別使用MCC、乳糖、硫酸鈣為填充劑,與黃芩苷、穿心蓮內(nèi)酯以3∶4∶1的比例混合,用2%PVP的60%乙醇制粒,55~60℃干燥,整粒,壓制成片,片重0.3g,硬度約為50~60N,測(cè)定其崩解時(shí)間,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。從分析結(jié)果可知,硫酸鈣作填充劑時(shí)片劑崩解時(shí)間最短,故選擇硫酸鈣作填充劑。《藥用輔料學(xué)》〔4〕中規(guī)定CMS-Na的用量一般為2%~6%,L-HPC的用量一般為5%,在實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中,將崩解劑用量經(jīng)驗(yàn)性地提高至10%。按表2取相應(yīng)量的原輔料,混勻后用2%PVP的60%乙醇濕法制粒,55~60℃干燥,整粒,壓片,每片0.3g,硬度約為50~60N,測(cè)定其崩解時(shí)間,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,單用L-HPC片劑的崩解時(shí)間最短,故選L-HPC為崩解劑。課題組在前期研究的基礎(chǔ)上〔5,6〕發(fā)現(xiàn),微粉硅膠對(duì)原料藥研磨改性后,由于微粉硅膠比表面積及孔隙體積大,微粉硅膠包覆在原料藥表面,原料藥的比表面積及孔隙體積隨之增大,潤(rùn)濕性與吸水性增加,制得的片劑崩解時(shí)間降低。本實(shí)驗(yàn)同樣采用微粉硅膠研磨改性的方式制備片劑,與微粉硅膠直接加入制備的片劑比較崩解時(shí)間,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,研磨改性方式優(yōu)于直接加入方式。該實(shí)驗(yàn)中分別對(duì)水、30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇、2%PVP的60%乙醇、4%PVP的60%乙醇進(jìn)行了篩選,水、30%乙醇制得的顆粒硬度較大,90%乙醇制得的顆粒較散,60%乙醇、2%PVP的60%乙醇、4%PVP的60%乙醇用作黏合劑,制粒難易相當(dāng),制得的顆粒狀態(tài)相當(dāng),故比較三組的崩解時(shí)間,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果見表4。從結(jié)果可知,2%PVP的60%乙醇組的崩解時(shí)間最短?；炝显O(shè)計(jì)主要是研究各試驗(yàn)因子的不同比例對(duì)反映變量的關(guān)系,與混料的總量無(wú)關(guān);本研究對(duì)各輔料在片劑中的比例進(jìn)行了限制,其形式為:z1+z2+…+zp=1,0≤Li≤zi≤Ui≤1,i=1,2,…,P〔7〕。本實(shí)驗(yàn)混料試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及范圍見表5,旨在通過(guò)D-最優(yōu)混料設(shè)計(jì)(D-Optimalmixturedesign)對(duì)處方中微粉硅膠、L-HPC、硫酸鈣的用量配比進(jìn)行篩選。在表5中,規(guī)定了微粉硅膠、L-HPC、硫酸鈣在處方中的上下限;混料設(shè)計(jì)時(shí)需把輔料空間的37.5%比作100%,得出微粉硅膠、L-HPC、硫酸鈣在混料設(shè)計(jì)中的上下限。混料試驗(yàn)安排及結(jié)果見表6。取黃芩苷150g、穿心蓮內(nèi)酯37.5g,混勻,加微粉硅12.3g研磨改性3min,再加入L-HPC33.9g,硫酸鈣66.3g,研勻,用2%PVP的60%乙醇溶液作黏合劑濕法制粒,過(guò)20目篩,55~60℃干燥,整粒后壓片即得,片重約0.3g,制成1000片。十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的Kromasil色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉(用磷酸調(diào)pH值為2.7)(45∶55)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm,流速為1.0mL/min。精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品6.25mg及在60℃減壓干燥4h的黃芩苷對(duì)照品25mg于50mL量瓶中,加甲醇溶解稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液。取感咳雙清分散片10片,精密稱定,研細(xì);取感咳雙清膠囊10粒,精密稱定其內(nèi)容物,研勻;分別取上述感咳雙清分散片及膠囊研勻后的粉末約0.3g(3份),精密稱定,置100mL量瓶中,加甲醇90mL,超聲處理30min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻;取上述溶液2mL于25mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,采用“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖。見圖3。精密吸取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得黃芩苷RSD為0.87%,穿心蓮內(nèi)酯RSD為0.85%。其儀器精密度符合要求。精密吸取對(duì)照品溶液1.02.0、4.0、5.0、8.0、10.0mL,分別置于25mL量瓶中,加甲醇稀釋到刻度,搖勻,作為系列對(duì)照品溶液分別吸取上述6份對(duì)照品溶液各10μL,按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得黃芩苷的回歸方程為Y1=21466X1+150000,(r1=0.9995),其濃度在20~200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;穿心蓮內(nèi)酯的回歸方程為Y2=22941X2-8481.7,(r2=0.9996),其濃度在5~50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,測(cè)得相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量,結(jié)果感咳雙清膠囊中黃芩苷的含量為(135.9±10.9)mg/粒,穿心蓮內(nèi)酯的含量為(30.69±0.54