微波萃取法提取姜酚的研究

生姜是姜科植物的新鮮根莖，多年生草本植物。生姜有健胃、發(fā)汗、驅(qū)風的功效,具有一定保健作用。生姜中的辛辣成分中主要有姜酚、姜烯酚和姜酮等成分,其中6-姜酚具有鎮(zhèn)吐、抗菌、抗氧化、抗血小板凝聚等多方面的藥理作用,是生姜的主要有效成分之一。目前生姜有效成分的提取方法主要有溫浸取法、回流提取法等,這些傳統(tǒng)的提取方法存在著提取時間長、操作麻煩、能耗大等缺點。而近年來迅速發(fā)展起來的微波萃取技術(shù)具有選擇性高、操作時間短、有效成分溶出快速等顯著特點。本文以6-姜酚為指標成分,采用微波萃取技術(shù)提取生姜中的有效成分,通過正交試驗法確定最佳提取工藝,為生姜的進一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。1酶處理設(shè)備Waters2487高效液相色譜儀,2487紫外檢測器,Breeze色譜工作站,MDS-6微波消解萃取儀(上海新儀微波化學科技有限公司),1004型電子天平(上海天平儀器廠),高速藥材粉碎機(浙江金華華盛實業(yè)有限公司),BC-R501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海貝凱生物化工設(shè)備有限公司)等。鮮姜(市場上購得),6-姜酚對照品(天津中新藥業(yè)集團股份有限公司,批號Y-070730-6JF-M),乙醇、乙酸乙酯、丙酮、磷酸均為分析純,甲醇為色譜純,水為超純水。2方法和結(jié)果2.1hplc法測定了6-生姜的含量2.1.1流動相aufsDiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm);流動相為甲醇-1%磷酸(V/V=66:34);流速:0.5mL/min;檢測波長:280nm;靈敏度:0.5AUFS;進樣量:20μL。理論塔板數(shù)以6-姜酚計不低于5000。2.1.2對照溶液的制備精密稱取6-姜酚對照品300mg,置于250mL的容量瓶中,加甲醇溶解,定容至刻度,搖勻,即得1.2mg/mL。2.1.3對照品溶液的制備分別精密量取對照品溶液一定量,分別用流動相配制成一系列濃度為24、30、48、60、120、240μg/mL的對照品溶液,進樣,進樣量為20μL,測定。以峰面積(y)對濃度(x)繪制回歸曲線,經(jīng)回歸分析,得回歸方程:y=35160x+49313,R2=0.9998,線性范圍為24~240μg/mL。2.1.4供試品溶液的制備精密稱取1g鮮姜樣品,置于萃取罐中,加入一定量溶劑后萃取一定時間,萃取后所得的濾液用甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,并定容至刻度,搖勻即得供試品溶液。進樣前用0.45μm的微孔濾膜過濾除雜。2.1.5測量分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀,測定。2.2萃取溶劑的選擇稱取5份鮮姜樣品各1g,分別置于萃取罐中,分別加入65%乙醇、80%乙醇、95%乙醇,乙酸乙酯及丙酮各10mL,在250W、120KPa的條件下萃取3min,萃取后所得的濾液分別用甲醇溶解轉(zhuǎn)移并定容至10mL。用HPLC法測定不同溶劑萃取液中6-姜酚的含量,結(jié)果表明:95%乙醇萃取液中6-姜酚的含量最高,故選擇95%乙醇為萃取溶劑。2.3正交試驗設(shè)計以6-姜酚為考核指標,經(jīng)反復單因素試驗,選取影響6-姜酚提取效率的3個主要因素:料液比(A)、提取時間(B)和提取次數(shù)(C)為3因素,每個因素取3水平進行正交設(shè)計試驗,因素水平見表1,正交試驗結(jié)果和方差分析分別見表2、表3。表3的方差分析結(jié)果表明,因素A對試驗結(jié)果有極顯著的影響,因素B、C、D對結(jié)果無顯著影響,確定最佳條件為A3B1C1D1,即95%的乙醇提取鮮姜,料液比為1:10(g/mL),提取時間為1min,提取次數(shù)為1次。2.4提取率和rsd值按2.3確定的工藝條件制備3批樣品,結(jié)果3批樣品中6-姜酚的提取率分別為0.1123%、0.1169%和0.1189%,平均提取率為0.1160%,RSD值為2.92%,提取方法準確可靠。說明該工藝方法穩(wěn)定可行。2.5不同提取方法對于鮮姜的提取效果的影響采用回流提取法提取鮮姜,同樣采用95%的乙醇作為提取溶劑,通過正交試驗確定最佳提取工藝,并與微波萃取法進行比較,結(jié)果見表4。結(jié)果表明:微波萃取法和回流提取法提取鮮姜,提取得到的6-姜酚的含量是相近的,但是用微波萃取法得到的生姜提取物中6-姜酚的純度很高,而采用回流提取法提取所用的時間長、效率低、操作麻煩,得到的生姜提取物中6-姜酚的純度很低,雜質(zhì)多。說明微波萃取法在提取效率和節(jié)能方面優(yōu)于回流提取法。3萃取效率與節(jié)約能源確定了微波萃取法提取鮮姜有效成分6-姜酚的提取工藝。通過比較微波萃取法和回流提取法提取鮮姜有效成分,可以說明微波萃取法具有穿透力強、選擇性高、萃取效率高等顯著特點,這在實際生產(chǎn)過程中對節(jié)約能源和時間具有重大意義。因此微波萃取法在天然藥物有效成分的提取分離方面有著廣闊的前景。由于微波萃取法是利用物質(zhì)