農殘檢測常用方法技術要點安徽省農產品質量安全檢測中心農業(yè)部農產品質量安全監(jiān)督檢驗測試中心（合肥）★農產品質量安全檢測技術系列之《農產品質量安全檢測技術培訓系列之主要內容速測方法3準確定性定量檢測法4當前常用檢測方法2前言1《農產品質量安全檢測技術培訓系列之以前農殘檢測方法的頒布：國家標準化管理委員會頒布國家標準（GB）;農業(yè)部頒布行業(yè)標準（NY）;國家進出口商品檢驗檢疫總局頒布行業(yè)標準，編號為SN。已頒布標準截至目前，已頒布的農產品和食品農藥殘留檢測方法標準共有390多個。其中：國家標準92個，農業(yè)行業(yè)標準35個，商檢行業(yè)標準約270個。前言《農產品質量安全檢測技術培訓系列之根據2009年6月1日實施的《中華人民共和國食品安全法》第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉及食品安全的標準（八個方面），統(tǒng)一由國務院衛(wèi)生行政部門部制定和頒布，國務院標準化行政部門提供國家標準編號。對現行的食用農產品質量安全標準、食品衛(wèi)生標準、食品質量標準和有關食品的行業(yè)標準中強制執(zhí)行的標準予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標準。農殘檢測方法標準全部統(tǒng)一為食品安全國家標準。前言《農產品質量安全檢測技術培訓系列之一、當前常用檢測方法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之NY/T761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》QuEChERSMethod（美國農業(yè)部農業(yè)研究服務中心）修訂方法NY/T761-2008、GB/T19648-2006《水果和蔬菜中500種農藥及相關化學品殘留的測定氣相色譜-質譜法》、GB/T20769-2008《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法》等方法糅合在一起的實施細則2.準確定性定量檢測法一、當前常用檢測方法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法1．快速檢測程序試樣檢測

陰性陽性復測（兩次以上）陰性陽性根據市場規(guī)定處理準確定量定性分析《農產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法

GB/T5009.199-2003NY/T448-2001適用范圍

蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）

適用葉菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除蘿卜、茭白等)方法速測卡法(紙片法)和酶抑制率法(分光光度法)酶抑制率法(分光光度法)波長412nm410±3nm酶乙酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）（3min吸光度變化值＞0.3，4℃冰箱保存不超過4天）丁酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）3min吸光度變化值0.4—0.8之間底物硫代乙酰膽堿（蒸餾水溶解，4℃冰箱保存不超過2周）碘化硫代丁酰膽堿（BTCI）（用pH8磷酸緩沖液溶解）顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氫鈉緩沖液溶液，4℃冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）緩沖液溶解步驟取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜果取表皮帶肉，剪成1cm左右見方碎片。取樣1g置于小燒杯內，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出并靜置3-5分鐘；于小試管內分別加入2.5mL樣本提取液、100uL酶液、100uL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上，加入100uL底物，應立即倒入儀器比色皿中，記錄3min吸光度變化值。取2g切碎的樣本（非葉菜類取4g）放入提取瓶內，加入20mL緩沖液，振蕩1-2min，倒出并靜置3-5分鐘；于小試管內分別加入50uL酶液、3mL樣本提取液、50uL顯色劑，于37-38℃下放置30min后分別加入50uL底物，倒入比色皿中，用儀器測定。結果抑制率≥50%：陽性（陽性樣品需要重復檢測2次以上，若不合格,用色譜、質譜等進一步定性定量分析）抑制率≥70%：陽性（陽性樣品應有2次以上的重復檢測，若不合格,用色譜、質譜等進一步定性定量分析）備注1、當溫度低于37℃時，酶反應速度放慢，加入酶液和顯色劑后反應時間應該延長，延長時間的確定，應以空白對照測試3min吸光度變化值＞0.3方可進行下一步操作。2、3min吸光度變化值＜0.3原因：①酶的活性不夠；②酶的活性太低。3、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。1、樣品檢測放置時間與空白的時間應該一致。2、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪磷等農藥不太靈敏，檢出濃度均在10mg/kg以上?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法2．結果計算抑制率（%）=

抑制率：酶被抑制的程度△Ac

—對照組3min后與3min前吸光值之差;△As

—樣本3min后與3min前吸光值之差?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法3．注意事項2011年首屆全省農產品質量安全檢測技術人員大比武現場操作評分細則（農殘速測類）

(2011年)中對取樣部位、處理方法等內容進行詳細的分項打分，這些打分項都是平時檢測中需要注意的地方。適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質，易導致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）；農藥：有機磷和氨基甲酸酯類。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴格按標準執(zhí)行。建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結果可能存在影響。一批上機樣品同時檢測，共用一個對照。檢測前一定要檢查酶液活性（3min吸光度變化值＞0.3）；酶液反復解凍最多不超過兩次,否則會影響酶活性?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法4．如何看待農殘快速測定方法何為快速檢測方法？

指檢測速度相對較快、便于現場篩查的檢測方法。其主要適合于定性和半定量測定，檢測準確度相對要差一些。法律地位

《中華人民共和國農產品質量安全法》第三十六條規(guī)定“……采用國務院農業(yè)行政主管部門會同有關部門認定的快速檢測方法進行農產品質量安全監(jiān)督抽查檢測，被抽查人對檢測結果有異議的，可以自收到檢測結果時起四小時內申請復檢。復檢不得采用快速檢測方法?！?/p>

《農產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法5．農殘速測與色譜、質譜等方法的結果比較時間：從2005年至2007年。項目：農業(yè)部開展的省份間農產品質量安全例行監(jiān)測互查。要求：承擔任務的37個部級中心分別用農殘速測進行初步篩查，并把所有樣品用NY/T761等方法進行色譜、質譜定量檢測。目的：想驗證速測與色譜檢測的相關性，如果有相關性，就可以先用速測初步篩查，然后把陽性（超標的）樣品再用色譜等方法準確定量，那樣可以大大減少工作量。結論：速測結果和色譜等定量檢測結果幾乎沒有任何相關性。說白了就是速測超標的，色譜檢測不出來，速測不超標的，色譜可能會超標。因為沒有什么相關性，農業(yè)部在省部級檢測中心這個層級最終導致放棄速測方法?！铩锼?，速測僅僅是法律認可的一項工作，不要較真，如被檢方有異議，更不能拿速測陽性結果進行處罰和仲裁?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之二、速測方法6．為什么采用農殘快速檢測法

（非官方解釋——最實在的理解）①鮮活農產品不宜長時間保存，快速檢測方法克服了當前所有準確定量方法（色譜、質譜方法等）檢測周期過長的問題?！緯r限性考慮】②我國研究院所和各地市針對特殊樣品，采用酶抑制法取得了與準確定量方法（色譜、質譜方法等）一致性結果?！舅^的科學依據】③快速檢測方法是經過農業(yè)部會同有關部門認定發(fā)布的，經法律認可的方法，具有權威性和統(tǒng)一性（不過可靠性談不上）?！痉梢罁竣芸焖贆z測方法所需設備簡單，易掌握，平時運營成本相對較低，選用該法主要是從我國從業(yè)人員素質、經濟狀況的國情出發(fā)來考慮的（不可能要求大家都去買質譜、色譜等設備）?！痉椒ń洕浴⒉倏匦浴竣菝髦焖贆z測方法準確度不高，選用該法，主要是在縣級、鄉(xiāng)鎮(zhèn)等一級進行普及，讓經營戶、老百姓發(fā)現有人在抓農產品質量安全，更主要的是起到震懾作用?！菊饝刈饔谩俊掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之【案例】河南省鄭州市農殘快速檢測網絡《農產品質量安全檢測技術培訓系列之【案例】河南省鄭州市農殘快速檢測網絡《農產品質量安全檢測技術培訓系列之三、準確定性定量檢測法1．基本步驟：檢測前工作準備提取凈化、濃縮定容標準溶液配制和測定結果計算《農產品質量安全檢測技術培訓系列之三、準確定性定量檢測法2．提取條件的優(yōu)化：QuEChERS方法選擇單一乙腈為提取溶劑。含水量低或含糖量高的樣品應加入一定量的水后再進行提取，以提高提取效率。乙腈對N-三鹵甲硫基殺菌劑類農藥，具有降解作用，如克菌丹、抑菌靈等；通過加入1%的醋酸，調節(jié)pH值，能夠抑制上述農藥的分解。《農產品質量安全檢測技術培訓系列之三、準確定性定量檢測法3．鹽析：鹽析劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；鹽析劑能與水結合使游離水分子減少，減少了農藥在水相中的溶解度；鹽析劑能減少有機溶劑在水中的溶解度；鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之三、準確定性定量檢測法4．脫水劑的選擇：無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高3倍。無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進農藥的萃取。無機鹽加入量（g）乙腈中的水分（加入前，%）乙腈中的水分（加入后，%）NaCl2g/27mL276.0Na2SO40.8g/4mL63.9MgSO40.8g/4mL60.6《農產品質量安全檢測技術培訓系列之三、準確定性定量檢測法5．凈化劑的選擇：PSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質干擾；主要用來消除各種有機酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了減少儀器的維護，往往在PSA的基礎上加C18凈化。PSA可去除90％以上的脂肪酸和50％左右的色素。GCB可去除90％以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有10％左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯(lián)合使用。但用量要適當，否則會吸附一些平面結構的農藥，影響回收率，如六氯苯、百菌清等。凈化劑去雜種類PSA糖、有機酸、色素等C18油脂、非極性干擾物等GCB色素、甾醇、非極性干擾物等《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法1：NY/T761-2008方法名稱及來源：《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》NY/T761-2008。農藥種類和個數：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥等共104種。使用儀器：GC、LC?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之檢測步驟：加入2mL丙酮丙酮定容至5.0mLGC檢測（FPD）加入2mL正己烷5mL丙酮＋正己烷(10＋90)淋洗，重復一次依次5mL丙酮+正己烷(10+90),5mL正己烷預淋弗羅里矽柱50℃水浴氮吹近干正己烷定容5.0mLGC檢測（ECD）加入2mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)2mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)淋洗，重復一次4mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)預淋氨基柱50℃

水浴氮吹近干甲醇定容2.50mLHPLC檢測（柱后+熒光）過2μm濾膜25g樣品，加入50mL乙腈高速勻漿2min過濾到添加5~7g氯化鈉的100mL具塞量筒劇烈震蕩1min后靜置30min（實踐中10min即可）分取10mL有機相，旋蒸近干，洗耳球吹干或80℃水浴氮氣揮干方法1：NY/T761-2008《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法方法名稱及來源：

NY/T761-2008、GB/T19648-2006和GB/T20769-2008等，其中以GB/T19648-2006為主。農藥種類和個數：有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和苯并咪唑類農藥等800多種。使用儀器：

GC、LC、GC-MS/MS和LC-MS/MS?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之檢測步驟：所有洗脫液氮吹儀吹干；或旋蒸近干，洗耳球吹干5mL乙腈+甲苯預淋石墨化炭黑氨基柱（色素少，可用氨基柱代替）丙酮定容5.0mL移取2.5mL氮吹儀吹干，正己烷定容2.5mLGC-MS/MS和GC檢測用2mL乙腈＋甲苯(3+1)涮洗濃縮瓶并倒入SPE小柱，重復2次剩余約20mL乙腈+甲苯分次或1次倒入，淋洗小柱移取2.5mL氮吹儀吹干，用甲醇+水（1+1）定容2.5mLLC-MS/MS和HPLC檢測過0.22μm濾膜25g樣品，加入50mL乙腈高速勻漿2min過濾到添加5~7g氯化鈉的100mL具塞量筒中劇烈震蕩1min后靜置30min（實踐中10min即可）分取10mL有機相，旋蒸或50℃水浴氮氣至近干，加入2mL乙腈＋甲苯(3+1)洗脫液用量約為25mL方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法2：NY/T761、GB/T19648和GB/T20769等綜合法《農產品質量安全檢測技術培訓系列之方法3：優(yōu)化后的QuEChERSMethod方法名稱及來源：在美國農業(yè)部的QuEChERSMethod基礎上做了優(yōu)化和調整。

農藥種類：有機磷，有機氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農藥等多殘留檢測。使用儀器：GC-MS/MS、LC/MS/MS?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之方法3：優(yōu)化后的QuEChERSMethod原理：

與固相萃取(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化的目的。優(yōu)點：

⑴回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農藥品種的回收率大于85%；⑵精確度和準確度高；⑶可分析的農藥范圍廣；⑷速度快；⑸溶劑使用量少，污染小，價格低廉且不使用含氯化物溶劑；⑹操作簡便；⑺使用很少的玻璃器皿，裝置簡單?！掇r產品質量安全檢測技術培訓系列之方法3：優(yōu)化后的Qu