高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定鎖陽(yáng)中沒(méi)食子酸和原兒茶酸

鎖陽(yáng)通常被稱為“不老藥”，也被稱為銹鐵棒、地毛球和羊圈。這是鎖陽(yáng)科植物鎖陽(yáng)的干燥土壤。具有益腎陽(yáng)、益血潤(rùn)腸排便的功效。臨床上主要用于腰膝疲勞、陽(yáng)虛、滑精、腸干渴等疾病。研究表明,鎖陽(yáng)能夠促進(jìn)人體細(xì)胞再生和新陳代謝,增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)能力,在防癌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老、防治心血管疾病、治療白細(xì)胞減少等方面具有重要價(jià)值。目前,鎖陽(yáng)中沒(méi)食子酸、原兒茶素的HPLC含量測(cè)定方法尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者以沒(méi)食子酸、原兒茶素為對(duì)照品,建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定青海鎖陽(yáng)中沒(méi)食子酸、原兒茶素含量的測(cè)定方法,可為控制該藥材青海地區(qū)的內(nèi)在質(zhì)量提供參考依據(jù),從而為鎖陽(yáng)藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)和資源的合理開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1超聲蒸發(fā)儀器Agilent1200HPLC(美國(guó)安捷倫公司);色譜柱AgilentEslipse-XDBC18(5.0μm,250.0mm×4.6mm);N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司);KQ5200D超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);METTLERTOLEDOPL203和XS204電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。無(wú)水乙醇、甲醇、丙酮均為分析純,色譜甲醇(山東禹山實(shí)業(yè)有限公司化工分公司),沒(méi)食子酸和原兒茶素對(duì)照品購(gòu)自Sigma公司。1.2溶液的制備1.2.1待測(cè)溶液的制備將鎖陽(yáng)樣品粉碎后,過(guò)40目篩混勻,準(zhǔn)確稱取鎖陽(yáng)樣品1.000g置于圓底燒瓶中,加入50ml甲醇溶液熱回流提取2次,過(guò)濾,合并濾液,濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,再用甲醇溶液溶解并定容于50ml容量瓶中,HPLC測(cè)定前0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾,即為待測(cè)溶液。1.2.2對(duì)照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取對(duì)照品沒(méi)食子酸11.3mg和原兒茶素12.6mg,以甲醇溶解,置于10ml容量瓶中定容,配制成濃度分別為1.13和1.26mg/ml的沒(méi)食子酸和原兒茶素混合對(duì)照品溶液。1.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備AgilentEslipse-XDBC18(250.0mm×4.6mm,5μm)色譜柱,流動(dòng)相:A為甲醇,B為水(含0.01%三氟乙酸)體系,流速1.0ml/min,柱溫25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)280nm,此條件下的標(biāo)準(zhǔn)品及樣品色譜見(jiàn)圖1。2結(jié)果與分析2.1回歸方程的建立分別準(zhǔn)確量取對(duì)照品溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25ml于25ml容量瓶中,加入甲醇定容,即得不同濃度的對(duì)照品混合液。各進(jìn)樣10μl進(jìn)行分析,以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸,得到2種對(duì)照品的回歸方程和相關(guān)關(guān)系。即沒(méi)食子酸的回歸方程Y=136.28+2.69X,r=0.9999;原兒茶素的回歸方程Y=856.21+8.24X,r=0.9999。2.2不同濃度的新生兒茶素穩(wěn)定性取供試品待測(cè)液在“1.3”下色譜條件,分別于0、3、6、9、12h測(cè)定,結(jié)果表明沒(méi)食子酸、原兒茶素含量的RSD分別是1.5%、1.2%,表明樣品在12h穩(wěn)定。2.3精密度取供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,結(jié)果沒(méi)食子酸、原兒茶素含量的RSD分別為0.94%、0.95%,表明該方法精密度良好。2.4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果取同一批樣品,按照“1.3”下方法重復(fù)制備供試品溶液5份,在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果沒(méi)食子酸、原兒茶素含量的RSD分別為0.96%、0.93%,表明該方法重復(fù)性良好。2.5加樣回收率和精密度取供試品溶液,加入適量的混合對(duì)照品溶液,混合均勻后,按照“1.3”下色譜條件測(cè)定樣品溶液中沒(méi)食子酸、原兒茶素的加樣回收率,結(jié)果樣品的各組分加樣回收率分別為98.3%、95.67%,RSD分別為1.2%、1.7%。2.6新生兒茶素含量測(cè)定結(jié)果分別精密吸取樣品待測(cè)液各10μl,注入HPLC中,按“1.3”下色譜條件測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算樣品溶液中沒(méi)食子酸、原兒茶素的含量,每個(gè)樣品重復(fù)3次,取平均值。結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,3個(gè)地方的沒(méi)食子酸含量為0.25～0.35mg/g,原兒茶素含量為0.0160～0.0164mg/g。3回流提取率測(cè)定該試驗(yàn)乙醇、甲醇、水提取鎖陽(yáng),結(jié)果表明甲醇提取率最高,因此選用甲醇作為提取溶液,同時(shí)考慮到回流提取、超聲提取、微波提取,結(jié)果表