如達(dá)潰瘍散對(duì)幽門粘結(jié)法大鼠的保護(hù)作用

潰瘍是一種常見的臨床疾病和疾病，可以發(fā)生在不同的年齡。病理機(jī)制復(fù)雜，易于治愈，容易復(fù)發(fā)。我國是胃潰瘍發(fā)病的高發(fā)地區(qū)之一。如達(dá)潰瘍散是根據(jù)內(nèi)蒙古自治區(qū)名老中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn),在如達(dá)-6的基礎(chǔ)上加減而成,由木香、石榴、瞿麥、砂仁、蓽茇、紅花、寒水石、黑冰片等十味藥組成,具有溫中和胃、止痛解痙、收斂生肌之功效,用于治療脾胃虛弱、氣滯寒凝絡(luò)損型消化性潰瘍,取得較好的臨床療效。本實(shí)驗(yàn)旨在探討其相關(guān)藥理作用機(jī)制,以便為臨床提供更加可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雌性、健康、清潔級(jí)SD大鼠60只,體重(200±20)g,購于北京市維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司。1.2味藥物組成如達(dá)潰瘍散:由木香、石榴、瞿麥、砂仁、蓽茇、寒水石、黑冰片等十味藥物組成,各藥材均由內(nèi)蒙古萬民藥店提供;奧美拉唑腸溶膠囊:哈藥集團(tuán)三精制藥,批號(hào):090236。1.3測試試劑表皮生長因子、前列腺素E2試劑盒:北京華英生物技術(shù)研究所提供。1.4主要設(shè)備TD24-WS低速臺(tái)式自動(dòng)平衡離心機(jī);生物光學(xué)顯微鏡:Olympus。2胃竇部組織病理學(xué)檢測2.1動(dòng)物分組及給藥50只大鼠隨機(jī)分成5組,如達(dá)潰瘍散高、中、低劑量組予如達(dá)潰瘍散2g/kg·d-1、1g/kg·d-1、0.5g/kg·d-1,西藥組給予奧美拉唑腸溶膠囊3.6mg/kg·d-1,模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水,每日1次,連續(xù)15天。2.2模型制備采用大鼠幽門結(jié)扎法進(jìn)行造模。灌胃并常規(guī)飼養(yǎng)到第13天時(shí),各組動(dòng)物禁食不禁水48小時(shí),于第15天灌胃1小時(shí)后開始實(shí)驗(yàn)。將大鼠置入乙醚鐘罩內(nèi)麻醉。常規(guī)消毒,自劍突沿腹中線切開腹壁,找到胃體,使其暴露于切口,在幽門下穿線,將幽門和十二指腸結(jié)合部結(jié)扎,剪線后還納胃體,并逐層縫合,切口及周圍再次消毒,將大鼠放回飼養(yǎng)籠,禁食水。2.3觀察指標(biāo)及檢測2.3.1表皮生長因子(EGF)、前列腺E2(PGE2)測定造模5小時(shí)后斷頭處死大鼠,采血,分離血清,-20℃冰箱保存。用放射免疫法測定測表皮生長因子(EGF)、前列腺素E2(PGE2)含量,具體由北京華英生物研究所檢測。2.3.2胃游離黏液的測定取血后剪開大鼠腹腔,分別結(jié)扎賁門、幽門取胃,迅速置于1%甲醛溶液10分鐘后,沿胃大彎剪一小口,將胃液收集在離心管中,3000r/min,離心20分鐘,取離心后的胃液1.0ml加入0.1ml1%阿爾新藍(lán),然后加入pH5.8的檸檬酸-磷酸緩沖液3.3ml,最后加水至5.0ml,標(biāo)準(zhǔn)管用1ml蒸餾水代替胃液,以檸檬酸-磷酸緩沖液作空白,將上述上清液在分光光度計(jì)上比色(λ615nm),測得之光密度值表示未與黏液結(jié)合的阿爾新藍(lán)的量。胃游離黏液量=1mg-測得OD值/標(biāo)準(zhǔn)0D值×1mg。2.3.3潰瘍指數(shù)的測定按參考文獻(xiàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)定,以積分法計(jì)算潰瘍指數(shù),即出血點(diǎn)為1分,線狀出血壞死斑長度<1mm者為2分,1～2mm者為3分,2～4mm者為4分,>4mm者為5分,全胃分?jǐn)?shù)總和為其潰瘍指數(shù)。2.3.4炎癥指數(shù)的測定10%甲醛溶液中固定胃竇部組織,按常規(guī)方法,脫水、透明、浸蠟、包埋、修塊、連續(xù)切片,行蘇木素-伊紅染色,脫蠟、染色、脫水透明和封片,用生物光學(xué)顯微鏡,觀察胃竇部黏膜損傷程度、出血點(diǎn)及潰瘍灶。并依據(jù)參考文獻(xiàn)評(píng)定分?jǐn)?shù)的方法,用半定量方式來表示。即輕度:出現(xiàn)上皮細(xì)胞脫落、崩解并少量炎性細(xì)胞浸潤;中度:僅出現(xiàn)少量出血點(diǎn);重度:出現(xiàn)大量出血點(diǎn)并形成潰瘍灶。輕、中、重3度相應(yīng)分?jǐn)?shù)為1分、2分、3分,按上述方法,每個(gè)標(biāo)本取5個(gè)視野計(jì)算平均值后可作為其炎癥指數(shù)。2.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(xˉ±s)(xˉ±s)表示,多個(gè)樣本均數(shù)比較采用方差分析,其兩兩比較采用LSD法。3結(jié)果3.1各組大鼠病理形態(tài)的變化3.1.1不同劑量對(duì)奧美拉唑組胃內(nèi)典型組織的影響處死大鼠取出全胃,可見胃體顯著增大,且顏色較暗,胃中充滿胃液,模型對(duì)照組尤重。低劑量組與奧美拉唑組胃內(nèi)可見黏液較多,黏膜皺襞較多,個(gè)別散在出血點(diǎn);中、高劑量組黏膜皺襞出現(xiàn)向潰瘍集中現(xiàn)象,而模型對(duì)照組潰瘍較明顯,中心凹陷,周圍隆起,基底大多覆有灰白色的黏性顆粒狀滲出物。3.1.2不同劑量治療達(dá)社會(huì)放射線事件中上皮細(xì)胞的組織形態(tài)觀察模型對(duì)照組:胃黏膜明顯變薄,腺體明顯減少,部分固有層中性粒細(xì)胞滲出,黏膜層及下層出現(xiàn)大量出血灶、紅細(xì)胞滲出、淤血明顯,上皮細(xì)胞壞死、溶解;上皮細(xì)胞明顯壞死,出現(xiàn)大片明顯潰瘍灶。奧美拉唑組:上皮細(xì)胞溶解、少量脫落。如達(dá)潰瘍散低劑量組:固有層部分區(qū)域淋巴細(xì)胞浸潤,上皮細(xì)胞排列整齊,腺體大小形態(tài)較一致,無明顯變性壞死;出現(xiàn)少量血細(xì)胞,余細(xì)胞形態(tài)清晰,結(jié)構(gòu)尚完整。如達(dá)潰瘍散中劑量組:固有層區(qū)域有出血灶;黏膜淺層、深層均有出血灶,胃皺襞略少,上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死、脫落。如達(dá)潰瘍散高劑量組:黏膜層及下層有出血灶、淤血灶;上皮細(xì)胞溶解、少量脫落。3.2表1顯示了各組大鼠胃指數(shù)、炎癥指數(shù)和胃游離粘膜含量的測定3.3表2顯示了各組大鼠血清e(cuò)gf和pge2含量的測定結(jié)果4達(dá)潰瘍散的臨床作用胃潰瘍屬中醫(yī)學(xué)“胃脘痛”、“吞酸”等范疇,多因情志所傷、過度疲勞、飲食不節(jié)或過食辛辣厚味等因素,導(dǎo)致脾氣虛弱、瘀血阻滯、脈絡(luò)失養(yǎng)而成。脾胃虛弱是主要病因,氣滯血瘀為最基本的病理基礎(chǔ)。如達(dá)潰瘍散中砂仁化濕開胃、健脾止瀉、行氣寬中,用于濕濁中阻,脘痞不饑,脾胃虛寒,嘔吐泄瀉,如《藥性論》言:“主冷氣腹痛,止休息氣痢,勞損,消化水谷,溫暖脾胃”。《本草求真》言:“縮砂,為醒脾調(diào)胃要藥。其言醒脾調(diào)胃,快氣調(diào)中,則于腹痛痞脹有功”;木香行氣止痛、健脾消食,用于脘腹脹痛,瀉痢后重,食積不消,不思飲食;蓽茇溫中散寒,主治脘腹冷痛,嘔吐吞酸,腸鳴泄瀉;紅花活血化瘀祛邪以治標(biāo),諸藥合用,使脾氣得復(fù)、瘀血得化、新血得生、胃腸得養(yǎng)。臨床應(yīng)用于胃潰瘍治療有良好效果?，F(xiàn)代藥理研究表明,砂仁含揮發(fā)油及皂甙,其揮發(fā)油有健胃作用,能增進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng),可排除消化道積氣;木香對(duì)胃腸道有興奮或抑制雙向作用,可利膽、抑菌,并有解痙之功;蓽茇?fù)]發(fā)油有抗菌、抗病毒的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示如達(dá)潰瘍散可明顯改善大鼠胃潰瘍的病理形態(tài)學(xué)變化,減少潰瘍指數(shù)和炎癥指數(shù),增加胃內(nèi)游離黏液,由此提示如達(dá)潰瘍散具有保護(hù)胃黏膜,減輕胃黏膜損傷,促進(jìn)胃黏液分泌作用。表皮生長因子(EGF)主要由唾液腺產(chǎn)生,對(duì)胃黏膜有多種作用,被稱作是促進(jìn)潰瘍愈合的調(diào)節(jié)因子,不僅能夠刺激胃腸黏膜上皮蛋白質(zhì)合成,加速適應(yīng)性潰瘍的愈合,改善胃黏膜血循環(huán)和增強(qiáng)黏膜屏障的作用,還可通過與壁細(xì)胞上的EGF受體(EGFR)作用而抑制胃酸的分泌,在胃腸道中濃度相對(duì)較高,在人與動(dòng)物慢性胃和十二指腸潰瘍中,潰瘍邊緣新形成的細(xì)胞系可表達(dá)EGF,修復(fù)過程中表皮生長因子受體(EGFR)明顯上調(diào)。以往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,經(jīng)口服或皮下注射人工合成的EGF均可以顯著增強(qiáng)大鼠胃黏膜對(duì)藥物損傷的保護(hù)作用。前列腺素E2(PGE2)是胃黏膜極為重要的防御因子,主要生理作用為抑制胃酸分泌,抑制胃液中蛋白水解酶的活性,增加碳酸氫鹽和黏液的分泌,增加胃黏膜血流,可保持胃黏膜微血管的完整性,減少血管充血,使完好的胃小凹細(xì)胞快速移行修復(fù)破壞