專(zhuān)題15現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題書(shū)本黑體字速記1、基因工程至少需要的三種工具，即準(zhǔn)確切割DNA的“手術(shù)刀”——限制酶、將DNA片段再連接起來(lái)的“縫合針”——DNA連接酶、將體外重組好的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的“運(yùn)輸工具”——運(yùn)載體。限制酶切割DNA分子后產(chǎn)生黏性末端、平末端。2、獲取目的基因（主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因）是實(shí)施基因工程的第一步。獲取目的基因方法有直接獲取、從基因文庫(kù)中獲取、人工合成、逆轉(zhuǎn)錄獲取等3、基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。4、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞是實(shí)施基因工程的第三步。（植物：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入雙子葉植物和裸子植物、基因槍法、花粉管通道法；動(dòng)物：顯微注射法；微生物細(xì)胞：Ca2+處理成感受態(tài)細(xì)胞、再完成轉(zhuǎn)化）5、目的基因的檢測(cè)與鑒定這是基因工程的第四步工作。檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入采用DNA分子雜交法、檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄采用分子雜交技術(shù)、檢測(cè)翻譯是否采用抗原-抗體雜交。6、基因工程的應(yīng)用：抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物、抗病轉(zhuǎn)基因植物、其他抗逆轉(zhuǎn)基因植物、利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)、用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、用于改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體（優(yōu)點(diǎn)：不發(fā)生免疫排斥）。7、基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)，基因工程中DNA分子能正確拼接的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是DNA分子具有規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)?；蛑委煹膶?shí)質(zhì)是利用基因工程獲得正常細(xì)胞、再回輸給病人，原理是基因重組。8、具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能，也就是說(shuō)，每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性的特點(diǎn)。9、植物組織培養(yǎng)就是在無(wú)菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞（外植體），培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件（水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、糖類(lèi)等），誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。10、植物體細(xì)胞雜交就是將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)方法：物理法（離心、振動(dòng)、電激），化學(xué)法（用聚乙二醇(PEG)處理）。細(xì)胞之間若有密度差，則在失重的條件下更好。11、植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用：植物繁殖的新途徑——微型繁殖、作物脫毒、人工種子；作物新品種的培育——單倍體育種、突變體的利用；細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。12、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（初次培養(yǎng)-原代培養(yǎng)；轉(zhuǎn)移后的培養(yǎng)-傳代培養(yǎng)）就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散(用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理)成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，營(yíng)養(yǎng)充足（常加入血清、血漿等），適宜的溫度和pH，氣體環(huán)境（主要有O2和CO2）13、動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（越幼嫩細(xì)胞的核越好），移入一個(gè)已經(jīng)去核的卵母細(xì)胞（減=2\*ROMANII中期）中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。14、動(dòng)物細(xì)胞融合也稱(chēng)細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。誘導(dǎo)方法：物理法、化學(xué)法及滅活病毒法。應(yīng)用：利用雜交瘤細(xì)胞（既能分泌抗體，又能無(wú)限增殖）生產(chǎn)單克隆抗體（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞；第二次篩選得到分泌專(zhuān)一抗體的雜交瘤細(xì)胞）。單克隆抗體的特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、能大量制備。單克隆抗體另外一種生產(chǎn)方法：基因工程。15、胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎，或者通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。精子（動(dòng)物體形的大小不影響精子的大?。┬纬蓵r(shí)變形特點(diǎn)：高爾基體→頂體；線粒體→線粒體鞘；中心體→尾；細(xì)胞質(zhì)→原生質(zhì)滴。卵子受精的重要標(biāo)志：在卵黃膜和透明帶的間隙出現(xiàn)兩個(gè)極體。阻止多個(gè)精子入卵的屏障：透明帶反應(yīng)、卵黃膜封閉作用。胚胎發(fā)育過(guò)程：受精卵→桑椹胚（細(xì)胞沒(méi)分化，之后出現(xiàn)分化）→囊胚→原腸胚16、胚胎分割是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或、8等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。要均等分割內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。應(yīng)用：迅速繁殖大量個(gè)體胚胎的來(lái)源：體外受精、沖卵17、生態(tài)經(jīng)濟(jì)主要是通過(guò)實(shí)行“循環(huán)經(jīng)濟(jì)”的原則，使一個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)出的污染物，能夠成為本系統(tǒng)或者另一個(gè)系統(tǒng)的生產(chǎn)原料，從而實(shí)現(xiàn)廢棄物的資源化，而實(shí)現(xiàn)循環(huán)經(jīng)濟(jì)最重要的手段之一就是生態(tài)工程。生態(tài)工程的原理：物質(zhì)循環(huán)再生原理（實(shí)質(zhì)無(wú)廢物）、物種多樣性原理（多種生物）、協(xié)調(diào)與平衡原理（引入合適的生物、不要超出K值）、整體性原理（社會(huì)-經(jīng)濟(jì)-自然）、系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理（優(yōu)化組分之間的結(jié)構(gòu)、組分之間的比例）在肯定生態(tài)工程的作用，特別是對(duì)恢復(fù)和重建受損一態(tài)環(huán)境的重要作用的同時(shí)，不要忘記大自然固有的強(qiáng)大的生態(tài)恢復(fù)力量；更不能誤認(rèn)為只要有了生態(tài)工程，就可以走發(fā)達(dá)國(guó)家“先污染、破壞后治理”的老路。必背基礎(chǔ)知識(shí)點(diǎn)1.基因工程又叫DNA重組技術(shù)，其實(shí)質(zhì)是基因重組，三種基本工具包括限制酶、DNA連接酶和載體。2.DNA連接酶分為E·coliDNA連接酶（來(lái)源大腸桿菌連接黏性末端）和T4DNA連接酶（來(lái)源T4噬菌體連接黏性末端和平末端）。③DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3.載體具備的條件①能自我復(fù)制②具有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA片段插入③具有標(biāo)記基因。載體的種類(lèi)：質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒；4.最常用的載體是--質(zhì)粒,它是雙鏈環(huán)狀DNA分子。5.基因工程操作程序四步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建（核心）、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。6.原核基因一般采取直接分離獲得，真核基因一般是人工合成。常用的獲取目的基因的三種方法：從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增、用化學(xué)方法人工合成。7.基因文庫(kù)分為基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)（如cDNA文庫(kù)）。8.PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）①原理：DNA雙鏈復(fù)制②過(guò)程：第一步變性：加熱，DNA解旋；第二步復(fù)性：冷卻，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步延伸：加熱，熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。③前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。冷卻的目的：使引物結(jié)合的互補(bǔ)DNA鏈上。9.基因表達(dá)載體的組成：目的基因＋啟動(dòng)子＋終止子＋標(biāo)記基因基因表達(dá)載體構(gòu)建目的：使目的基因①穩(wěn)定存在并可遺傳②能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。10.標(biāo)記基因的作用：為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。11.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，是將目的基因插入Ti質(zhì)粒中的T-DNA中，利用了T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上的特點(diǎn);導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)。12.分子水平檢測(cè)是否插入了目的基因的方法是DNA分子雜交技術(shù)；是否轉(zhuǎn)錄出mRNA的方法是分子雜交技術(shù)；是否翻譯成蛋白質(zhì)的方法是抗原－抗體雜交，原理是抗原抗體特異性結(jié)合，均可通過(guò)是否有雜交帶出現(xiàn)來(lái)判斷。個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定的方法舉例：抗蟲(chóng)的接種實(shí)驗(yàn)。DNA分子雜交技術(shù)和分子雜交技術(shù)均用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作為探針。13.提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度用外源生長(zhǎng)激素基因；降低乳汁中乳糖含量用腸乳糖酶基因。14.用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物：將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，通過(guò)顯微注射方法，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中，將受精卵送入母體內(nèi)使其發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（必須是雌性動(dòng)物），后者可以通過(guò)泌乳生產(chǎn)藥物，稱(chēng)為乳腺生物反應(yīng)器。15.基因治療是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，是基因替代不是基因修復(fù)，原理是基因重組，分為體外基因治療和體內(nèi)基因治療，目前都處于初期的臨床試驗(yàn)階段。16.基因工程原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。17.蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足需求。18.蛋白質(zhì)工程的流程：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列19.用蛋白質(zhì)工程制成的電子元件具有體積小、耗電少和效率高的特點(diǎn)；蛋白質(zhì)工程難度很大是因?yàn)閷?duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級(jí)（空間）結(jié)構(gòu)了解不夠。20.植物組織培養(yǎng)技術(shù)①理論基礎(chǔ)（原理）：植物細(xì)胞的全能性②過(guò)程：離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）→愈傷組織（具分生能力的薄壁細(xì)胞）→胚狀體或叢芽→植物體21.人工種子是以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的種子。22.單倍體育種是通過(guò)花藥離體培養(yǎng)獲得單倍體植物，再經(jīng)秋水仙素或低溫處理使染色體加倍；優(yōu)點(diǎn)是①后代能穩(wěn)定遺傳②極大縮短育種年限。23.制作人工種子培養(yǎng)到胚狀體階段；突變體的利用和細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)培養(yǎng)到愈傷組織階段。24.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)①原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性②去細(xì)胞壁用纖維素酶和果膠酶③人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電激等，化學(xué)法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞融合。④流程：先進(jìn)行植物細(xì)胞融合再進(jìn)行植物組織培養(yǎng)⑤原生質(zhì)體成功融合的標(biāo)志是再生出細(xì)胞壁⑥意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。25.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（1）原理：細(xì)胞增殖（2）流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因分化程度低，增殖能力強(qiáng)）→剪碎→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。（3）懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱(chēng)為細(xì)胞貼壁，要求培養(yǎng)瓶表面光滑、無(wú)毒，易于貼附。當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制，此時(shí)細(xì)胞的層數(shù)為一層。（4）目前使用的細(xì)胞在10代以?xún)?nèi)的原因：保持細(xì)胞正常的二倍體核型（或10代以?xún)?nèi)細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變）。（5）條件①無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液進(jìn)行無(wú)菌處理，添加一定量抗生素，以防雜菌污染。應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)自身造成危害。②營(yíng)養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。需加入血清、血漿等天然成分。③溫度：36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。④氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2維持培養(yǎng)液的pH。26.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物（1）原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性；細(xì)胞增殖。（2）分類(lèi)：胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植（比較難）。（3）用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為克隆動(dòng)物。（4）過(guò)程：取供體細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；同時(shí)采集卵母細(xì)胞，在體外培養(yǎng)到減Ⅱ中期，去核（方法：顯微操作）[注：用卵母細(xì)胞原因：①營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富；②體積大，易操作；③含有激發(fā)細(xì)胞核全能性的物質(zhì)]；將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞；通過(guò)電刺激使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎；將胚胎移入受體母體內(nèi)；生出與供體遺傳物質(zhì)基本相同的幼體。27.動(dòng)物細(xì)胞融合（1）原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性（2）誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：聚乙二醇誘導(dǎo)、滅活的病毒誘導(dǎo)、電激等。（3）意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和的障礙（4）最重要應(yīng)用：制備單克隆抗體28.單克隆抗體（1）一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。（2）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體。（3）細(xì)胞融合時(shí)出現(xiàn)多種類(lèi)型的原因：細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100％。（4）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)（特點(diǎn)）：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。（5）制備過(guò)程：對(duì)注射特定的抗原蛋白免疫小鼠；提取B淋巴細(xì)胞；同時(shí)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞并提?。淮偈顾鼈兗?xì)胞融合；在特定的選擇性培養(yǎng)基上篩選出融合的雜交瘤細(xì)胞；然后對(duì)它進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，篩選出能夠分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞；從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中可得到大量的單克隆抗體。29.精子的變形：其中細(xì)胞核變成精子頭的主要部分，高爾基體發(fā)育為頂體，中心體演變?yōu)槲?，線粒體聚集在尾的基部形成線粒體鞘，細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)濃縮為原生質(zhì)滴。30.精卵相遇首先發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放頂體酶；透明帶反應(yīng)是防止多精入卵的第一道屏障，第二道屏障是卵細(xì)胞膜反應(yīng)。31.早期胚胎發(fā)育過(guò)程：發(fā)育起點(diǎn)是①受精卵，經(jīng)②卵裂形成③桑椹胚（細(xì)胞數(shù)目32個(gè)左右，細(xì)胞團(tuán)致密，是全能細(xì)胞，是胚胎分割的最佳時(shí)期），進(jìn)一步發(fā)育形成④囊胚（細(xì)胞開(kāi)始分化，該時(shí)期細(xì)胞的全能性仍很高，也可用于胚胎分割。個(gè)體較大的細(xì)胞稱(chēng)為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織。滋養(yǎng)層細(xì)胞將來(lái)發(fā)育成胎膜和胎盤(pán)）再進(jìn)一步發(fā)育成⑤原腸胚。32.體外受精技術(shù)（1）卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)：方法一：注射促性腺激素使其超數(shù)排卵，從輸卵管中沖取卵子（即沖卵），可直接受精。方法二：從屠宰母畜或活體的卵巢中采集卵母細(xì)胞，要在體外培養(yǎng)成熟后，才能受精。（2）精子的采集和獲能：①收集精子的方法：假陰道法、手握法和電刺激法。②在體外受精前，要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理。常用獲能方法有培養(yǎng)法（放入獲能液中）和化學(xué)誘導(dǎo)法（放在肝素或鈣離子載體A23187溶液中）（3）受精：獲能的精子和培養(yǎng)成熟（即到減Ⅱ中期）的卵細(xì)胞在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程。33.胚胎的早期培養(yǎng)技術(shù)當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí)，可將其取出向受體移植或冷凍保存。胚胎移植一般要到桑椹胚或囊胚階段。34.胚胎移植技術(shù)（1）移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動(dòng)物體內(nèi)（2）提供胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“供體”，接受胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“受體”。（3）意義：充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖能力。（4）生理學(xué)基礎(chǔ)及意義：①發(fā)情排卵后，同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。②早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。為胚胎的收集提供了可能。③受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。為胚胎在受體的存活提供了可能。④供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，但遺傳特性不受影響。（5）用促性腺激素進(jìn)行同期發(fā)情處理和對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。檢查的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段。胚胎進(jìn)行移植方法有手術(shù)法和非手術(shù)法。35.胚胎分割技術(shù)（1）屬于無(wú)性繁殖。（2）材料：桑椹胚或囊胚。（3）分割時(shí)，要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，用分割針取樣滋養(yǎng)層做DNA分析性別鑒定。36.胚胎干細(xì)胞（1）是由早期胚胎或原始性腺中分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞，又叫ES或EK細(xì)胞。（2）功能上具有發(fā)育的全能性；（3）體外培養(yǎng)下，ES細(xì)胞可以只增殖不分化；（4）可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。（5）加入分化誘導(dǎo)因子，如?；撬幔梢哉T導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類(lèi)型組織細(xì)胞分化。37.生態(tài)經(jīng)濟(jì)實(shí)行“循環(huán)經(jīng)濟(jì)”的原則，實(shí)現(xiàn)廢棄物的資源化，最重要手段之一是生態(tài)工程。38.生態(tài)工程的目的是達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益的同步發(fā)展，是一類(lèi)少消耗、多效益、可持續(xù)的工程體系。39.生態(tài)工程的基本原理：物質(zhì)循環(huán)再生原理、物種多樣性原理、協(xié)調(diào)與平衡原理、整體性原理、系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能原理、系統(tǒng)整體性原理。易錯(cuò)易混考點(diǎn)一、基因工程1．PCR技術(shù)中所用的酶是耐高溫(熱穩(wěn)定性強(qiáng))的DNA聚合酶。2．真核生物的糖蛋白基因?qū)朐松镆话悴荒艹晒Ρ磉_(dá)的原因是原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。3．基因工程中農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法過(guò)程中，雙子葉植物可分泌酚類(lèi)化合物來(lái)吸引農(nóng)桿菌。4．創(chuàng)造全新蛋白質(zhì)的生物工程叫做蛋白質(zhì)工程，該工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)的。5．為了檢測(cè)轉(zhuǎn)基因幼苗是否具有抗除草劑特性，可采用的方法是對(duì)幼苗噴施除草劑，與不噴的對(duì)照組進(jìn)行對(duì)照觀察其生長(zhǎng)情況。6．限制酶的主要生物來(lái)源是原核生物。7．基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。8．能連接平末端又能連接黏性末端的是T4DNA連接酶。9．天然質(zhì)粒一般都要經(jīng)過(guò)人工改造才能用作載體。10．PCR擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。11．鈣離子處理受體細(xì)菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞后，將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)其轉(zhuǎn)化，吸收DNA分子。12．培育體型巨大或生長(zhǎng)速度加快的動(dòng)物，一般是導(dǎo)入了其他動(dòng)物的生長(zhǎng)激素基因。13．動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中，與目的基因重組的是乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子。14．檢測(cè)目的基因時(shí)，DNA分子雜交技術(shù)用放射性標(biāo)記目的基因做探針。15．從轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中獲取藥物，該山羊是基因工程培育的乳腺生物反應(yīng)器。16．獲取目的基因時(shí)，若基因較小，核苷酸序列已知，則可通過(guò)人工化學(xué)合成獲取。17．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，一般先用同一種限制酶處理目的基因和載體。18．構(gòu)建的基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的化學(xué)本質(zhì)是DNA片段(或脫氧核苷酸序列)。19．蛋白質(zhì)工程中直接操作的對(duì)象是基因，所獲得的是自然界中不存在的全新蛋白質(zhì)。20．蛋白質(zhì)工程在設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)時(shí)的依據(jù)是蛋白質(zhì)的功能。二、細(xì)胞工程21．制備植物細(xì)胞原生質(zhì)體，用纖維素酶和果膠酶；將動(dòng)物組織制成細(xì)胞懸液，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶。22．誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時(shí)常加入的物質(zhì)是PEG(聚乙二醇)。23．植物組織培養(yǎng)過(guò)程中需要光照的階段是再分化。24．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞增殖。25．動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。26．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的分界線是第一次分裝前后。27．動(dòng)物細(xì)胞核移植可分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，后者所用的細(xì)胞分化程度高，所以恢復(fù)其全能性難度更大。28．單克隆抗體制備中，獲取B淋巴細(xì)胞前，必須對(duì)小鼠注射特定的抗原蛋白。29．每一個(gè)B淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)只分泌一種特異性抗體，但在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不能無(wú)限增殖的。設(shè)法將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合后，要用特定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和相同細(xì)胞融合的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)，雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一性抗體。30．在單克隆抗體制備過(guò)程中，有兩次篩選：第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞(用選擇培養(yǎng)基)；第二次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(用抗原—抗體結(jié)合法)。31．植物單倍體育種中用到的細(xì)胞工程技術(shù)是花藥離體培養(yǎng)。32．制作人工種子時(shí)，包埋的一般是胚狀體，而誘導(dǎo)基因突變常選擇植物組織培養(yǎng)過(guò)程中的愈傷組織作材料。33．針對(duì)某白血病患者，可將其正常體細(xì)胞的核吸出，注入到另一女性的去核卵母細(xì)胞中去，構(gòu)建的重組細(xì)胞可培養(yǎng)出骨髓細(xì)胞，再移植到患者的體內(nèi)，最后其血型不變(血型由供核細(xì)胞決定，與供質(zhì)的卵細(xì)胞無(wú)關(guān))。34．動(dòng)物個(gè)體克隆一般是對(duì)體細(xì)胞核進(jìn)行核移植，克隆的成功表明體細(xì)胞核具有全能性。35．克隆有多個(gè)層次，DNA復(fù)制屬于分子克隆，細(xì)胞有絲分裂屬于細(xì)胞克隆，動(dòng)物核移植后產(chǎn)生新個(gè)體屬于個(gè)體克隆。36．核移植過(guò)程中，受體提供的細(xì)胞應(yīng)是次級(jí)卵母細(xì)胞。三、胚胎工程37．胚胎發(fā)育的卵裂期，細(xì)胞數(shù)目不斷增加，胚胎總體積并不增加，細(xì)胞的相對(duì)表面積增大，細(xì)胞核質(zhì)量與細(xì)胞質(zhì)質(zhì)量比增大。38．ES細(xì)胞將會(huì)給人類(lèi)的移植醫(yī)學(xué)帶來(lái)一場(chǎng)革命，原因是ES細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化出新的細(xì)胞、組織和器官。39．體外受精時(shí)，卵母細(xì)胞一般要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才能受精。40．精子變形過(guò)程中，細(xì)胞核變?yōu)榫宇^的主要部分，高爾基體發(fā)育為頭部的頂體，中心體演變?yōu)榫拥奈?，線粒體聚集在尾的基部形成線粒體鞘，細(xì)胞內(nèi)的其他物質(zhì)濃縮為原生質(zhì)滴，原生質(zhì)滴逐漸脫落，使精子變輕，運(yùn)動(dòng)敏捷。精子長(zhǎng)度與動(dòng)物體型大小無(wú)關(guān)。41．哺乳動(dòng)物初級(jí)卵母細(xì)胞形成的發(fā)育時(shí)期是胎兒期；初級(jí)精母細(xì)胞形成于初情期以后。42．透明帶反應(yīng)發(fā)生于精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間，卵細(xì)胞膜反應(yīng)發(fā)生于精子入卵后。43．當(dāng)胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個(gè)左右時(shí)，叫做桑椹胚，這時(shí)每一個(gè)細(xì)胞都屬于全能細(xì)胞。44．細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)分化的胚胎發(fā)育時(shí)期是囊胚期。滋養(yǎng)層細(xì)胞將發(fā)育成胎膜和胎盤(pán)。45．胚胎工程中，胚胎能收集成功的生理學(xué)基礎(chǔ)是早期胚胎形成后一段時(shí)間內(nèi)未與母體子宮建立組織上的