大鼠脊髓中ms3b和nf-200的表達及其意義

結(jié)果表明，能夠促進父母ste20的蛋白激酶（mst3b），以促進成熟的肝細胞再生。肌苷能促進Mst3b的表達,而6-硫代鳥嘌呤(6-TG)卻抑制其表達。神經(jīng)絲蛋白(NF)200在正常情況下只存在于軸索,而胞體中不包含,當脊髓損傷后,鄰近的神經(jīng)元在創(chuàng)傷及多種誘導(dǎo)因子的作用下大量合成,以適應(yīng)神經(jīng)再生的需要,它不僅反映神經(jīng)元的功能狀態(tài),還可反映軸突再生的情況。我們通過測定大鼠脊髓損傷后脊髓組織中Mst3b、NF-200表達的變化,探討其在脊髓損傷修復(fù)中的作用。材料和方法一、mst3b抗體健康成年雄性SD大鼠68只,體重(250±25)g。Mst3b抗體購自江蘇希望生物科技有限公司;NF-200抗體及免疫組化試劑盒購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司。二、方法1.大鼠骨髓左半橫斷損傷模型64只SD大鼠隨機均分為假手術(shù)組(B組)、單純損傷組(C組)、肌苷治療組(D組)、6-TG組(E組);另選4只大鼠作為正常對照(A組)。C、D、E組制成脊髓左側(cè)半橫斷損傷模型,B組只咬除棘突及椎板不損傷脊髓。B、C、D、E組于造模后3、7、14、28d各取4只大鼠,取損傷部位的脊髓,石蠟包埋后制成縱向切片,每組每個時間點取8張,Mst3b和NF-200各檢測4張。2.mst3b和nf-200在細胞核中表達采用免疫組化SP法染色,按試劑盒說明操作。以光鏡下細胞質(zhì)或細胞核中出現(xiàn)黃色顆粒為Mst3b陽性表達,以軸突內(nèi)紫色點及細胞核和(或)胞漿內(nèi)出現(xiàn)紫色顆粒為NF-200陽性表達。每張切片在200倍鏡下隨機選取5個視野,計算陽性細胞的百分率。3.統(tǒng)計學(xué)分析采用BBB評分法(Basso-Beattie-Bresahanlocomotorratingscale)分別在損傷后各時間點對各組大鼠左后肢進行評分,對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。三、方法的統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,組間比較采用方差分析,相關(guān)性采用雙變量相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、mtt3b、nf-200陽性表達率,c、d、e組mst3b、nf-200陽性表達率見表1A組中無Mst3b、NF-200表達。B、C、D、E組術(shù)后7d的Mst3b陽性表達率最高,14d的NF-200陽性表達率最高(P<0.01);與B組相比,C、D、E組Mst3b、NF-200陽性表達率均顯著增加(P<0.01);與C組相比,D組Mst3b、NF-200表達增加(P<0.01),而E組明顯減少(P<0.05)(表1)。二、兩地相關(guān)關(guān)系檢驗Mst3b與NF-200在脊髓損傷后均出現(xiàn)明顯表達,用雙變量相關(guān)分析法檢驗兩者的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),兩者存在顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.864,P<0.01)。三、各時間依賴性比實驗前,各組大鼠左后肢BBB評分均為21分。各組術(shù)后BBB評分呈時間依賴性增加(P<0.01);與C組相比,D組術(shù)后BBB評分明顯增加(P<0.01),而E組BBB評分顯著減少(P<0.05)(表2)。mst3b與nf-200表達的關(guān)系哺乳動物ste20樣蛋白激酶3b(Mst3b)是一種蛋白激酶,現(xiàn)已被成功克隆。它在軸突再生的過程中必不可少。已有研究表明,Mst3b在多種神經(jīng)細胞中發(fā)揮作用,但尚缺少其在脊髓損傷方面的研究。NF是構(gòu)成神經(jīng)胞體和軸突骨骼框架特有的結(jié)構(gòu)蛋白,其中NF-200可作為反應(yīng)神經(jīng)元功能、指示軸突再生狀況的一個間接指標。本研究采用NF-200為脊髓損傷后神經(jīng)再生的標記物,對各組大鼠脊髓損傷后各時點脊髓組織中Mst3b和NF-200的表達情況進行了觀察,結(jié)果顯示,A組大鼠脊髓中無Mst3b、NF-200表達,B組有少量表達,而C、D、E組有明顯表達;與B、C組相比,D組Mst3b、NF-200陽性表達率升高,而E組表達率降低;從表達時間上來看,Mst3b陽性表達率于術(shù)后7d達到高峰,而NF-200的表達高峰在術(shù)后14d。NF-200的表達高峰落后于Mst3b,與大鼠左后肢功能的恢復(fù)趨勢一致。此外,大鼠脊髓中Mst3b與NF-200的陽性表達呈顯著的正相關(guān)關(guān)系,使用肌苷刺激Mst3b表達升高時,NF-200表達亦升高,大鼠左后肢BBB評分也明顯升高,這與肌苷可刺激軸突再生的報道結(jié)果一致;而使用6-TG抑制Mst3b的表達后,NF-200的陽性表達亦隨之降低,大鼠左后肢BBB評分也明顯降低。這提示,Mst3b可能與脊髓損傷的修復(fù)有密切關(guān)系。因此,我們推測脊髓損傷后可能啟動了某種機制,刺激了Mst3b的表達,而Mst3b又促進了損傷軸突的再生,表現(xiàn)為NF-2