粗莖秦艽種子萌發(fā)特性及藥材質(zhì)量評價研究粗莖秦艽GentianacrasicaulisDuthieexBurk.為龍膽科（Gentianaceae）龍膽屬（Gentiana）多年生植物。是我國傳統(tǒng)中藥材之一,主要分布于西藏東南部、云南、四川、貴州西北部、青海東南部、甘肅南部等海拔2100⁴500m地區(qū),在四川和云南有栽培品。粗莖秦艽以野生資源為主,有較高的藥用價值。據(jù)現(xiàn)代研究表明,該植物活性物質(zhì)為環(huán)烯醚萜苷、黃酮和三萜等成分,醇提物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌作用,水提物有保肝、降壓、心血管保護等作用。但是粗莖秦艽以有性繁殖為主,近年來臨床用藥量增加,過度采挖導(dǎo)致野生資源日漸枯竭,已被列為北京II級保護野生品種,迫切的需要開展人工栽培來緩解資源緊缺。通過前期采樣檢測,高海拔產(chǎn)地（四川省阿壩州黑水縣）粗莖秦艽藥材馬錢苷酸和龍膽苦苷含量高,為《中國藥典》（2015年版）含量測定項下檢測指標的3⁶倍。而目前,高海拔產(chǎn)地人工栽培遇到的主要問題是粗莖秦艽種子具有休眠期不定和高海拔生長緩慢,一定程度上影響了粗莖秦艽的資源栽培和臨床安全、有效的用藥。因此,本課題對粗莖秦艽種子破除休眠、最適生長條件、種子萌發(fā)RNA-seq、產(chǎn)地動態(tài)溫度、動態(tài)含量和高分辨質(zhì)譜定性進行了試驗研究,以期為粗莖秦艽藥材人工栽培、藥效評價、質(zhì)量標準及進一步開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1.以萌發(fā)率為評價指標對粗莖秦艽種子浸泡處理破除休眠試驗。試驗結(jié)果表明:將種子30℃流水浸泡12h、1.5%KMnO₄浸泡10min,流水沖干凈,經(jīng)500mg/LGA3浸泡12h,置于25℃有光照的恒溫培養(yǎng)箱,粗莖秦艽種子萌發(fā)率為最高。2.采用單因素試驗法,以新芽從萌發(fā)長到1cm生長率為評價指標對不同溫度、光照強度、光照時間進行生長條件篩選試驗。試驗結(jié)果表明:粗莖秦艽萌發(fā)新芽在25℃溫度、3000Lux光照強度、12h/d光照時間生長條件下,新芽生長最快,長勢最好。3.基于RNA-seq二代測序技術(shù),對粗莖秦艽種子萌發(fā)過程中基因表達影響激素調(diào)控機制初步試驗。試驗結(jié)果表明:粗莖秦艽萌發(fā)過程三個階段共有差異基因386條;光合作用途徑下差異基因41個、植物激素轉(zhuǎn)錄信號途徑下差異基因71個、淀粉和蔗糖代謝途徑下差異基因88個、苯丙素生物合成途徑下差異基因66個。4.運用DS1921G溫度自動記錄儀,采集黑水縣5個不同海拔產(chǎn)地粗莖秦艽根部動態(tài)溫度試驗。試驗結(jié)果表明:年平均溫度與海拔呈負相關(guān)關(guān)系;日最高溫度、日最低溫度和日平均溫度的變化趨勢為先上升,到8月后呈下降趨勢;每日最低溫度為9:00時,最高溫度為18:00時;在5月和9月日平均溫度和年平均溫度相當,在5⁸月日平均溫度高于年平均溫度,在9¹1月年平均澤高于日平均溫度。5.采用UPLC-Q-ExactiveMS四級桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)建立快速定性識別和鑒定粗莖秦艽根中化學(xué)成分的方法試驗。試驗結(jié)果表明:快速定性識別和鑒定了粗莖秦艽根中34個化合物,包括13個環(huán)烯醚萜成分、5個黃酮類成分、5個酯類成分、3個三萜類成分、2個有機酸類成分、1個苯丙素類和5個其他成分,其中有15個化學(xué)成分為首次從粗莖秦艽根中研究發(fā)現(xiàn)。6.采用HPLC法建立粗莖秦艽根中次生代謝產(chǎn)物動態(tài)含量變化的方法試驗。試驗結(jié)果表明:黑水縣粗莖秦艽藥材含量為《中國藥典》（2015年版）含量測定指標下限的