原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析中國藥品生物制品檢定所雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷ImpurityProfile〔雜質(zhì)譜〕:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.對存在于藥品中所有雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜控制第一次飛躍第二次飛躍雜質(zhì)譜控制與雜質(zhì)控制的區(qū)別？雜質(zhì)譜控制的整體解決方案原料藥雜質(zhì)控制的相關(guān)法規(guī)對新原料藥中的雜質(zhì)如何進行闡述？化學(xué)方面分類與鑒定報告雜質(zhì)的控制〔檢查工程、限度〕分析方法平安性方面對平安性研究及臨床研究中存在的潛在雜質(zhì)〔在當(dāng)時的實驗樣品中不存在或含量極低的雜質(zhì)〕的平安性評估雜質(zhì)的分類有機雜質(zhì)反響起始物、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物、試劑、配位體、催化劑等無機雜質(zhì)試劑、配位體、催化劑、重金屬、無機鹽及過濾介質(zhì)、活性炭等殘留溶劑常用的有69種Qualification(界定)：是獲得和評價與研發(fā)新藥相關(guān)的雜質(zhì)的數(shù)據(jù)的過程，這些數(shù)據(jù)用于建立新藥的平安閾值〔水平〕，單個的或一些已確定的雜質(zhì)的含量在這個閾值下可以確保藥品的生物平安性。Reportingthreshold或Reportinglevel(報告閾值或報告水平〕：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被報告的限度。Identifiedthreshold(鑒別閾值〕：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被鑒別的限度。Qualificatedthreshold(界定閾值〕：新藥注冊時雜質(zhì)應(yīng)被界定的限度。新藥原料藥的雜質(zhì)限度

最大日劑量報告閾值鑒定閾值界定閾值≤2g0.05%0.10%或1.0mg(取最小值)0.15%或1.0mg(取最小值)>2g0.03%0.05%0.05%〔以原料藥的響應(yīng)因子計〕如何合理的對原料藥中的雜質(zhì)進行報告和控制？研究報告中對有機雜質(zhì)的根本要求對新原料藥在合成、精制和儲存過程中最可能產(chǎn)生的那些實際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進行綜述。根據(jù)合成工藝中化學(xué)反響的原理，結(jié)合反響條件等，闡述合成工藝中可能產(chǎn)生的副產(chǎn)物；根據(jù)起始原料的結(jié)構(gòu)及來源，闡述可能由起始原料引入的有關(guān)物質(zhì)；根據(jù)起始原料、中間體、產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)特點，產(chǎn)生合成中可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物；根據(jù)產(chǎn)物及雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點，結(jié)合純化精制工藝，闡述去除雜質(zhì)的關(guān)鍵工藝。頭孢菌素的各種可能的降解反響類型3.6、7位氫的反向異構(gòu)4.7位碳相連的側(cè)鏈反響分子結(jié)構(gòu)中7位碳側(cè)鏈上有α-氨基的頭孢菌素，如頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢來星、頭孢克羅等藥物，還可發(fā)生分子內(nèi)親核反響，生成哌嗪二酮衍生物的降解物5.發(fā)生在R3取代基的反響當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時，易脫去乙?；?，形成脫乙?；到馕?。在加熱、酸性等條件下，可進一步進行分子內(nèi)部環(huán)和，此時生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。

6.雙鍵順反式異構(gòu)〔E-異構(gòu)〕7.酯的水解8.聚合反響9.其它反響基于降解反響的雜質(zhì)分析發(fā)生在頭孢菌素R3取代基的降解反響雜質(zhì)譜分析由于起始物頭孢菌素C含有DAO-CC、DA-CC和CC-LT等雜質(zhì)，在半合成步驟中發(fā)生相同的反響，分別生成DAO-ACA、DA-ACA和ACA-LT，進而生成DAO-CTAX、DA-CTAX和CTAX-LT等雜質(zhì)。雜質(zhì)E可以源于起始原料雜質(zhì)E可以源于合成中的任一中間過程雜質(zhì)譜分析雜質(zhì)譜分析生產(chǎn)工藝中產(chǎn)生的雜質(zhì)闡述清楚產(chǎn)品中可能存在那些雜質(zhì)雜質(zhì)的來源生產(chǎn)工藝中通過何種手段去除或控制這些雜質(zhì)的產(chǎn)生實際產(chǎn)品中這些的雜質(zhì)水平及變化加替沙星及其十種雜質(zhì)對照品的色譜圖加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析

色譜柱:SHISEIDOCAPCELLPAKC18加替沙星及10個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式主要雜質(zhì)是雜質(zhì)3和雜質(zhì)8生產(chǎn)工藝雜質(zhì)原料的雜質(zhì)譜分析光照穩(wěn)定性評價比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化按隨機取19批樣品UV燈下照射10天

雜質(zhì)2、雜質(zhì)4是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì)大多數(shù)喹喏酮類抗生素對光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？如何合理的對原料藥中的雜質(zhì)進行報告和控制？依據(jù)合成/降解反響機理，鑒別可能雜質(zhì)！

全過程跟蹤雜質(zhì)在合成工藝中的變化！雜質(zhì)控制方法直接測定色譜法HPLCTLCHPCEGC間接測定溶液的顏色檢查雜質(zhì)分析方法的選擇方法互補原那么了解不同方法間的相關(guān)性所有的分析方法必須進行驗證〔validation)藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后〔仿制〕藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定別離對象所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保存？是否所檢測到的色譜峰存在共出峰？新方法分析方法的有效性〔氨芐西林鈉/舒巴坦鈉〕原方法中國抗生素雜志，2021，34：734在對各國藥典方法比較的根底上確定分析方法所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保存？是否所檢測到的色譜峰存在共出峰？如何驗證？采用HPCE/HPTLC方法驗證RP-HPLC方法的有效性JCPS，2021，19〔4〕：285–292頭孢菌素有關(guān)物質(zhì)測定中MEKC是HPLC分析的最有效驗證方法MEKC與HPLC測定頭孢菌素有關(guān)物質(zhì)的互補性分析

MEKC具有較強的雜質(zhì)別離能力，但其檢測限〔LOD〕較高。借助于加速實驗，將MEKC別離出的雜質(zhì)峰數(shù)目與HPLC別離出的含量大于MEKCLOD的雜質(zhì)峰數(shù)目進行比較，當(dāng)兩者根本相對時，可以認(rèn)為HPLC方法具有較滿意的別離能力。藥物分析雜志，待發(fā)表HPLC與HPTLC分析慶大霉素的比較HPTLC中的9號和10號斑點在HPLC中被檢出了嗎？慶大霉素供試品HPTLC色譜圖及對應(yīng)的UV掃描圖譜1.UK12.UK23.UK34.UK45.C1a6.UK57.C2a+C28.C1藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后〔仿制〕藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定別離對象基于實驗設(shè)計理念的HPLC方法優(yōu)化理論JPBA，2021,49(5):1192–1202洛伐他定和辛伐他定有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法的優(yōu)化

新優(yōu)化出的方法比USP的別離度更好，比EP別離出的雜質(zhì)峰更多，比ChP所用的別離時間更短，并到達了更好的別離效果藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后〔仿制〕藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定別離對象基于QbD理念的雜質(zhì)控制策略JPBA，2021,46(3):431-441藥物雜質(zhì)的可能來源阿奇霉素的合成途經(jīng)阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種模擬色譜圖實際色譜圖雜質(zhì)名稱logP(8.3)logkkTR=T0（1+k）去克拉克定糖阿奇霉素A1.280.928.2613.89紅霉素A內(nèi)酰胺1.350.958.9414.90阿奇霉素C2.21.3723.2030.303’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A2.241.3924.2737.90紅霉素C肟（E）2.381.4528.4044.093’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素2.791.6544.9968.98紅霉素A肟（Z）2.81.6645.5069.75紅霉素A肟（E）2.81.6645.5069.75丙基阿奇霉素3.161.8368.15103.73阿奇霉素E3.542.0270.40107.10N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾?.982.7275.40114.60采用有效的方法證明雜質(zhì)不存在，

而不是陳述雜質(zhì)不存在！SephadexG-10凝膠色譜系統(tǒng)典型別離圖樣品對照Kav=0高效凝膠色譜系統(tǒng)TSK高效凝膠色譜系統(tǒng)Superdex

pipted

高效凝膠色譜系統(tǒng)高效疏水凝膠色譜系統(tǒng)高效疏水凝膠色譜系統(tǒng)頭孢地嗪鈉

頭孢呋辛酯

TSKgelG2000HHR

頭孢丙烯

TSKgelG2500PWXL

法羅培南

TSKgelG2000HHR

TSKgelG2000SWXL

TSKgelG2000SWXL

SephadexG10與TSK柱比較62G10柱結(jié)果與TSK柱結(jié)果的相關(guān)性SephadexG10TSK聚合物其他聚合物二聚物HPLC反相色譜系統(tǒng)控制高分子雜質(zhì)通過對指針性雜質(zhì)的測定，表征藥品中高分子雜質(zhì)總量?！睞〕阿莫西林鈉在SuperdexPeptide高效凝膠色譜系統(tǒng)中的色譜圖〔B〕各色譜峰切換到BP有關(guān)物質(zhì)HPLC分析系統(tǒng)后的色譜圖中國新藥雜志,2021,17(24):23在溶液中〔阿莫西林鈉易形成聚合物〕，阿莫西林閉環(huán)二聚體和二酮哌嗪阿莫西林〔2－S〕的含量與各類阿莫西林聚合物含量之和〔主峰后雜質(zhì)總量〕呈一定的相關(guān)性中國藥學(xué)雜志,2021，44〔23〕：1821反沖模式

(Backflushingmode)柱前富集模式(on-columnfocusing)鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比較SephadexG-10系統(tǒng)TSK-GelG2000swxl系統(tǒng)

0.8ml/minTSK系統(tǒng)0.5ml/minC18系統(tǒng)

樣品中雜質(zhì)含量的報告批次及批量生產(chǎn)日期生產(chǎn)地點生產(chǎn)工藝產(chǎn)品中單個雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量批次用途使用的分析方法報告研制過程中所有批次樣品的檢驗結(jié)果；檢驗結(jié)果應(yīng)用詳細(xì)記錄，而不是簡單描述為“符合規(guī)定〞；分別記錄單個雜質(zhì)〔雜質(zhì)、未知雜質(zhì)〕、總雜質(zhì)的含量；所有的雜質(zhì)應(yīng)編號，如根據(jù)保存時間等小于1.0%的雜質(zhì)，表示為兩位小數(shù)，如0.13%,0.06%大于1.0%的雜質(zhì)，表示為一位少數(shù)，如1.3％在新藥研發(fā)過程中，采用統(tǒng)一的編號系統(tǒng)，表征雜質(zhì)的變化！如果新藥研發(fā)過程中雜質(zhì)分析方法改變，應(yīng)分別給出其驗證資料并對不同方法的相關(guān)性進行評價。色譜圖的相關(guān)性比較是必須的。利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置雜質(zhì)數(shù)據(jù)的積累是制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要依據(jù)國內(nèi)新藥研發(fā)中對有關(guān)物質(zhì)控制的誤區(qū)重指標(biāo)，輕方法方法的有效性與樣品的現(xiàn)狀對雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒別重視不夠如何確定微量雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)？根據(jù)雜質(zhì)來源，產(chǎn)生條件，結(jié)合母核的質(zhì)譜裂解規(guī)律推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律

青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律

鑒定未知同系物結(jié)構(gòu)的策略－1對于具有相同母核的化合物：紫外光譜圖可以得到有關(guān)母核結(jié)構(gòu)的信息；一級質(zhì)譜得到分子量信息；二級質(zhì)譜得到碎片峰信息,可以推測出有關(guān)各取代基的情況；利用色譜保存行為來驗證推測結(jié)果是否正確。ACA，535：89-99,2005分析化學(xué)，34〔1〕：95-99，2006藥學(xué)學(xué)報，41〔5〕：475-480，2006鑒定未知降解雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的策略－2對于反響機理的降解雜質(zhì)：根據(jù)反響原理設(shè)計加速實驗；一級質(zhì)譜得到分子量信息；二級質(zhì)譜得到碎片峰信息,進一步推測降解物的結(jié)構(gòu)；利用UV特征和色譜保存行為來驗證推測結(jié)果是否正確。確定未知雜質(zhì)的策略－3推測雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)反合成推測的可能雜質(zhì)LC/MS通過質(zhì)譜裂解規(guī)律和色譜保存時間確定所推測雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性微量組分的毒性評價毒性快速評價平臺斑馬魚毒性快速評價平臺，對雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進行評價。優(yōu)點：雜質(zhì)用量少無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實驗周期短〔3－4天一個周期〕Figure4.EffectsofMMTDandTDAonthezebrafishembryonicdevelopment(3-dpf).

A-D:TheembryostreatedwithMMTDat10

g/ml(A),100

g/ml(B),300

g/ml(C)andat500

g/ml(D).E-H:theembryostreatedwithTDAat100

g/ml(E,F),300

g/ml(G)andat500

g/ml(H);I,J:normalembryosascontrolsatalateralview(I)andadorsalview(J).Hemorrhageofbrainareasisindicatedbywhitearrow,opaqueyolkandYEbyredarrow,deficienteyesarebyslight-bluearrows,colorlessandcord-likeheartsandenlargedpericardialsacsbyyellowarrows,ripple-likenotochordsbyorangearrows.雌二醇對斑馬魚胚胎的心臟毒性斑馬魚作為藥物耳毒性檢測模型斑馬魚側(cè)線神經(jīng)丘毛細(xì)胞:(A)5－dpf幼體頭部側(cè)面，示眼窩上(SO1andSO2),耳囊(O1)和枕部的(OC1)的神經(jīng)丘；(B)O1神經(jīng)丘毛細(xì)胞雙染色－FM1-43(紅)和Yo-Pro-1(綠).(C)FM1-43染色；(D).Yo-Pro-1染色。Scalebar=50um(A);10um(B–D).HearingResearch213(2006)25–33藥物耳毒性檢測利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。以下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。給藥后系統(tǒng)對照組〔正常幼體〕雜質(zhì)平安性的界定〔評估〕申報者應(yīng)對所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)限度提供平安性方面的理由。對于一個通過充分的平安性研究和臨床研究的新原料藥，其中任何一個雜質(zhì)的水平被認(rèn)為是已經(jīng)經(jīng)過評價的；對于與動物和/或人體內(nèi)的重要代謝物結(jié)構(gòu)相同的雜質(zhì)，被認(rèn)為是經(jīng)過評價的；雜質(zhì)的實際含量如果低于雜質(zhì)的界定閾值，也被認(rèn)為是合理的。對結(jié)構(gòu)但含量大于界定限的雜質(zhì)；結(jié)構(gòu)未知且含量大于鑒別限的雜質(zhì)，如對雜質(zhì)的平安性不確定，均需要對雜質(zhì)進行界定。頭孢西酮鈉雜質(zhì)限度的評估頭孢西酮鈉雜質(zhì)限度定為“MMTD不得過1.0%，其它最大雜質(zhì)不得過2.0%，雜質(zhì)總量不得過4.0％〞。如何對雜質(zhì)限度進行評估？頭孢西酮的主要降解雜質(zhì)？頭孢西酮的主要毒性功能基團？頭孢西酮的主要毒性雜質(zhì)？頭孢西酮鈉毒性功能基團分析MMTD結(jié)構(gòu)是頭孢西酮的主要毒性功能基團頭孢西酮鈉的毒性反響與頭孢唑林鈉相當(dāng),