十三、炭疽防治技術規(guī)范

炭疽（Anthrax）是由炭疽芽胞桿菌引起的一種人畜共患傳染病。

世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報告的動物疫病，我國將其

列為二類動物疫病。

為預防和控制炭疽，依據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》和其它

相關法律法規(guī)，制定本規(guī)范。

1適用范圍

本規(guī)范規(guī)定了炭疽的診斷、疫情報告、疫情處理、防治措施和控

制標準。

本規(guī)范適用于中華人民共和國境內(nèi)一切從事動物飼養(yǎng)、經(jīng)營及其

產(chǎn)品的生產(chǎn)、經(jīng)營的單位和個人，以及從事動物防疫活動的單位和個

人。

2診斷

依據(jù)本病流行病學調(diào)查、臨床癥狀，結(jié)合實驗室診斷結(jié)果做出綜

合判定。

2.1流行特點

本病為人畜共患傳染病，各種家畜、野生動物及人對本病都有不

同程度的易感性。草食動物最易感，其次是雜食動物，再次是肉食動

物，家禽一般不感染。人也易感。

患病動物和因炭疽而死亡的動物尸體以及污染的土壤、草地、水、

飼料都是本病的主要傳染源，炭疽芽胞對環(huán)境具有很強的抵抗力，其

污染的土壤、水源及場地可形成持久的疫源地。本病主要經(jīng)消化道、

呼吸道和皮膚感染。

本病呈地方性流行。有一定的季節(jié)性，多發(fā)生在吸血昆蟲多、雨

水多、洪水泛濫的季節(jié)。

2.2臨床癥狀

2.2.1本規(guī)范規(guī)定本病的潛伏期為20天。

2.2.2典型癥狀

本病主要呈急性經(jīng)過，多以突然死亡、天然孔出血、尸僵不全為

特征。

牛：體溫升高常達4UC以上，可視黏膜呈暗紫色，心動過速、

呼吸困難。呈慢性經(jīng)過的病牛，在頸、胸前、肩胛、腹下或外陰部常

見水腫；皮膚病灶溫度增高，堅硬，有壓痛，也可發(fā)生壞死，有時形

成潰瘍；頸部水腫常與咽炎和喉頭水腫相伴發(fā)生，致使呼吸困難加重。

急性病例一般經(jīng)24?36小時后死亡，亞急性病例一般經(jīng)2?5天后死

亡。

馬：體溫升高，腹下、乳房、肩及咽喉部常見水腫。舌炭疽多見

呼吸困難、發(fā)縉；腸炭疽腹痛明顯。急性病例一般經(jīng)24?36小時后

死亡，有炭疽癰時，病程可達3?8天。

羊：多表現(xiàn)為最急性（猝死）病癥，搖擺、磨牙、抽搐，掙扎、

突然倒斃，有的可見從天然孔流出帶氣泡的黑紅色血液。病程稍長者

也只持續(xù)數(shù)小時后死亡。

豬：多為局限性變化，呈慢性經(jīng)過，臨床癥狀不明顯，常在宰后

見病變。

犬和其它肉食動物臨床癥狀不明顯。

2.3病理變化

死亡患病動物可視黏膜發(fā)縉、出血。血液呈暗紫紅色，凝固不良，

粘稠似煤焦油狀。皮下、肌間、咽喉等部位有漿液性滲出及出血。淋

巴結(jié)腫大、充血，切面潮紅。脾臟高度腫脹，達正常數(shù)倍，脾髓呈黑

紫色。

嚴禁在非生物安全條件下進行疑似患病動物、患病動物的尸體剖

檢。

2.4實驗室診斷

實驗室病原學診斷必須在相應級別的生物安全實驗室進行。

2.4.1病原鑒定

2.4.1.1樣品采集、包裝與運輸

按照NY/T5612.1.2、4.1、5.1執(zhí)行。

2.4.1.2病原學診斷

炭疽的病原分離及鑒定（見NY/T561）。

2.4.2血清學診斷

炭疽沉淀反應（見NY/T561）。

2.4.3分子生物學診斷

聚合酶鏈式反應（PCR）（見附件1）。

3疫情報告

3.1任何單位和個人發(fā)現(xiàn)患有本病或者疑似本病的動物，都應

立即向當?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機構報告。

3.2當?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機構接到疫情報告后，按國家動物疫情

報告管理的有關規(guī)定執(zhí)行。

4疫情處理

依據(jù)本病流行病學調(diào)查、臨床癥狀，結(jié)合實驗室診斷做出的綜合

判定結(jié)果可做為疫情處理依據(jù)。

4.1當?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機構接到疑似炭疽疫情報告后，應及時

派員到現(xiàn)場進行流行病學調(diào)查和臨床檢查，采集病料送符合規(guī)定的實

驗室診斷，并立即隔離疑似患病動物及同群動物，限制移動。

對病死動物尸體，嚴禁進行開放式解剖檢查，采樣時必須按規(guī)定

進行，防止病原污染環(huán)境，形成永久性疫源地。

4.2確診為炭疽后，必須按下列要求處理。

4.2.1由所在地縣級以上獸醫(yī)主管部門劃定疫點、疫區(qū)、受威脅

區(qū)。

疫點：指患病動物所在地點。一般是指患病動物及同群動物所

在畜場（戶組）或其它有關屠宰、經(jīng)營單位。

疫區(qū)：指由疫點邊緣外延3公里范圍內(nèi)的區(qū)域。在實際劃分疫

區(qū)時，應考慮當?shù)仫曫B(yǎng)環(huán)境和自然屏障（如河流、山脈等）以及氣象

因素，科學確定疫區(qū)范圍。

受威脅區(qū)：指疫區(qū)外延5公里范圍內(nèi)的區(qū)域。

4.2.2本病呈零星散發(fā)時，應對患病動物作無血撲殺處理，對同

群動物立即進行強制免疫接種，并隔離觀察20天。對病死動物及排

泄物、可能被污染飼料、污水等按附件2的要求進行無害化處理；對

可能被污染的物品、交通工具、用具、動物舍進行嚴格徹底消毒（見

附件2）。疫區(qū)、受威脅區(qū)所有易感動物進行緊急免疫接種。對病死

動物尸體嚴禁進行開放式解剖檢查，采樣必須按規(guī)定進行，防止病原

污染環(huán)境，形成永久性疫源地。

4.2.3本病呈暴發(fā)流行時（1個縣10天內(nèi)發(fā)現(xiàn)5頭以上的患

病動物），要報請同級人民政府對疫區(qū)實行封鎖；人民政府在接到封

鎖報告后，應立即發(fā)布封鎖令，并對疫區(qū)實施封鎖。

疫點、疫區(qū)和受威脅區(qū)采取的處理措施如下：

4.2.3.1疫點

出入口必須設立消毒設施。限制人、易感動物、車輛進出和動物

產(chǎn)品及可能受污染的物品運出。對疫點內(nèi)動物舍、場地以及所有運載

工具、飲水用具等必須進行嚴格徹底地消毒。

患病動物和同群動物全部進行無血撲殺處理。其它易感動物緊急

免疫接種。

對所有病死動物、被撲殺動物，以及排泄物和可能被污染的墊料、

飼料等物品產(chǎn)品按附件2要求進行無害化處理。

動物尸體需要運送時，應使用防漏容器，須有明顯標志，并在動

物防疫監(jiān)督機構的監(jiān)督下實施。

4.2.3.2疫區(qū)：交通要道建立動物防疫監(jiān)督檢查站，派專人監(jiān)

管動物及其產(chǎn)品的流動，對進出人員、車輛須進行消毒。停止疫區(qū)內(nèi)

動物及其產(chǎn)品的交易、移動。所有易感動物必須圈養(yǎng)，或在指定地點

放養(yǎng)；對動物舍、道路等可能污染的場所進行消毒。

對疫區(qū)內(nèi)的所有易感動物進行緊急免疫接種。

4.2.3.3受威脅區(qū)：對受威脅區(qū)內(nèi)的所有易感動物進行緊急免

疫接種。

4.2.3.4進行疫源分析與流行病學調(diào)查

4.2.3.5封鎖令的解除

最后1頭患病動物死亡或患病動物和同群動物撲殺處理后20天

內(nèi)不再出現(xiàn)新的病例，進行終末消毒后，經(jīng)動物防疫監(jiān)督機構審驗合

格后，由當?shù)孬F醫(yī)主管部門向原發(fā)布封鎖令的機關申請發(fā)布解除封鎖

令。

4.2.4處理記錄

對處理疫情的全過程必須做好完整的詳細記錄，建立檔案。

5預防與控制

5.1環(huán)境控制

飼養(yǎng)、生產(chǎn)、經(jīng)營場所和屠宰場必須符合《動物防疫條件審核管

理辦法》（農(nóng)業(yè)部[2002]15號令）規(guī)定的動物防疫條件，建立嚴格的

衛(wèi)生（消毒）管理制度。

5.2免疫接種

5.2.1各省根據(jù)當?shù)匾咔榱餍星闆r，按農(nóng)業(yè)部制定的免疫方案,

確定免疫接種對象、范圍。

5.2.2使用國家批準的炭疽疫苗，并按免疫程序進行適時免疫

接種，建立免疫檔案。

5.3檢疫

5.3.1產(chǎn)地檢疫

按GB16549和《動物檢疫管理辦法》實施檢疫。檢出炭疽陽性動

物時，按本規(guī)范4.2.2規(guī)定處理。

5.3.2屠宰檢疫

按NY467和《動物檢疫管理辦法》對屠宰的動物實施檢疫。

5.4消毒

對新老疫區(qū)進行經(jīng)常性消毒，雨季要重點消毒。皮張、毛等按照

附件2實施消毒。

5.5人員防護

動物防疫檢疫、實驗室診斷及飼養(yǎng)場、畜產(chǎn)品及皮張加工企業(yè)工

作人員要注意個人防護，參與疫情處理的有關人員，應穿防護服、戴

口罩和手套，做好自身防護。

附件1

聚合酶鏈式反應(PCR)技術

1試劑

1.1消化液

1.1.11M三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)(pH8.0)

三羥甲基氨基甲烷12.11g

滅菌雙蒸水80mL

濃鹽酸調(diào)pH至8.0

滅菌雙蒸水加至100mL

1.1.20.5M乙二2四乙酸二鈉(EDTA)溶液(pH8.0)

二水乙二鐵四乙酸二鈉18.61g

滅菌雙蒸水80mL

氫氧化鈉調(diào)pH至8.0

滅菌雙蒸水加至100mL

1.1.320%十二烷基磺酸鈉(SDS)溶液(pH7.2)

十二烷基磺酸鈉20g

滅菌雙蒸水80mL

濃鹽酸調(diào)pH至7.2

滅菌雙蒸水加至100mL

1.1.4消化液配制

1M三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HC1)(pH8.0)2mL

0.5mol/L乙二鐵四乙酸二鈉溶液(pH8.0)0.4mL

20%十二烷基磺酸鈉溶液(pH7.2)5mL

5M氯化鈉4mL

滅菌雙蒸水加至200mL

1.2蛋白酶K溶液

蛋白酶K5g

滅菌雙蒸水加至250mL

1.3酚/氯仿/異戊醇混合液

堿性酚25mL

氯仿24mL

異戊醇1mL

1.42.5mmol/LdNTP

dATP(100mmol/L)20gL

dTTP(100mmol/L)20)JL

dGTP(100mmol/L)20gL

dCTP(100mmol/L)20(JL

滅菌雙蒸水加至800pL

1.58pmol/nLPCR弓I物

上游引物ATXU(20D)加入701Hl滅菌雙蒸水溶解，下游引物

ATXD(2OD)加入697HL滅菌雙蒸水溶解，分別取ATXU、ATXD溶液

各300M，混勻即為8pmol/M擴增引物。

1.60.5單位TaqDNA聚合酶

5單位TaqDNA聚合酶IpL

滅菌雙蒸水加至10|JL

現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.710XPCR緩沖液

1.7.1Imol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HC1)(pH9.0)

三羥基甲基氨基甲烷15.8g

滅菌雙蒸水80mL

濃鹽酸調(diào)pH至9.0

滅菌雙蒸水力口至100mL

1.7.210倍PCR緩沖液

Imol/L三羥基甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HC1)(pH9.0)1mL

氯化鉀0.373g

曲拉通X-1000.1mL

滅菌雙蒸水力口至100mL

1.8澳化乙錠(EB)溶液

澳化乙錠0.2g

滅菌雙蒸水加至20mL

1.9電泳緩沖液(50倍)

1.9.10.5mol/L乙二鐵四乙酸二鈉(EDTA)溶液(pH8.0)

二水乙二核四乙酸二鈉18.61g

滅菌雙蒸水80mL

氫氧化鈉調(diào)pH至8.0

滅菌雙蒸水加至100mL

1.9.2TAE電泳緩沖液(50倍)

三羥基甲基氨基甲烷(Tris)242g

冰乙酸57.ImlL

0.5mol/L乙二錠四乙酸二鈉溶液(pH8.0)100mL

滅菌雙蒸水加至1000mL

用時用滅菌雙蒸水稀釋使用

1.101.5%瓊脂糖凝膠

瓊脂糖3g

TAE電泳緩沖液（50倍）4mL

滅菌雙蒸水196mL

微波爐中完全融化，加澳化乙錠（EB）溶液20E。

1.11上樣緩沖液

謨酚藍0.2g,加雙蒸水10mL過夜溶解。50g蔗糖加入50ml水溶

解后，移入已溶解的澳酚藍溶液中，搖勻定容至100mL。

1.12其它試劑

異丙醇（分析純）

70%乙醇

15mmoL/L氯化鎂

滅菌雙蒸水

2器材

2.1儀器

分析天平、高速離心機、真空干燥器、PCR擴增儀、電泳儀、電

泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析儀）、液氮或-70七冰箱、微波爐、

組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2瓜、20迎、200pL,1000|nL）o

2.2耗材

眼科剪、眼科鑲、稱量紙、20mL一次性注射器、1.5mL滅菌離

心管、0.2mL薄壁PCR管、瓊脂糖、500mL量筒、500mL錐形瓶、

吸頭（10比、200心、lOOOuL）,滅菌雙蒸水。

2.3引物設計

根據(jù)GenBank上已發(fā)表的炭疽桿菌P0X1質(zhì)粒序列，設計并合成

了以下兩條引物：

ATXU：5'-AGAATGTATCACCAGAGGC-3'ATXD：S^GTTGTAGATTGGAGC

CGTC—3',此對引物擴增片段為394bp0

2.4樣品的采集與處理

2.4.1樣品的采集

病死或撲殺的動物取肝臟或脾;待檢的活動物，用注射器取血5?

10mL,2?8(保存，送實驗室檢測。

2.4.2樣品的處理

每份樣品分別處理。

2.4.2.1組織樣品處理

稱取待檢病料0.2g,置研磨器中剪碎并研磨，加入2mL消化液

繼續(xù)研磨。取已研磨好的待檢病料上清IOORL加入1.5mL滅菌離心

管中，再加入500|JL消化液和10|JL蛋白酶K溶液，混勻后，置55(

水浴中4?16h。

2.4.2.2待檢菌的處理

取培養(yǎng)獲得的菌落，重懸于生理鹽水中。取其懸液IOOILIL加入

1.5位滅菌離心管中，再加入500|JL消化液和10|A蛋白酶K溶液,

混勻后，置55℃水浴中過夜。

2.4.2.3全血樣品處理

待血凝后取上清放于離心管中，4℃8000g離心5分鐘，取上

清lOOpL,加入500(JL消化液和10|JL蛋白酶K溶液，混勻后，置55(

水浴中過夜。

2.4.2.4陽性對照處理

取培養(yǎng)的炭疽桿菌，重懸于生理鹽水中。取其懸液lOOpL,置1.5

mL滅菌離心管中，加入500|JL消化液和10pL蛋白酶K溶液,混勻后，

置55℃水浴中過夜。

2.4.2.5陰性對照處理

取滅菌雙蒸水lOOpL,置1.5mL滅菌離心管中，加入500|iL消

化液10口1蛋白酶K溶液，混勻后，置552水浴中過夜。

2.5DNA模板的提取

2.5.1取出已處理的樣品及陰、陽對照，加入600|JL酚/氯仿/

異戊醇混合液，用力顛倒10次混勻，12000g離心10分鐘。

2.5.2取上清置1.5mL滅菌離心管中，加入等體積異丙醇，混

勻,置液氮中3分鐘。取出樣品管，室溫融化，15000rpm離心15分

鐘。

2.5.3棄上清，沿管壁緩緩滴入1ml70%乙醇，輕輕旋轉(zhuǎn)洗一

次后倒掉，將離心管倒扣于吸水紙上1分鐘，真空抽干15分鐘（以無

乙醇味為準）。

2.5.4取出樣品管，用50RL滅菌雙蒸水溶解沉淀，作為模板備

用。

2.6PCR擴增

總體積20g,取滅菌雙蒸水5mmol/LdNTP、8pmol/|jL擴

增引物、15mmol/L氯化鎂、10XPCR緩沖液、0.5單位TaqDNA聚合

酶各2吐，2心模板DNA?；靹?，作好標記，加入礦物油20HL覆蓋（有

熱蓋的自動DNA熱循環(huán)儀不用加礦物油）。擴增條件為94C3分鐘后,

94℃30s,58℃30s,72℃30s循環(huán)35次，72℃延伸5分鐘。

2.7電泳

將PCR擴增產(chǎn)物15|nL混合3HL上樣緩沖液，點樣于1.5%瓊脂糖

凝膠孔中，以5V/cm電壓于1XTAE緩沖液中電泳，紫外凝膠成像儀

下觀察結(jié)果。

2.8結(jié)果判定

在陽性對照出現(xiàn)394bp擴增帶、陰性對照無帶出現(xiàn)（引物帶除外）

時，試驗結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)394bp擴增帶為炭疽桿菌陽性，否

則為陰性。

附件2

無害化處理

1炭疽動物尸體處理

應結(jié)合遠離人們生活、水源等因素考慮，因地制宜，就地焚燒。

如需移動尸體，先用5%福爾馬林消毒尸體表面，然后搬運，并將原

放置尸地及尸體天然孔出血及滲出物用5%福爾馬林浸漬消毒數(shù)次，

在搬運過程中避免污染沿途路段。焚燒時將尸體墊起，用油或木柴焚

燒，要求燃燒徹底。無條件進行焚燒處理時，也可按規(guī)定進行深埋處

理。

2糞肥、墊料、飼料的處理

被污染的糞肥、墊料、飼料等，應混以適量干碎草，在遠離建筑

物和易燃品處堆積徹底焚燒，然后取樣檢驗，確認無害后，方可用作

肥料。

3房屋、廄舍處理

開放式房屋、廄舍可用5%福爾馬林噴灑消毒三遍，每次浸漬2

小時。也可用20%漂白粉液噴霧，ZOOmL/m,作用2小時。對磚墻、土

墻、地面污染嚴重處，在離開易燃品條件下，亦可先用酒精或汽油噴

燈地毯式噴燒一遍，然后再用5%福爾馬林噴灑消毒三遍。

對可密閉房屋及室內(nèi)櫥柜、用具消毒，可用福爾馬林熏蒸。在室

溫18C條件下，對每25?301/空間，用10%濃甲醛液（內(nèi)含37%甲

醛氣體）約4000mL,用電煮鍋蒸4小時。蒸前先將門窗關閉，通風

孔隙用高粘膠紙封嚴，工作人員戴專用防毒面具操作。密封8?12小

時后，打開門窗換氣，然后使用。

熏蒸消毒效果測定，可用浸有炭疽弱毒菌芽泡的紙片，放在含組

氨酸的瓊脂平皿上，待熏后取出置37。（2培養(yǎng)24小時，如無細菌生長

即認為消毒有效。

也可選擇其它消毒液進行噴灑消毒，如4