檢測(cè)食品化驗(yàn)菌落總數(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟1、 樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min?10000r/min均質(zhì)1min?2min,或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min?2min,制成1:10的樣品勻液.液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取 25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻,制成1:10的樣品勻液.2、用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面） ，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液.3、制備10倍系列稀釋樣品勻液.每遞增稀釋一次，換用1次1mL無(wú)菌吸管或吸頭.4、 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇23個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿.同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照.5、 及時(shí)將15mL~20mL冷卻至46笆的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46±1笆笆恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻.6、 培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn),36±1°C°C培養(yǎng)48h±2h.水產(chǎn)品30±1CC培養(yǎng)72h±3h.如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí),可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，條件進(jìn)行培養(yǎng).7、 菌落計(jì)數(shù)可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器 ，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量.菌落計(jì)數(shù)以落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示.8、 選取菌落數(shù)在30CFU?300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù).低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì).每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù).9、 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以