第三章食用菌菌種制作

編輯課件菌種的制作是食用菌栽培的前提和重要環(huán)節(jié)，菌種質(zhì)量的好壞直接影響栽培的成敗和產(chǎn)量的上下，只有優(yōu)良的菌種才能獲得高產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，因此生產(chǎn)優(yōu)良的菌種是食用菌栽培的一個極其重要的環(huán)節(jié)。菌種概述編輯課件狹義

是指經(jīng)人工培養(yǎng)，并可供進一步繁殖或栽培使用的食用菌純雙核菌絲體。廣義

以保藏、試驗、栽培和其它用途為目的，具繁衍能力，遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子、組織或菌絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體

一、菌種的概念編輯課件一級種二級種三級種來源、繁殖代數(shù)和使用目的按保藏種實驗種

生產(chǎn)種使用目的固體菌種液體菌種狀態(tài)二、菌種類型編輯課件〔一〕級別不同的菌種1.一級種〔母種〕用組織分離或孢子分離而得到的最初的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境試管、斜面培養(yǎng)基用途再生母種擴大原種

保藏用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點編輯課件編輯課件2.二級種〔原種〕將母種擴大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強特點用途擴大栽培種大口瓶、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基編輯課件編輯課件3.三級種〔栽培種〕將原種擴大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強特點用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基不可再擴編輯課件編輯課件生產(chǎn)總過程母種栽培種栽培原種子實體編輯課件編輯課件〔二〕狀態(tài)不同的菌種

用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種1.固體

菌種概念特點設(shè)備、工藝簡單

菌齡長而不一

發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種2.液體

菌種概念特點設(shè)備、工藝較復(fù)雜

菌齡短而一致

發(fā)酵率高

易老化和自溶編輯課件三、菌種生產(chǎn)程序四大步驟制培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)接種編輯課件第一節(jié)制種條件制種條件主要包括制種場地，儀器設(shè)備和消毒滅菌的藥品。為了確保菌種的質(zhì)量和數(shù)量，必須科學(xué)地選擇和合理布局制種場地，具備必要的儀器設(shè)備、用具及消毒滅菌的藥品等，才能制備出優(yōu)質(zhì)菌種。編輯課件一、制種場地倉庫配料室滅菌室接種室培養(yǎng)室辦公室栽培棚門口曬料場編輯課件二、主要生產(chǎn)設(shè)備一、制培養(yǎng)基設(shè)備二、滅菌設(shè)備三、接種設(shè)備四、培養(yǎng)設(shè)備五、保藏設(shè)備編輯課件一、制培養(yǎng)基設(shè)備

〔一〕原料處理設(shè)備切片粉碎兩用機切片粉碎兩用機鍘草機粉碎機編輯課件拌料機編輯課件裝袋機〔二〕培養(yǎng)基分裝設(shè)備編輯課件裝瓶機挖瓶機編輯課件菌種袋頸圈編輯課件菌種瓶編輯課件二、滅菌設(shè)備高

壓

鍋外鍋：裝水

內(nèi)鍋：裝物（有壁管）鍋蓋安全閥

排氣閥

壓力表編輯課件常壓編輯課件密閉性好要

求1.

接

種

箱用

法

清潔、放物品→消毒噴霧

熏蒸

紫外燈特

點簡易、利移動

對人體低害

效果好、工效低

三、接種設(shè)備

〔一〕接種環(huán)境編輯課件觀察窗紫外燈操作孔接種箱編輯課件

2.接種室緩沖間：2~3m2

接種間：5~6m2面積7~9m2高2.2~2.5m要求

6個面平滑

兩門錯開、平拉式

頂裝紫外燈清潔→物品放緩沖間→消毒

→移物至接種間→噴消毒液

→10min后接種→消毒液清潔

使用編輯課件編輯課件編輯課件使一定工作區(qū)到達相對無菌、無塵狀態(tài)的電器3.超凈工作臺雙人單人編輯課件要求:前端為導(dǎo)熱性好的金屬材料槍匙鉤鏟鑷耙針環(huán)接種4.接種工具編輯課件固

體

菌

種

接

種

槍液體菌種接種槍返回本節(jié)編輯課件四、菌種培養(yǎng)設(shè)備1.培養(yǎng)箱

培養(yǎng)少量菌種的恒溫電器〔20~40℃〕編輯課件2.培養(yǎng)室

培養(yǎng)大量菌種的恒溫房要求光線暗

密閉好、通風(fēng)性強

能升溫、降溫（空調(diào)機）有培養(yǎng)架編輯課件貯藏室遠離污染源低溫（4~8℃）干燥、通風(fēng)、遮光

用前要嚴格消毒殺蟲地面常撒石灰粉保藏原種、栽培種：五、菌種保藏設(shè)備

保藏母種：冰箱〔4℃〕左右編輯課件根本概念殺死一切微生物，包括芽孢。滅菌分為殺菌：菌體尚存

溶菌：菌體消失消毒：只殺死病源菌，未傷及芽孢

防腐：暫時抑制微生物生長

除菌：用沖洗、過濾等機械的方法，除去微生物三、常用的消毒滅菌藥品編輯課件化學(xué)消毒殺菌劑廣泛用于食用菌生產(chǎn)過程中的消毒滅菌，其主要種類有：1、重金屬鹽類：如汞、銀、鋁、鋅、銅等。殺菌機理：是通過與蛋白質(zhì)結(jié)合而引起蛋白質(zhì)變性。低濃度的重金屬對微生物起到抑制或殺死作用。微生物浸在0.1~0.5%硝酸銀升汞溶液中，幾分種就會死亡。常用0.1~0.2%升汞溶液對玻璃器皿、非金屬器械及用于菌種別離的菌菇、菇木進行外表消毒。2、氧化劑：如高錳酸鉀、過氧化氫、臭氧、漂白粉等。殺菌作用：通過強烈的氧化作用，破壞微生物的原生質(zhì)或酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。〔一〕、消毒殺菌劑編輯課件3、復(fù)原劑：如甲醛，5%的甲醛可殺死細菌芽孢和真菌孢子。甲醛能與微生物細胞蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)合，引起蛋白質(zhì)變性。使原生質(zhì)失去正?；顒幽芰?。4、外表活性劑：如乙醇，75%乙醇的消毒力最強，過高過低消毒效果都差。常用于接種前手指消毒及不耐熱制品的消毒。5、其它消毒劑：石灰，以4份生石灰參加1份水，即生成熟石灰、并放出熱，具有殺菌作用。硫磺，常用于培養(yǎng)室和出菇房等空間熏蒸殺菌。殺菌機理：硫磺粉燃燒后產(chǎn)生二氧化硫，二氧化硫與水作用生成亞硫酸，亞硫酸能奪取菌體細胞中的氧，菌體細胞因脫氧至死。編輯課件〔二〕、外表消毒殺菌外表消毒常用于菌種的別離材料、接種人員的手、器材、工作臺面、墻壁等的殺菌處理，外表消毒劑的種類很多，一般是通過涂抹、噴霧、浸泡、洗刷等方法使用。1、菌種別離材料的外表消毒：子實體未外露的，用0.1%升汞溶液浸泡1分鐘；子實體已外露的種菇材料，只能用75%酒精棉球擦菌蓋外表和菌柄，不能浸泡在升汞溶液中。2、手的外表消毒：先用肥皂洗手，再用1~2%來蘇爾等溶液浸泡2分鐘。接種前用之于75%酒精擦手。

編輯課件3、接種工具的消毒殺菌，先用75%酒精擦拭刀片、鑷子、接種鏟等工具，然后用酒精燈火焰燃燒。4、器皿的殺菌：利用高溫空氣進行干熱滅菌，具體方法是：，生產(chǎn)中也常用高壓蒸汽滅菌法對器皿進行滅菌。5、墻壁、臺面、菇床的外表消毒：常用2~5%的漂白粉洗刷接種室、培養(yǎng)室墻壁、地面、床架、用具等。編輯課件〔三〕、室內(nèi)空間殺菌接種箱、培養(yǎng)室、出菇房的空間消毒主要采用紫外線殺菌和氣體滅菌法，還可輔以空間噴霧的方法，增強殺菌的效果。1、紫外線殺菌法適用：一般應(yīng)用于無菌室、接種箱、超凈工作臺內(nèi)的滅菌。只適用于空氣和物體外表的消毒。使用方法：一般照射20～30min，可殺死空氣中95%的細菌。應(yīng)該在黑暗中使用紫外線。殺菌機理：導(dǎo)致菌體細胞內(nèi)核酸和酶發(fā)生光化學(xué)變化，而使細胞死亡；紫外線可使空氣中的氧氣產(chǎn)生臭氧，臭氧也具殺菌作用。編輯課件2、氣體滅菌法〔熏蒸殺菌法〕適用：接種箱、接種室和菇房消毒。常用藥物：40%甲醛溶液、硫磺、菇保一號、科達氣霧消毒盒、克霉靈氣霧消毒劑。編輯課件第二節(jié)母種制作一、母種培養(yǎng)基制作二、菌種分離三、母種擴繁編輯課件〔一〕營養(yǎng)液制作(PDA培養(yǎng)基)1.準備工作〔1〕材料馬鈴薯、葡萄糖〔或蔗糖〕、瓊脂、水?！?〕儀器用具及消毒藥品電爐子、鋁鍋、玻璃棒、漏斗、紗布、止水夾、漏斗架、切菜小刀、切板、1000ml燒杯、捆扎繩、棉花、試管〔18mm×180mm〕、試管架、鐵絲筐、1.5cm厚的長木條、標簽、天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、牛皮紙、皮筋、紗布、恒溫培養(yǎng)箱、手提式高壓滅菌鍋、超凈工作臺或接種箱、接種鏟、酒精燈、火柴、記號筆等。消毒藥品包括：75％的酒精棉球、0.25%新潔爾滅溶液、煙霧消毒王或菇保一號等。一母種培養(yǎng)基制作編輯課件

將學(xué)生分成幾組，分別負責(zé)切土豆、稱量水、稱量藥品、處理瓊脂等。

2.稱量、材料預(yù)處理編輯課件

將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入鋁鍋或電飯鍋中，煮至酥而不爛。3.熬制編輯課件4.過濾、加可溶藥物

用雙層紗布過濾，取濾汁，放在鋁鍋中參加糖。編輯課件在沸騰狀態(tài)下參加瓊脂粉，直到瓊脂完全溶化為止，定容至1000ml。5.加瓊脂，定容

編輯課件〔二〕營養(yǎng)液分裝1.用注射器或用帶止水夾的漏斗分裝

2.分裝量為試管長度的1/4—1/5。注意培養(yǎng)基不能沾污試管口。編輯課件

9或11支試管捆在一起，棉塞上包好防水紙，直立放入高壓滅菌鍋中。

棉塞松緊適度，1/3在管外，2/3在管內(nèi)。3.塞棉塞4.捆扎A正確B不正確編輯課件

在1.1kg/cm3壓力下維持30--40min?！踩硿缇庉嬚n件

滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/5的小縫，用余熱烘干報紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/2(四)擺斜面

編輯課件概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過程

關(guān)鍵：無菌操作接種在嚴格消毒滅菌條件下進行的操作無菌操作概念要點接種環(huán)境消毒滅菌酒精棉球消毒雙手開啟的管口、瓶口靠近燈焰拔出的棉塞勿觸及任何地方動作快，接種時間勿太長編輯課件〔一〕概念菌種別離：用無菌操作的方法將所需要的食用菌從混雜的微生物群體中單獨別離出來的過程?！捕酬P(guān)鍵嚴格按無菌操作規(guī)程進行無菌操作：任何一個操作過程都要注意防止把其它任何無關(guān)的菌體帶入到培養(yǎng)基中。注意二點：1．嚴格樹立無菌觀念；2．嚴格遵循無菌操作規(guī)程。〔三〕方法食用菌的別離方法很多，常用的有組織別離法、孢子別離法。二菌種別離編輯課件〔1〕概念將食用菌的局部組織移接到斜面培養(yǎng)基上獲得純培養(yǎng)的方法。〔2〕特點：①屬于無性繁殖，能保持原有菌株的優(yōu)良種性，是獲得純菌種的常用方法，且簡單易行。③假設(shè)種菇感染病毒，不易脫毒。1．組織別離法〔無性繁殖〕編輯課件〔3〕根據(jù)切取的組織來源不同，組織別離可分為子實體組織別離、菌核菌索組織別離和機內(nèi)菌絲別離三種方法。生產(chǎn)上最常用的是子實體組織別離。子實體組織別離：從食用菌的子實體上切取一塊組織，通過別離培養(yǎng)而獲得母種的方法。菌核菌索組織別離：在菌核菌索上切取一塊組織，通過別離培養(yǎng)而獲得母種的方法。機內(nèi)菌絲組織別離：在培養(yǎng)基中直接挑取生長的菌絲，通過別離培養(yǎng)而獲得母種的方法。編輯課件取大型傘菌子實體菌柄與菌蓋交界處

或菌柄上部的菌肉，別離效果最好。編輯課件編輯課件金針菇是橫切菌蓋上薄的菌肉或取未開傘的幼嫩子實體的菌褶片編輯課件靈芝組織別離所取的部位是菌蓋邊緣的白色生長圈編輯課件木耳等膠質(zhì)菌類的菌肉薄，子實體經(jīng)無菌水反復(fù)沖洗后，撕開子實體或用刀片將兩層耳片切開，挑取一小塊菌肉組織即可。編輯課件操作過程〔以子實體組織別離為例〕：種菇選擇：選擇頭潮菇、外觀典型、大小適中、菌肉肥厚、顏色正常、尚未散孢、無病蟲害、長至七八分成熟的優(yōu)質(zhì)單朵菇作種菇。種菇消毒：0.1%升汞溶液或75%酒精，浸泡或擦拭，無菌水沖洗，吸干外表的水分。切塊接種：將別離種菇沿柄中心縱向掰成兩半，用解剖刀在菇蓋柄交接處劃成田字形，取黃豆大一小塊菌肉組織，接在斜面培養(yǎng)基上。培養(yǎng)純化：在25℃下，培養(yǎng)2～4d長出白色絨毛狀菌絲體，當(dāng)菌絲延伸到基質(zhì)上后，用接種針挑取菌絲頂端局部，接種到新的斜面培養(yǎng)基上，長滿管后即為母種。編輯課件編輯課件2、孢子別離法孢子是食用菌的有性繁殖單位，能自動從成熟的子實體上彈射出來。

孢子別離法是指在無菌條件下，使食用菌產(chǎn)生的孢子在適宜的培養(yǎng)基上萌發(fā)，長成菌絲體而獲得純菌種的方法。編輯課件孢子別離分為單孢別離法和多孢別離法兩種。單孢別離法：是在采集到大量孢子的根底上，經(jīng)過稀釋或使用單孢別離器等方法，使孢子之間互相分開，各個孢子單獨萌發(fā)出菌絲而獲得純菌種的方法，常用于雜交育種和其它研究。多孢別離法：是將多個孢子接種在同一培養(yǎng)基上，使其萌發(fā)，自由交配而獲得純菌種的方法。編輯課件孢子別離法的優(yōu)點〔1〕有性孢子具有雙親的遺傳特性，變異性大，是選育新菌株和雜交育種的好材料，可供選擇優(yōu)良菌株的時機較多。〔2〕孢子的生命力強，所得菌種生活力旺盛。因此，又常被用作菌種復(fù)壯的手段。別離到的菌株要通過出菇試驗才能確定其是否好的菌種。編輯課件步驟種菇消毒采收孢子接種孢子整菇插種法

鉤懸法

編輯課件在無菌條件下，可用75%的棉球?qū)ΨN菇進行外表消毒，或用0.1%的升汞溶液浸1-2分鐘，再用無菌水沖洗三次，無菌紗布吸干外表水分。1.種菇的消毒編輯課件2.采收孢子整菇

插種法種菇插在孢子收集器中

使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用

前

滅

菌25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料

培養(yǎng)皿蓋嚴編輯課件鉤懸法25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料編輯課件放入接種箱用于孢子別離的平菇，經(jīng)過8～12小時后就有孢子彈出，一般放１晝夜培養(yǎng)皿中就有厚厚一層白色孢子印，這時要及時進行接種。一朵菇體彈射的孢子量可接種10支以上試管種，接種完成后貼上標簽放入25℃左右的恒溫箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，前3～4天為孢子定植期，外表看不出任何變化，7天以后孢子開始萌發(fā)并在四周長出白色絨毛狀菌絲體，16～18天左右菌絲布滿培養(yǎng)基面，即得純菌絲母種，如有污染管應(yīng)及時棄除。3.接種與培養(yǎng)編輯課件多孢別離法斜面劃線法在無菌條件下，用接種環(huán)從采集的孢子上蘸取少量孢子，在試管斜面上自下而上劃線，待孢子萌發(fā)長出菌絲后自由結(jié)合，挑選長勢好的轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)既得純菌種。編輯課件編輯課件編輯課件三、母種的轉(zhuǎn)接母種轉(zhuǎn)接，也稱轉(zhuǎn)管、母種的繼代培養(yǎng)。由于別離或引進的原始母種數(shù)量有限，不能滿足生產(chǎn)所需，因此，需進行擴大培養(yǎng)，通常原始母種允許擴大轉(zhuǎn)接３~４次。母種的轉(zhuǎn)管次數(shù)不宜過多，否那么會降低菌種的生活力，影響栽培效果。不具備條件和技術(shù)的部門不應(yīng)擴接母種。編輯課件1.將接種用