實驗四腸道致病菌分離鑒定病原生物學(xué)教研室Content示教：主要腸道桿菌，大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌及變形桿菌的形態(tài)、染色性主要腸道桿菌的培養(yǎng)特性：SS平板/EMB平板主要腸道桿菌的生化反應(yīng)：雙糖、尿素分解反應(yīng)操作：肥達反應(yīng)糞便腸道致病菌的分離和鑒定——血清學(xué)

(*續(xù))錄像：

厭氧菌腸道桿菌的分類埃希菌屬志賀菌屬腸桿菌科沙門菌屬克雷伯菌屬變形桿菌屬ETEC,

EIEC,

EPEC,EHEC,

EAEC痢疾、福氏、鮑氏、宋內(nèi)傷寒，副傷寒，豬霍亂，腸炎腸道桿菌的基本特征形態(tài)結(jié)構(gòu)相似培養(yǎng)要求不高生化反應(yīng)活躍抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜抵抗力不強易發(fā)生變異糞便標(biāo)本腸道致病菌鑒別流程標(biāo)本鑒別培養(yǎng)基（SS培養(yǎng)基）生化反應(yīng)（雙糖管）血清學(xué)鑒定SS 平板挑取可疑菌落2個(無色,透明,小菌落)接種雙糖管培養(yǎng),觀察SS平板——分離腸道病原菌的強選擇培養(yǎng)基成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、乳糖、枸櫞酸鈉、硫代硫酸鈉、枸櫞酸鐵、膽鹽、煌綠中性紅（pH6.8-8.0，紅→橙黃）作用：乳糖，中性紅：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)→菌落淡黃色；大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色。膽鹽、枸櫞酸鈉、煌綠：抑制腸道非致病菌如E.coli的生長，對腸道致病菌抑制作用弱?？稍黾訕?biāo)本接種量以提高腸道病原菌分離率。病原菌:小,無色,透明非致病菌:大,紅色EMB平板病原菌:透明,無色非致病菌:紫黑色雙糖管發(fā)酵乳糖H2S試驗發(fā)酵葡萄糖(產(chǎn)酸產(chǎn)氣)及動力上層：乳糖,Fe2+固體下層：葡萄糖半固體指示劑:酚紅（pH6.8-8.4,黃紅）致病菌紅色非致病菌黃色▼觀察：乳糖 葡萄糖 動力 硫化氫

尿素酶＋+—————+++/－——大腸埃希菌痢疾志賀菌傷寒沙門菌副傷寒桿菌變形桿菌—++++++紅色黃色雙糖管結(jié)果觀察黃色黃色可疑腸道致病菌大腸埃希菌雙糖管接種方法穿刺—斜面接種法肥達試驗原理：傷寒沙門菌菌體O抗原傷寒沙門菌鞭毛Ｈ抗原甲型副傷寒沙門菌鞭毛H抗原肖氏沙門菌鞭毛

Ｈ抗原已知抗原病人血清中的未知抗體凝集肥達試驗操作：病人血清生理鹽水微量板12345678傷寒O0.2ml0.2ml傷寒H

0.2ml0.2ml副甲H0.2ml0.2ml肖氏H

0.2ml0.2ml1:201:401:801:1601:3201:6401:1280生理鹽水混勻Ag加樣方向抗原肥達試驗結(jié)果分析（1）凝集程度：（＋＋＋＋）上層液澄清，細菌全部凝集于孔底（＋＋＋）上層液基本透明，細菌大部分（75％）凝集于孔底（＋＋）上層液半透明，細菌在孔底有明顯凝集（＋）上層液混濁，孔底有少量凝集（－）不凝集，同于對照書寫報告：＋＋反應(yīng)的最高稀釋度為凝集效價肥達試驗結(jié)果分析（2）凝集效價：傷寒沙門菌O≥

1：80，H≥

1：160副傷寒沙門菌H≥

1：80動態(tài)觀察：雙份血清，效價≥4倍O與H抗體的診斷意義：O—IgM,H—IgGO、H抗體均高：腸熱癥O、H抗體均低：未患病O抗體不高，H抗體高：回憶反應(yīng)，預(yù)防接種O抗體高，H抗體不高：感染早期，交叉反應(yīng)上次實驗結(jié)果觀察：膿汁標(biāo)本中的兩種菌落：黃